第二章 HIV抗体检测-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）

 全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）
第一章 样品的采集和处理-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版） 
第二章 HIV抗体检测-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）      
第三章 HIV-1抗原检测-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）      
第四章 HIV核酸检测-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版      
第五章 HIV-1耐药检测-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版      
第六章 CD4+和CD8+T淋巴细胞检测-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版      
第七章 HIV-1的分离培养-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版        
第八章 实验室生物安全-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版          
第九章 艾滋病检测实验室质量管理-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版        
附表-全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版    

第二章 HIV抗体检测

1 范围

本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。

 

2 规范性引用文件

《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008）

Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region. WHO Draft 19 July 2008.

Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006.

Guidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in resource-limited countries. Atlanta, 5 June 2006.

Revised Guidelines for HIV Counseling, Testing, and Referral. U.S. CDC 2001.

Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China. Journal of Medical Virology, 2009, 81: 790-797.

 

3 HIV抗体检测实验室要求

应符合《全国艾滋病检测工作管理办法（2006）》中对实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。

实验室的质量保证和实验室安全防护按本规范相关章节规定执行。

 

4 HIV抗体检测的目的和要点

4.1 HIV抗体检测的目的

4.1.1 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。

4.1.2 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。

4.1.3 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。

4.1.4 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。

4.2 HIV抗体检测的要点

4.2.1 根据目的选择检测方法及检测策略。

4.2.2 严格遵守实验室SOP。

4.2.3 筛查试验阳性，须作确证试验。

4.2.4  筛查试验阴性， 不应做确证试验。

4.2.5 筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。

 

5 以诊断为目的的检测策略

5.1 常规HIV抗体检测的方法和程序

HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。

5.1.1 筛查试验

5.1.1.1 筛查试剂

必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。

5.1.1.2 筛查样品

HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。

5.1.1.3 筛查方法

（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）

可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

（2）化学发光或免疫荧光试验

这类试剂采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

（3）快速检测（RT）及其它检测试验

这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在10～30分钟内得出结果。

    明胶颗粒凝集试验（PA）：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。

免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：均以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。

免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。

5.1.1.4 筛查程序

（1）初筛试验

根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。

（2）复检试验

对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图1）。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-1 p24抗原或核酸检测，必要时进行随访。

艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。

（3）初筛和复检流程 （图1）

样品

初筛试验

筛查试剂

阳性反应

阴性反应

复检试验

原有试剂

+

另一不同原理

（

或厂家

）

试剂或另外两种

不同原理

（

或厂家

）

试剂

均阳性反应

一阴一阳

均阴性反应

确证试验

报告阴性

图

1

HIV

抗体筛查检测流程

 

（4）筛查试验结果的报告

HIV抗体筛查试验用附表1进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。

（5）筛查试验呈阳性反应样品的转送

如需送上级实验室进行复检，需要核对身份，补充个人信息（如姓名和身份证号码），必要时采集第二份血样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复检。HIV抗体复检试验用附表2 进行报告，两次检测均阳性或一阴一阳报告为 “HIV抗体待确证”；两次检测均阴性报告为“HIV抗体阴性（-）”。HIV抗体复检报告需由1名检验人员和1名审核人员签字。

5.1.2  确证试验

5.1.2.1 确证试剂

必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。

5.1.2.2 确证样品

可采用血清、血浆、滤纸干血斑样品。

5.1.2.3 确证方法

包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）等。

5.1.2.4 确证流程 （图2）

使用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（－）；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性（＋）；如果不是阴性反应，但又不满足阳性判断标准，则报告HIV抗体不确定（±）。结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。随访期间可根据需要，检测病毒核酸或P24抗原作为辅助诊断。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，根据实际情况需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确证试验或HIV-2核酸检测，以进一步明确HIV-2感染状态，疑难样品送国家艾滋病参比实验室进一步分析。

