百萤问号—如何荧光标记外泌体?

外泌体——包含了复杂RNA和蛋白质的小泡膜（直径在40nm-100nm）

外泌体的发现及命名：1983年在绵羊网织红细胞中发现外泌体，1987年被命名为”exosome”。

外泌体的组成：外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP 70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白，但是不同来源的外泌体的组成有差异。

在所有细胞中，均可以分泌外泌体，并且它还存在于体液，包括血液、尿液、脑脊液、唾液、乳汁中。

外泌体提取方式：

1.超速离心法:目前常用的提取方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足。

2.过滤离心法：这种操作简便，不影响外泌体的生物活性 ，但纯度不足。

3.密度梯度离心法：前期准备工作繁杂，耗时，量少，但纯度高。

4.免疫磁珠法：特异性高、操作简单保证外泌体形态完整，但会影响外泌体生物活性。

5.PS亲合法：获得的外泌体形态完整，纯度高且不影响外泌体生物活性。

6.色谱法：分离的外泌体在TEM下大小均匀，但设备特殊。

外泌体鉴定方式：主要有四种方法：透射电子显微镜（TEM）、Nanosight、Western Blot和流式细胞术。

您可以使用以下任何一种亲脂性荧光染料标记膜和其他疏水结构，例如外泌体：

· DiOC16（3）高氯酸盐–大Abs / Em = 482/500 nm

· 细胞膜荧光探针DiI,高氯酸盐–大Abs / Em = 549/563 nm

· 细胞膜荧光探针DiD,高氯酸盐–大Abs / Em = 645/663 nm

· 细胞膜荧光探针DiR,碘化物-大Ab / Em = 754/778 nm

DiO（绿色荧光），DiI（橙色荧光），DiD（红色荧光）和DiR（深红色荧光）的独特荧光颜色为多色成像和流式细胞仪分析提供了方便的工具。

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