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DNA甲基化芯片
1.灵活度高能够直接对任意物种的高甲基化片段进行测序无需已知的基因组序列信息。
2.检测范围广覆盖整个基因组范围的甲基化区域。
3.精确度高能够在实际结合位点50个碱基范围内精确定位。
4.数字化信号直接对甲基化片段进行测序和定量不存在传统芯片杂交的荧光模拟信号带来的交叉反应和背景噪音问题。
甲基化测序技术优势
1.灵活度高能够直接对任意物种的高甲基化片段进行测序无需已知的基因组序列信息。
2.检测范围广覆盖整个基因组范围的甲基化区域。
3.精确度高能够在实际结合位点50个碱基范围内精确定位。
4.数字化信号直接对甲基化片段进行测序和定量不存在传统芯片杂交的荧光模拟信号带来的交叉反应和背景噪音问题。
甲基化测序服务流程
1. 甲基化DNA免疫共沉淀MeDIP;
2. 测序文库构建 双链DNA末端修复及3’末端加’A’ 使用特定的测序接头连接DNA片段两端 高保真聚合酶扩增构建的测序文库;
3. DNA成簇Cluster扩增;
4. 高通量测序Illumina Genome Analyzer IIx;
5. 数据分析 原始数据读取 与数据库比对并进行注释 确定甲基化位点 深层次数据分析;
6. 提供实验报告 原始数据报告Fasta-Q格式包含所有测序序列信息碱基读取质量评估 基本数据分析报告Excel表格包含有效序列的序列信息、与参考基因组比对后的注释信息等。 高级数据分析应客户要求定制如甲基化区域enriched region鉴定分析两样本间甲基化水平有差异的区域并注释结合表达谱分析其对基因的表达调控。
甲基化测序最新方法
SMRT技术采用的是对DNA聚合酶的工作状态进行实时监测的方法。DNA聚合酶催化荧光标记的核苷酸掺入到互补的核酸链中。核苷酸的掺入被检测成荧光脉冲,依据其颜色鉴定出核苷酸。当聚合酶切断连接在核苷酸末端的荧光基团时,脉冲终止。荧光脉冲的到达时间和持续时间产生了关于聚合酶动力学的信息,从而允许直接检测DNA模板链中的修饰核苷酸,包括N6-甲基腺嘌呤、5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶。