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通用RNA提取试剂盒（50次）

产品组分

需要自备的溶液

●  氯仿

●  无水乙醇

产品说明

通用RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品，提高了裂解液的裂解能力和提取的灵敏度，同时通过可在特定适宜的条件下特异、可逆地结合RNA，而各种蛋白质和其他杂质均可被去除掉对硅基质膜的改进增强了对RNA的吸附能力，得到的RNA 纯度更好，质量更高。该试剂盒可从各种细胞或组织中快速提取总RNA，每个吸附柱每次可处理50–100 mg 组织或5×10⁶ 细胞，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA 没有DNA 和蛋白的污染，可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。

产品特点

• 操作简单，可在一个小时内完成实验
• 稳定的得率
• 高纯度产物，可用于多种下游实验

保存条件

2-8℃避光保存9-12个月。

通用RNA提取试剂盒（50次）

注意事项-------------------------------------------------------------------------------------------------

•  严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中勤换手套。
•  使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。在极少数情况下（与组织pH值等相关），如果有DNA污染而又必须去除，则可以用RNase-free的DNase处理样品。
•   请严格遵照操作步骤操作。
•   不同起始材料试剂用量及预期RNA产率。
• RNA浓度=（OD₂₆₀-OD₃₂₀）稀释倍数0.04μg/μl

操作步骤-------------------------------------------------------------------------------------------------

第一次使用前应在溶液 RPI、溶液 RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

1. 样品处理

a. 组织：将组织在液氮中磨碎。每 50–100 mg 组织加1 ml 溶液 RL，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液RZ 体积的十分之一。

b. 单层培养细胞：直接在培养板中加入裂解液RZ 裂解细胞，每10 cm² 面积加1 ml溶液 RL。用取样器抽打几次。

注意：溶液 RL 的加入量根据培养瓶面积决定，不是由细胞数决定。如果加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。

c. 细胞悬液：离心取细胞，弃上清。每5–10×10⁶ 动物细胞和植物细胞加入1 ml 溶液 RL。加溶液 RL 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。

2. 将匀浆样品在15–30℃放置5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤： 4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 离心5分钟，取上清，转入一个新的无RNase 的离心管中。

注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可加此步骤离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，RNA存在于上清

溶液中。

4. 加入200 μl 氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 s，室温放置3 min。

5. 4℃ 12,000 rpm (~13,400×g) 离心10 min，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA 主要在水相中，水相的体积约为所用溶液 RL试剂的60%。把水

相转移到新管中，进行下一步操作。第一次使用前应在溶液 RPI、溶液 RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

6. 缓慢加入0.5 倍体积无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀）。将得到溶液和沉淀一起转入纯化柱中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，若一次不能将全部溶液和

混合物加入纯化柱，请分两次转入纯化柱中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃掉收集管中的废液。

7. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RPI（使用前请先检查是否已加入乙醇），4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃废液。

8. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 RW（使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 min，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃废液。

9. 向纯化柱 中加入500 μl 溶液 RW，室温静置2 分钟，4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s，去除残余液体。

10. 将纯化柱入2ml 收集管中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min，去除残余液体。

注意：此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除，离心后将纯化柱在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续

的RT等实验操作。

11. 将纯化柱转入一个新的离心管中，加30–100 μl RNase-free ddH2O，室温放置2 min，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。

洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防降解。

注意：如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。