HPLC测定番石榴叶及其消渴降糖胶囊中槲皮素的含量

摘要： 目的采用HPLC测定番石榴叶及其制剂消渴降糖胶囊中槲皮素的含量。方法KromasilC18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.4%，磷酸溶液(55：45)；检测波长：372nm。结果槲皮素在0.1～1.0μg范围内具有良好的线性关系，相关系数r=0.9999，平均加样回收率101.07％，RSD=1.37％(n=5)。结论方法简便、准确、重现性好，可作为番石榴叶及其制剂消渴降糖胶囊中槲皮素的含量测定方法。
    关键词： 番石榴叶；消渴降糖胶囊；槲皮素； 高效液相色谱法；含量测定
    番石榴叶为桃金娘科植物番石榴Psidium guajavaL．的干燥叶及带叶嫩茎，分布于华南各地至四川西南部，含有β-谷甾醇、槲皮素、番石榴苷、无色矢车菊素、番石榴酸等成分。现代药理研究表明，番石榴叶提取出的总黄酮苷及单黄酮苷具有降血糖作用；其单味药制剂消渴降糖胶囊收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第十五册，用于轻度及中度成年糖尿病的治疗。番石榴叶及其制剂的含量测定未见报道，本实验采用高效液相色谱法对番石榴叶及消渴降糖胶囊中槲皮素的含量进行了测定，取得满意的结果。
    1 仪器与试药
    高效液相色谱仪，515泵，2487紫外检测器(美国Waters公司)；N-2000色谱工作站(浙江大学)；TU-1900紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。槲皮素对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号0081-9905)：番石榴叶为市场所购(产地广西)；消渴降糖胶囊为广西医科大学制药厂提供。水为双蒸水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
    2 方法与结果
    2．1 色谱条件
    色谱柱：Kromasil C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.4％磷酸溶液(55：45)；检测波长：372nm；流速：l.0mL／min：柱温：30℃；进样量：10μL。
    2．2 测定波长的选择
    取槲皮素对照品的甲醇溶液置紫外分光光度计中进行光谱扫描，其最大吸收波长为372nm，与文献报道的371nm基本一致，故选择372nm作为测定波长。
    2．3 线性关系的考察
    精密吸取浓度为0.1008mg／mL的槲皮素对照品溶液1、2、4、6、8、10mL，分别置1OmL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取10μL进样，测定其峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。其槲皮素回归方程为：A=1315133.149×C-7744.002，相关系数r=O．9999。结果表明，槲皮素在0.1～1.0μg范围内具有良好的线性关系。
    2，4 稳定性试验
    分别精密吸取同一供试品溶液(20030101)，于0、3、6、9、12h进样，测定槲皮素峰面积积分值。结果表明，12 h内峰面积积分值无大的变化，RSD=O.51％。
    2．5 精密度试验
    精密吸取同一供试品溶液(20030101)，重复进样5次，测定槲皮素峰面积积分值，其RSD=0.46％。
    2．6 重现性试验
    取同一批样品(20030101)5份，平行提取5份，测定槲皮素平均含量为0.7431mg／粒，RSD=1.37％。
    2．7 加样回收试验
    采用加样回收法，精密称取已测定含量的同一批号样品(20030101)5份，每份0.5g，分别精密加入浓度为0.0872mg／mL槲皮素对照品溶液l5mL和甲醇35mL，按样品测定项下游离槲皮素的含量测定方法处理，测定含量，并计算回收率。
    2．8 样品测定
    2．8．1 游离槲皮素 取消渴降糖胶囊10粒内容物，精密称定，混匀，取约1g，精密称定，精密加入甲醇5OmL，称定重量，置水浴上加热回流30min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，注入高效液相色谱仪。
    2．8．2总槲皮素取消渴降糖胶囊内容物约1g，精密称定，精密加入甲醇一盐酸(19：1)50mL，同法处理及测定。
    2．9 番石榴叶药材的测定
    取药材细粉3g，精密称定，同上法处理并测定游离槲皮素及总槲皮素含量。
    3 讨论
    本实验采用液相色谱测定，该法简单快速，稳定准确，其槲皮素峰与相邻峰分离较好，可作为番石榴叶及消渴降糖胶囊的含量测定方法。番石榴叶总槲皮素含量是游离槲皮素的13倍，由于槲皮素是黄酮苷元，说明番石榴叶中槲皮素主要以结合形式存在于黄酮苷中。
消渴降糖胶囊每粒相当于原药材3g，以游离槲皮素计算，其转移率为62％；而以总槲皮素计算，其转移率只有7.8％。说明消渴降糖胶囊的水煮醇沉工艺欠妥，其有效成分总黄酮苷转移率太低，这与黄酮苷易溶于醇、较难溶于水的化学性质有关。建议厂家改进生产工艺，采用醇提取，以提高有效成分含量及番石榴叶的利用率。
参考文献：
[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草(第五册)[M]．上海：上海科学技术出版社，1998．642．
[2]陈德昌．中药化学对照品工作手册[M] ．北京：中国医药科技出版社，1999．169．
[3]卫生部药典委员会．卫生部药品标准中药成方制剂第十五册[S]．1997．182．