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PCR产物及DNA片段纯化试剂盒（50次）
货号 | 规格 | 价格 |
N1091 | 50次 | 280 |
N1092 | 100次 | 510 |
N1093 | 200次 | 945 |
产品组分
组分 | 货号 |
N1091 | N1092 | N1093 |
溶液BD | 20 ml | 40 ml | 80 ml |
溶液PE | 15 ml | 15 ml×2 | 20 ml×3 |
溶液Eluent | 2.5 ml | 5 ml | 10 ml |
DNA纯化柱 | 50个 | 100个 | 200个 |
说明书 | 1份 | 1份 | 1份 |
注：溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。
溶液BD中含有变性剂，请不要直接接触皮肤。
上述产品组分均可单独购买，详见产品索引。
保存条件
室温保存2年。
产品说明
本产品采用传统的硅胶柱膜吸附技术，用于从PCR或其他各种酶促反应液中纯化DNA片段（50 bp-40 kb）。其纯化原理是硅胶膜柱高效可逆地吸附体系中的DNA
片段（高盐、低pH值），同时去除酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质，被吸附的DNA再在低盐、高pH值条件下再被洗脱纯化。一次可回收30 μg高纯度DNA
片段，此DNA片段可直接用于各种酶促反应等。
产品特点
产品用途
常规限制性酶切
PCR扩增
转化
DNA序列测定
体外转录
质量控制
从PCR扩增产物中纯化50 bp和1000 bp的DNA片段。
PCR产物纯化流程图
图1 PCR产物纯化流程图
操作方法
1 确定PCR反应液或其他酶促反应液的体积。将PCR反应液或其他酶促反应液转移至一个新的1.5 ml离心管中，向其中加入等体积溶液BD。混合均匀。
2 将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中，静置2min。
3 12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上。
若溶液体积大于纯化柱容积（800 μl），可分两次离心。
4 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
注：溶液PE初次使用前用无水乙醇按1: 4稀释，即含80%乙醇。
此步骤的作用是去除硅胶膜上吸附的酶蛋白、核酸引物、dNTP等其他杂质，以获得高质量DNA片段。
5 加入500 μl溶液PE。12,000 rpm离心1min，弃滤液。
6 12,000 rpm 离心 3min，以彻底去除纯化柱中的液体。
注：此步骤的作用是去除残留乙醇，避免残留乙醇影响后续酶促反应。同时也利于DNA片段的充分溶解。
7 将离心柱置于新的1.5 ml离心管中。向纯化柱的中央处，悬空滴加30-100 μl溶液Eluent（60℃预热），静置2min。12,000 rpm 离心1min，管底即为目的DNA
片段。贮存于-20℃。
注：溶液Eluent可用无菌双蒸水代替，但其pH需为8.0-8.5，加入体积视DNA目的片段的多少、用户对目的片段浓度要求而定。
对溶液Eluent 60℃预热，会提高提取DNA目的片段的产量。
图2 PCR产物纯化电泳图
注意事项
1 本试剂盒适用于无选择性的回收体系中所有的DNA 片段。如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，建议选择凝胶回收试剂盒。
2 本试剂盒纯化柱的DNA吸附能力强。如果DNA浓度小，或DNA初始量少，回收率将会偏低。
3 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12,000 rpm（约13,400×g）。
4 溶液 Eluent（10 mM Tris-HCl, pH 8.5）中不含EDTA，其收集的DNA片段可直接用于各种酶促反应等，不会影响后续试验。
DNA 浓度及纯度检测
1 回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰， OD260 值为1 相当于大约50 μg/ml 双链DNA、40 μg/ml 单链
DNA。
2 OD260/OD280 比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
