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血液总RNA提取试剂盒（50次）

产品组分

注意事项------------------------------------------------------------------------------------------------

• 操作前在溶液NL中加入巯基乙醇至总浓度为1%，如1ml溶液NL中加10μlβ-巯基乙醇。裂解液最好现配现用。配好溶液NL4℃可放置一个月，在储存时可能会出现沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。

•  第一次使用前应该在溶液MP、溶液MW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

•  严防操作环境、使用的容器、耗材和试剂的RNase污染。操作过程中要勤换手套。

• 使用本产品提取的RNA一般不含有DNA污染。极少情况下（于组织pH值相关），如果有DNA污染必须去除，则可以用RNase-free的DNase处理样品。

•  请严格遵照操作步骤操作。

血液总RNA提取试剂盒（50次）

操作步骤------------------------------------------------------------------------------------------------

1. 取200-500μl新鲜血液，加入1ml裂解液NL，再加入10μl巯基乙醇，混匀，冰浴5min；

2. 加入200 μl 氯仿，轻微混匀，静置3min，12,000rpm离心10min；

3. 此时，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA 主要在水相中，水相的体积约为所用溶液 NL试剂的60%。把水相转移到新管中，进行下一步操作。第一次使用前应在溶液 MP、溶液 MW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

4. 缓慢加入0.5 倍体积的无水乙醇和1μlRG溶液，混匀，室温放置2min（此时可能会出现沉淀）。将得到溶液和沉淀一起转入纯化柱中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，若一次不能将全部溶液和混合物加入纯化柱，请分两次转入纯化柱中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃掉收集管中的废液。

5. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 MP（使用前请先检查是否已加入乙醇），4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃滤液。

6. 向纯化柱中加入500 μl 溶液 MW（使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2 min，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 s，弃滤液。

7. 向纯化柱 中加入500 μl 溶液 MW，室温静置2 min，4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s，去滤液。

8. 将纯化柱转移到2ml 收集管中，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min，去除残余液体。

注意：此步骤目的是将纯化柱中残余的漂洗液去除，离心后将纯化柱在室温放置片刻，或置于超净工作台上通风片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验操作。

9. 将纯化柱转入一个新的离心管中，加30–100 μl RNase-free ddH2O，室温放置2 min，4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心2 min。

洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。且RNA应保存在-70℃，以防止降解。

10.  注意：如果想提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。