组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒（50次）

本产品可以通过QQ或者电话沟通询问，可以免费提供试用装与技术服务，解决您的后顾之忧。

产品组分

注： 裂解液MS有轻微腐蚀性,请不要直接接触。

          漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

保存条件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余试剂置于室温（15-25℃）干燥条件下保存1年。

消化缓冲液DS如有沉淀，在55℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA纯化效率。

产品说明

    本产品用于多种动物组织（新鲜或冻存）与培养细胞等样本的基因组DNA的纯化。其纯化原理是利用细胞裂解液裂解细胞核释放基因组DNA，由硅胶膜柱可逆

吸附基因组DNA，经蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等杂质后，用纯化液洗脱获得基因组DNA。本产品可从不超过10 mg组织材料或不超过1×10⁶-10⁷

培养细胞中提取到3-35 μg 超纯基因组DNA（OD₂₆₀/OD₂₈₀ = 1.7-1.9），此基因组DNA可直接用于PCR、酶切、文库构建等后续实验。

产品特点

• 高效：一次可获得3-35 μg基因组DNA。
• 快速：30min内即可获得超纯的基因组DNA。
• 通用：可从多种样本材料中获取基因组DNA。
• 安全: 整个操作中不用酚/氯仿有机物。
• 高纯度：无须再纯化即可直接用于下游实验。

组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒（50次）

产品用途

• 常规限制性酶切
• PCR扩增
• 文库构建
• Southern 杂交
• 分子标记分析

质量控制

纯化的基因组DNA质量通过限制性酶切和单拷基因的PCR扩增鉴定。

基因组DNA提取流程图

图1  基因组DNA纯化流程图

操作方法

1  材料处理

[动物组织]

    取少量样本材料，放入液氮预冷的研钵中。快速用力研磨的同时加入少量液氮，直至样本材料被研磨成粉末。将研磨好的样本转移至1.5 ml离心管中，每管组

织材料含量应不超过10 mg。

   注： 某些匀浆困难，或在匀浆过程中DNA容易降解的特殊组织应加液氮研磨。如DNA酶含量丰富的组织：肝脏、脾脏、胰腺、胸腺、淋巴等；胶原蛋白含量丰富的组织：皮

肤、肌腱等；角质蛋白含量丰富或坚硬的组织：骨骼等。

        如没有液氮。可用用剪刀剪成小块，放入研钵或匀浆器中，加入适量TE（pH 8.0），处理成细胞悬液。将不超过10 mg当量的细胞悬液转移至一个新的1.5 ml的离心管中，

12000 rpm离心1min，弃上清，收集沉淀。

    每支离心管中的样本当量不宜超过10 mg。每10 mg样本材料可获得10 μg基因组DNA。样本量过大，将会影响细胞核裂解效率并可能堵塞纯化柱，进而降低基因组DNA的得率

与纯度。

[细胞]

贴壁细胞：先用胰酶将贴壁细胞处理成细胞悬液，转移至1.5 ml离心管中12,000 rpm离心1min，弃上清。

悬浮细胞：直接取适量转移至1.5 ml离心管中12,000 rpm离心1min，弃上清。

     注：每只离心管内的细胞量不应超过1×10⁶-10⁷。

2  加入200 μl消化缓冲液DS，漩涡振荡直至形成完全均一的悬浮液。

    注：如需去除RNA，可加入4μl RNase A（100 mg/ml），振荡混匀。室温放置5min。

3  加入20 μl蛋白酶K和220 μl裂解液MS，漩涡振荡混匀。65℃温浴10min。溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。

   注：加入裂解液MS时可能会产生白色沉淀，一般65℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA 不

纯。        

     如果是比较致密难裂解的组织，可先加蛋白酶K混匀后，55℃温浴至完全溶解。再加MS混匀，65℃温浴10min。

4   加入220 μl无水乙醇，上下颠倒混匀。此时可能出现絮状沉淀，将溶液及絮状沉淀转移到纯化柱中。12,000rpm离心1min，弃滤液。

   注：此时基因组DNA被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。

5   加入500 μl去蛋白液PS。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

   注：此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、脂质等杂质洗脱，以获得高质量基因组DNA。

6   加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

   注：漂洗液PE初次使用前用无水乙醇按1: 3稀释，即含75%乙醇。

7   加入500 μl漂洗液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。

8     12,000 rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   注：此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR或酶切）。同时利于基因组DNA充分溶解。

9   将纯化柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加30-100 μl洗脱液TE。室温放置2min。12,000 rpm离心2min，管底即为高纯度基因组DNA。

-20℃保存。

   注：洗脱液TE可用去离子水代替，但其pH需为8.0-8.5。体积视质粒拷贝数多少、用户对质粒浓度要求而定。

          对洗脱液TE 60℃预热，会提高基因组DNA的产量。

图2  基因组DNA电泳图

注意事项

1  应尽量使用新鲜的实验材料，确保提取的基因组DNA不被降解。不能立刻提取基因组DNA 的实验材料应尽快置于液氮或-70℃冰箱中保存并避免反复冻融。

2  使用液氮研磨组织材料时，应随时加入液氮，确保提取的基因组DNA不被降解。

3  基因组DNA需长期保存时，建议使用纯化液TE。分装后保存于-20℃或-80℃。

基因组DNA的浓度及纯度检测

1  基因组DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯

度。

2  DNA 应在OD₂₆₀ 处有显著吸收峰， OD₂₆₀ 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链

DNA、40 μg/ml 单链DNA。

3  OD₂₆₀/OD₂₈₀ 比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用纯化液TE，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。