结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视情况决定是否继续随访。

筛查试验阳性反应样品

阴性反应

HIV

-

1

阳性反应

不确定反应

出现

HIV

-

2

指示条带

确证试剂

报告阴性

报告

HIV

-

1

阳性

根据具体情况进一步检测

HIV

-

2

图2 HIV抗体确证检测流程

5.1.2.5 HIV抗体确证试验结果的判定

（1）HIV-1抗体阳性

同时符合以下2条标准可判为HIV-1抗体阳性：①至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1条env带和p24带同时出现；②符合试剂盒提供的阳性判定标准。

（2）HIV-2抗体阳性

出现HIV-2型特异性指示带的样品：如果同时呈HIV-1抗体阳性反应，报告HIV-1抗体阳性，不推荐进一步做HIV-2抗体确证试验；如果同时呈HIV-1抗体不确定或阴性反应，需用HIV-2型确证试剂再做HIV-2的抗体确证试验。

同时符合以下二条标准，即出现至少2条env带（gp36和gp140/ gp105），和试剂盒提供的阳性判定标准，可判为HIV-2抗体阳性。

（3）HIV抗体不确定

出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。

注：①HIV-1抗体特异带包括：env带：gp160/gp120、gp41；gag带：p55、p24、p17（或p18）；pol带：p66（或p65）、p51、p31。②HIV-2抗体特异条带包括：env带：gp140/gp105、gp36；gag带：p56、p26、p16；pol带：p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2 env带也可为gp125/gp80、gp36）。

（4）HIV抗体阴性

无HIV抗体特异带出现。

5.1.2.6  HIV抗体确证试验结果报告

HIV抗体确证试验结果用附表3报告。

（1）符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（＋）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（＋）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。

（2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（－）”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测，尽早明确诊断。

（3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明“4周后复检”。

5.1.2.7 发出确证报告的同时要做好检测后咨询。

5.1.2.8 HIV抗体确证报告由检测者，复核人员和签发人员签字后，按原送检程序反馈一式三份（确证实验室一份、送检单位一份、患者一份）。如确证对象户口不属于本辖区，确证报告应同时抄送感染者户口所在地的省艾滋病确证中心实验室。其它系统确证的地方人员，也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确证中心实验室报告。

5.1.2.9 省艾滋病确证中心实验室难以确证的样品，送国家艾滋病参比实验室确证。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确证结果时，由国家艾滋病参比实验室予以仲裁。

5.2 其它HIV抗体检测的方法和程序

5.2.1 VCT替代检测策略

除上述常规检测程序以外，对HIV高流行地区高危人群的VCT检测，可采用替代策略。

5.2.1.1 使用要求

使用替代策略，应在确证中心实验室和确证实验室或以上实验室指定的筛查实验室进行，用临床试剂质量评估敏感性和特异性高的筛查试剂检测。使用该策略判断结果，阳性报告须由确证中心实验室和确证实验室或以上实验室认可的筛查实验室出具。

5.2.1.2 检测程序及结果报告 （图3）

送检样品

阳性反应

阴性反应

筛查试剂

1

（

高敏感性

）

阳性反应

阴性反应

筛查试剂

2

（

高特异性

）

S

/

CO

≥

6

.

0

S

/

CO

1

.

0

～

5

.

9

筛查试剂

3

（

高特异性

ELISA

）

报告阳性

确证试验

阳性反应

不确定

阴性反应

随访

报告阴性

图

3

高危人群

VCT

检测流程

（1）先用第一种筛查试剂（高敏感性）检测，出现阴性反应报告HIV抗体阴性；出现阳性反应则报告“HIV抗体待复检”，用第二种筛查试剂复检。

（2）第二种筛查试剂（高特异性）复检，出现阴性反应进行确证试验；出现阳性反应用第三种筛查试剂进行确证。

（3）第三种筛查试剂（高特异性ELISA）检测结果阴性则报告HIV抗体阴性；检测结果阳性，且S/CO比值大于或等于6.0者，可以出具“HIV-1抗体阳性（+）”报告，使用“HIV抗体替代策略检测报告单”（附表4）。ELISA试剂检测结果阴性或S/CO在1.0～5.9之间，须进行确证试验。按照确证试验结果报告。

