RNA的吸印转移法（Northern blot）
- 来宝网2007年7月16日 14:04 点击：1464
在RNA凝胶电泳之前，先用乙二醛等变性剂处理RNA，再在适宜条件下电泳使充分变性的RNA直接吸印到硝酸纤维膜上。固定后除去变性剂，然后进行杂交。
试剂：
乙二醛：4mol/L（约为30%），经过阴阳离子交换树脂纯化，使pH为5.5～6.0
磷酸缓冲液：80mmol/L pH6.5～7.0 磷酸缓冲液：10mmol/L pH6.5～7.0
Tris-HCl:20mmol/L pH7.8 二甲基亚砜：分析纯 20×SSC：0.3mol/L柠檬酸钠，3mol/L NaCl
（来源： 来宝网 ）
试剂：
乙二醛：4mol/L（约为30%），经过阴阳离子交换树脂纯化，使pH为5.5～6.0
磷酸缓冲液：80mmol/L pH6.5～7.0 磷酸缓冲液：10mmol/L pH6.5～7.0
Tris-HCl:20mmol/L pH7.8 二甲基亚砜：分析纯 20×SSC：0.3mol/L柠檬酸钠，3mol/L NaCl
基本步骤
1.RNA变性
吸取1μl 80mmol/L磷酸缓冲液，1μl RNA样品（最多100μg），2μl，4mol/L 乙二醇，4μl二甲基亚砜。混匀后，50℃水浴1h，然后放入冰中。
2．电泳 变性结束后，加入含有50%甘油的10mmol/L磷酸缓冲液2μl和少量溴酚蓝，混匀后点样于1.0%的凝胶上，以4～5V/cm电压电泳。凝胶电泳液为10mmol/L磷酸缓冲液， pH6.5～7.0。
3．转移
变性处理后的RNA可以转移并结合到硝酸纤维膜上，转移过程和转移变性与DNA相同。
4．固定
用20×SSC转移RNA。膜夹在两层干净滤纸中晾干，80℃烤膜2h。
RNA膜固定后，放入20mmol/L Tris-HCl中，100℃处理5～10min，去除乙二醛，然后进行杂交。
全年征稿 / 资讯合作
联系邮箱：kefu@labbase.net
版权与免责声明
- 凡本网注明“来源：来宝网”的所有作品，版权均属于来宝网，转载请必须注明来宝网， //www.next-search.com，违反者本网将追究相关法律责任。
- 本网转载并注明自其它来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。
- 如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起一周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。
