人鼠疫抗体（Plague-Ab）ELISA检测试剂盒操作步骤

人鼠疫抗体（Plague-Ab）ELISA检测试剂盒操作步骤

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；

3. 待测样本孔加待测样本50μL；

4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

（来源：上海一研生物科技有限公司）

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