5.2.1.3 在发放检测报告的同时上报疫情。

5.2.1.4 做好检测后咨询。

5.2.2 HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程 （图4）

5.2.2.1 适用范围

HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。

5.2.2.2  检测程序及结果报告

（1）婴儿满12个月进行第一次HIV抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测，两种筛查试剂检测结果均为阴性反应，报告“HIV抗体阴性（－）”，可排除感染。检测结果出现阳性反应（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），不能排除感染，应继续追踪随访，至儿童满18个月时再次进行HIV抗体检测。

（2）婴儿满18个月时应再次进行HIV抗体检测。使用两种不同原理或不同厂家筛查试剂进行抗体检测。两种筛查试剂的检测结果均为阴性反应，报告“HIV抗体阴性（－）”，可排除感染。检测出现阳性反应（一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应），进一步进行确证试验，根据确证试验的结果判断是否感染HIV（图4）。

（3）在发放检测报告的同时上报疫情。

（4）做好检测后咨询。

 

5.2.3 HIV-1新近感染检测

HIV常规抗体检测方法可以判定感染和未感染状态，新近感染检测方法则用于识别近期感染与既往感染。目前，检测HIV新近感染的血清学方法中，研究和应用最多的是BED-EIA HIV-1捕获EIA方法（BED-CEIA），其原理是根据HIV特异性IgG占总IgG抗体的比例随着感染时间的延长而逐渐增高。应用BED-CEIA进行新近感染检测只适用于HIV阳性样品。由于个体间抗体生成的变异性，对个体而言，BED结果的预测值偏低，而且在个体水平上，BED检测可能产生一定的假阳性和假阴性，但在人群水平上，假阳性的数目与假阴性的数目相近，因此可以相互抵消彼此的作用。美国FDA将BED-CEIA归为“只应用于监测目的，不能用于个体诊断和临床”的实验方法。该方法用于监测及发病率计算的条件参见“HIV新近感染监测方案”。

5.2.3.1 新近感染检测样品的入选标准

（1）新近感染检测必须应用诊断为HIV-1阳性的血样，禁止将HIV阴性样品纳入新近感染检测。

（2）使用替代策略进行常规监测的地区，若将其HIV阳性样品纳入新近感染检测，对于BED－CEIA抗体梯度试验检测OD-n值<0.3的样品，需要对该样品进行确证检测，以排除潜在的HIV阴性样品。

（3）用于新近感染检测的样品，可以使用常规监测确证为HIV阳性的剩余/库存样品，不必重新采样。样品必须按照要求保存在-20℃以下，反复冻融次数小于3次。

（4）每份样品量不少于0.5ml。要求清亮、无严重溶血。

（5）没有交叉污染，个案信息全面准确。

（6）用于新近感染检测的阳性样品数量必须占总阳性样品的80%以上，否则不推荐纳入新近感染检测。

（7）如果同一人在3个月内出现2份或2份以上的确证阳性样品，将第一份样品纳入新近感染检测，其余样品从总样品中删除。

5.2.3.2 新近感染检测样品排除标准

（1）已经向监测系统报告过的感染者的样品（非初次诊断阳性者），该样品采集时间距HIV阳性检测记录已经超过3个月。

（2）所有艾滋病病人样品。

（3）所有接受抗病毒治疗病人样品。

5.2.3.3 参加新近感染检测的实验室每年至少接受二次国家参比实验室组织的能力验证（PT），通过考核后方可开始检测。

 

6 以监测为目的的检测策略

6.1 适用范围

全国艾滋病疫情监测。

6.2 检测程序及结果报告 （图5）

6.2.1 先用第一种筛查试剂（高敏感性ELISA）检测，出现阴性反应报告“HIV抗体阴性（-）”。出现阳性反应则用另一种不同原理或不同厂家的筛查试剂（高特异性ELISA）复检。

