反相高效液相色谱法测定镇祛平口服液3种主要成分的含量

[摘要] 目的采用反相高效液相色谱法测定镇祛平口服液中盐酸曲普利定(C)、愈创甘油醚(G)和氢溴酸右美沙芬(D)3种主要成分的含量。方法:色谱柱：YWG C18柱(150mmx5mm，10μm)；流动相：770mL甲醇-230mL重蒸纯化水(含5mmol/L庚烷磺酸钠，用磷酸调pH值为3.0)；在波长262nm处进行检测： 结果C在8.594～77.786μg/mL，G在188.8 ～1698.8μg/mL，D在41.08～369.72μg/mL。浓度范围内线性关系良好。C的回收率=99.9％，RSD=0.80％；G的回收率=101.6％，RSD为0.69%；D的回收率：100.5％，RSD为0.68％：结论 该法简便、快速、准确，可用于镇祛平口服液中3种主要成分的含量测定.
    [关键词]镇祛平口服液；曲普利定，盐酸；愈创甘油醚；氢溴酸右美沙芬；反相高效液相色谱法
    镇祛平口服液为祛痰镇咳药，主要用于治疗上呼吸道感染引起的急性咳嗽多痰。含有盐酸曲普利定(C)、愈创甘油醚(G)和氢溴酸右美沙芬(D)等多种成分，其中每100mL中含有C 0.4mg、G 10mg、D 2mg。有关C、G、D含量测定的高效液相色谱(HPLC)法国内外已有报道 ，但用HPLC法同时测定镇祛平口服液中C、G、D3种组分的含量笔者尚未见报道。笔者采用提取后消除赋形剂的干扰，用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法同时测定C、G和D3种组分的含量，简便、快速、准确，分离度好，可用于镇祛平口服液的质量控制。
    1 仪器与试剂
    HPLC仪(美国Waters公司生产)，包括5l0型泵、486型可变波长紫外检测器、U6K进样器、NEC计算机(800型色谱工作站)；对照品C、G和D以及镇祛平口服液均由香港联邦制药有限公司提供；水为重蒸纯化水，其他试剂均为分析纯。
    2 方法与结果
    2．1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱为YWGC18柱(150mmx5mm，10μm，中科院大连化学所)；流动相为770 mL甲醇-230mL重蒸纯化水(77：23)(含5mmol/L 庚烷磺酸钠，用磷酸调pH值为3.0)；检测波长：262nm；流速：1.0 mL/min；柱温：40℃ 。理论塔板数按氢溴酸右美沙芬计算≥3000。按处方称取不含C、G、D3种成分的空白样品，按含量测定方法处理，即得色谱图。
    2．2 标准曲线的绘制 精密称取对照品C 20mg，对照品G 500mg，对照品D 100mg，置于同一50mL容量瓶中，用重蒸纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；分别精密量取对照品储备液0.5，1.5，2.5，3.5，4.5mL置于25mL容量瓶中，用流动相稀 释至刻度，摇匀。分别精密量取20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以吸光度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，得C、D、G的回归方程和线性范围分别为：Ac=2.153 X 10000 +3.475 5 X 10000 Cc(r=0.9993，n=5)，8.594—77.786μg/mL；AG=2.591 X 100000+1.269 X 100000Cc(r=0.9999，n=5)，188.8—1 698.8μg/mL；AD=4.889X1000+3.1948X1000CD(r=0.9990，n=5)，41.08—369.72μg/mL。
    2．3 回收率试验
    按处方比例配制含C、G 、D为标示量80％一120％的模拟样品5份，按含量测定方法对C、G 、D进行提取测定，得C 、G、D的回收率.
    2．4 精密度实验取对照品储备液2.5mL置于25mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取20μL注入高效液相色谱仪，重复进样6次，以峰面积计算，RSD分别为0.30％，0.60％，0.44％。
    2．5 重复性实验精密吸取同一批号的样品5份，按含量测定方法测定样品，结果C、G、D含量平均值分别为99.8％，RSD=0.8％(n=5)；100.1％，RSD=0.7％(n=5)；99.9％，RSD=0.9％(n=5)。
    2．6 样品含量测定 精密吸取镇祛平口服液l0mL，置分液漏斗中，加5mol/L氢氧化钠溶液3mL，加氯仿30mL提取，再用20mL氯仿提取5次，合并提取液，以1mol/L 氢氧化钠溶液洗涤两次，每次5mL，提取液滤过，以氯仿l0 mL将滤器洗净，与提取液合并，置水浴上蒸干，以流动相溶解并转移至100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，混匀。精密量取20μL注入高效液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，即得。
    3 讨论
    HPLC法测定类似成分．一般采用两个流动相系统分步测定。在笔者测定镇祛平口服液的过程中，用一个流动相系统测定G时，赋形剂中的尼泊金丙酯的保留时间太长，使分析周期延长，故笔者结合有关文献报道，采用提取后消除赋形剂干扰，用反相离子对色谱法同时分离测定C、G、D 3种组分。试验发现，在该色谱条件下，pH值对G的保留时间影响不大，但降低pH值，能显著改善c和D的分离度，试验结果表明分离的最佳pH值为3.0。
【参考文献】
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信息来源：：医药导报2005年2月第24卷第2期