介绍热启动Taq DNA聚合酶的应用原理

　　介绍热启动Taq DNA聚合酶的应用原理

　　Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的·yT是 一种嗜热真细菌，能在70～75℃生长·该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离的。热启动Taq DNA聚合酶设计用于增强DNA扩增的特异性、敏感性和产量。使用该酶可在室温配制反应体系''使用非常方便。

　　热启动Taq DNA聚合酶是一种化学修饰的重组Taq DNA聚合酶''蛋白分子氨基酸残基上增加了热不稳定的封闭基团。该酶在室温下没有活性''避免形成引物二聚体和非特异性延伸。从而增加DNA扩增的特异性。95℃加热4分钟可恢复酶活性。活化的酶具有与热启动Taq DNA聚合酶相同的功能:催化5’→3’方向合成DNA、无可检测的3’→5’校正外切酶活性、具有较低的5’→3’外切酶活性。该酶还具有脱氧核糖核酸酶转移活性''在PCR产物的3’-端多加1个腺嘌呤。活化前检测不到这些活性。

　　热启动DNA聚合酶是来源于Thermu aquaticus DNA Polymerase基因''经DNA shuffling筛选''获得的突变体''其特性是在低温条件下''如室温或37℃''酶活性被抑制''避免DNA聚合酶的非特异性反应''而高温下酶活性被激活.它是一种全新的热启动Taq DNA聚合酶''从根本上解决了以往热启动酶的烦琐操作过程''以及抗体抑制的复杂性''其高保真特性和高特异性。推荐>>>TwistDx，RPA恒温扩增技术简介

　　热启动Taq酶(高特异Taq酶)：在 PCR 第一个循环变性之前，有一个升温的过程，引物和模板会有一些非特异性配对，如果这时 Taq 酶发挥活性，就很容易产生非特异性扩增，由于循环初期模板量非常少，产生的非特异性条带经过后面的指数扩增，就会严重干扰目的片段的扩增，甚至导致特异性条带不能扩出;而热启动 Taq 酶是必需经过高温才能激活的酶，因此在初始循环的变性之前它没有活性，不会产生非特异性扩增，这就大大提高了 PCR 扩增的特异性。

　　热启动Taq DNA聚合酶的优势：

　　1.高产量扩增复杂模板。

　　2.95℃加热4分钟可激活酶活性。

　　3.PCR特异性高-降低错配效应和减少引物二聚体的生成。

　　4.增强的PCR敏感性。

　　5.使用方便''室温配制PCR反应体系。

　　6.扩增产物具有3’-dA突出末端。

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