6.2.2 初筛和复检均为阳性，且样品OD值与临界值（Cutoff）的比值（S/CO）均≥6.0者可作阳性考虑，上报疫情（附表5）；初筛与复检任何一种试剂检测结果S/CO比值在1.0～5.9之间，或复检结果出现阴性反应，应进一步作确证试验，按照确证试验的标准判断结果（图5）。

 

6.2.3  发放检测报告的同时上报疫情。

6.2.4  对报告阳性者做好检测后咨询。

6.2.5 本程序仅用于流行病学监测和无关联检测，结果不得报告给个人。

 

7 以血液筛查为目的的检测策略

参照血液系统相关规定执行

 

8  艾滋病检测实验室检测信息上报

各级艾滋病检测实验室所在机构每月应填写《HIV抗体检测数及阳性人数统计报表》（附表6），并于每月10日前完成网络直报。未开展网络直报的单位，由县级疾病预防控制机构收集信息后统一上报。

 

9 质量控制

9.1 抗体检测的统计学室内质量控制

9.1.1 试剂盒内部对照

试剂盒内部对照质控品即为试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。试剂盒内部对照用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品使用。每一次检测临床样品时，必须有试剂盒内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。内部对照结果无效，必须重新试验。

9.1.2 室内质控品

为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2～3倍为宜。外部质控品的作用是，判断该批临床样品检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。室内质控品可以是商品或实验室自行制备。

9.1.2.1 室内质控品的使用和质量要求

每一次实验必须使用室内质控品，以便监控实验的重复性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异。室内质控品的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv＜20%，并且质控品应稳定、无菌，且不含有影响试剂反应的防腐剂。

9.1.2.2  统计室内质控的主要表示方法—建立质控图

最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，该图使用累计和技术或趋势分析技术的图形提供系统偏移和漂移的状况。下面以ELISA方法检测HIV抗体为例，描述建立质控图步骤：

9.1.3.1 建立质控图参数

外部质控品的均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对外部质控品重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少20个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5个批次的检测，每个批次中不少于4个质控血清测定结果，以建立一个临时性的均值和标准差，当达到20批次数据后，替代临时性的均值和标准差。

（1）算术平均值（ ）：代表一组质控血清测定的S/CO值的均值。为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20次（天）所测得的外部对照质控血清S/CO值结果计算出平均值。

（2）标准差（s）：是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与质控血清S/CO值均值有关的预期范围。一组S/CO值的标准差以s表示。

（3）变异系数（cv）：是反映各次S/CO值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。

（4）控制限：由实验室根据对外部质控品检测结果的均值和标准差来确定。例如1_2S质控规则的控制限为外部质控品S/CO均值加减2个标准差；1_3S质控规则的控制限为外部质控品S/CO均值加减3个标准差。

计算公式为：

 

                          Σx

                      = ──

                          n

     s 计算公式为：       ───────

                            ∑（ x_n -   ）²

                    s = ───────

                                n-1

     cv 计算公式为：

                           s

                   cv =   ──- × 100 %

                        

9.1.3.2  绘制质控图

质控图是把检测数据与已确定的（计算出的）“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并按时间顺序点入本实验室每批次试验质控血清的测定值。质控图绘制步骤包括：

（1）在常规条件下，对同一批血清连续测定20次（天）或以上，获得一组S/CO值，求均数（ ）和标准差（s）, 超出2s或3s的数据不应删除。

（2）将均值（ ）和标准差（s）分别在质控框架图中标示出来。以S/CO值作纵座标（Y轴），每一批次试验作横座标（x轴），绘制质控图。

（3）从第21次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。

9.1.3.3 质控规则及其使用

实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前有许多质控规则，常用的是1_2S和1_3S规则。

（1）告警（1_2S）：当外部质控品的S/CO值超出 +2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将1_2S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。

（2）失控（1_3S）：当外部质控品的S/CO值超出 +3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质控品 稳定性下降所致。

（3）漂移：连续几次（3～5次）外部质控品的S/CO值都落在均值的一侧则称为漂移，提示实验条件发生了较大的变化。

（4）趋势：连续几次（5～7次）外部质控品的S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。

质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系统的可靠性应采用多规则质控方案，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。其要点为：

出现一次2s范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。

出现下列情况时，应暂停检测查找原因：（1）出现一次超出3s范围的变化；（2）连续两次出现同一方向超出2s范围的变化；（3）连续四次出现同一方向的超出1s范围的变化；（4）连续10次结果都在1s范围内，但落在均值线的同一侧。

9.1.3.4  质控图的分析及失控处理

实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时，对原有外部质控品重复测定或更换新的外部质控品进行测定不是最有效的方法，必须找出问题发生的原因，找出解除问题的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。

绘制和分析质控图的要点:

（1）分析数据时，超出2s或3s的数据不应删除。

（2）由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。

（3）建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂，更换不同厂家的试剂后，须重新绘制质控图。改用新批号试剂如外部质控品测定出现较大变化也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂家的试剂,必须在质控图上注明使用日期。

（4）发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。

（5）使用新批次的外部质控品时，如测定值出现较大变化，须重新绘制质控图。变异系数（cv）小于20％，表示外部质控品处于稳定状态。

9.1.4 室内质控其他方式—“即刻法”质控

“即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即可对第3次检验结果进行质控。具体计算方法如下：

9.1.4.1 将质控血清的测定值从小到大排列：x₁，x₂，x₃……x_n（x₁为最小值，x_n为最大值）。

9.1.4.2 计算  和s。

9.1.4.3 计算SI_上限值 和SI_下限值。

SI上限=	X最大值-
	s

 

SI下限=	-X最小值
	s

9.1.4.4 将SI_上限、SI_下限与SI值表（表1）中的数字比较。

表1 SI值表

N	N3s	N2s	n	n3s	N2s
3	1.16	1.15	12	2.55	2.29
4	1.49	1.46	13	2.61	2.33
5	1.75	1.67	14	2.66	2.37
6	1.94	1.82	15	2.71	2.41
7	2.10	1.94	16	2.75	2.44
8	2.22	2.03	17	2.79	2.47
9	2.32	2.11	18	2.82	2.50
10	2.41	2.18	19	2.85	2.53
11	2.48	2.23	20	2.88	2.56

 

（1）当SI_上限和SI_下限<n_2s时表示处于控制范围内，可以继续测定。继续重复以上各项计算。

（2）当SI_上限和SI_下限有一值处于n_2s～n_3s值之间时说明该值在2s～3s范围，处于“告警”状态。

（3）当SI_上限和SI_下限有一值> n_3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”。

 “即刻法”只能在前20次内使用，超出即可采用L-J质控图方法。

9.2 快速检测质控

9.2.1 试剂内对照

在质控窗口内出现质控带，该质控带是试剂自带的内部过程质控，说明实验操作全部完成并且实验所用材料处于工作状态。清洁的检测区背景是内部阴性过程质控。如实验完成后未呈现红色质控带，说明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品须重检。

9.2.2 外部质控品对照

9.2.2.1 外部对照质控品，可采用商用质控品或自制质控品。质控品应包含抗体阳性样品和阴性样品。自制质控品可使用本室保留的阳性样品。不能使用酶联试验的外部质控品。

9.2.2.2 下列情况需做质量控制：更换试剂批号；更换检测人员；更换包装；每个检测日；更换试剂厂家。

9.2.2.3 出现以下问题，提示存在质量隐患，应引起重视：运输包装、内盒或试剂盒的物理损伤；在单包装内存在混杂物质；标签出现错误、缺失或字迹模糊（特别是产品名称或出产厂家名称，批号和货号，失效期或/和生产日期）；缺失目录；泄漏或污染；不适宜的存放条件；保护包装纸破损或污染；未达到质量控制标准（阳性/阴性控制结果以及质控条带出现与否等标志） 。

9.2.2.4 除上述情况以外，建议：每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于50份样品，至少应作2次质控。

9.2.2.5 开展快速检测的确证实验室须参加中国CDC组织的检测能力验证，开展快速检测的筛查实验室及检测点须参加省级或地市级CDC组织的实验室能力验证。