百萤Cell Meter FITC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒实验方案

在细胞凋亡中，PS 被转移到质膜的外叶。细胞表面磷脂酰丝氨酸的出现是细胞凋亡初期/中期的通用指标，可以在观察到形态变化之前检测到。该试剂盒使用特异性结合 PS 的绿色荧光 FITC-Annexin V 缀合物。FITC-Annexin V 缀合物已被证明可以选择性结合 PS。该检测试剂盒经过优化，可使用配备 488 nm 激光和 530/30 nm 发射滤光片（FITC 通道）的流式细胞仪监测细胞凋亡。

一、Cell Meter FITC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒实验方案：

简要概述

1.用测试化合物（200μL/样品）制备细胞
2.添加膜联蛋白V-FITC测定溶液
3.在室温下孵育30-60分钟
4.使用FL1通道（Ex / Em = 490/525 nm）用流式细胞仪分析细胞

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。注意：膜粘附细胞的膜联蛋白V流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。

2.离心细胞，得到2 - 5×105个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.将2μL膜联蛋白V-FITC（组分A）加入细胞中。

5.可选：加入2μL100X碘化丙啶（成分C）用于坏死细胞。

6.在室温下孵育30至60分钟，避光。

7.可选：在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加200至300μL的测定缓冲液（组分B）以增加体积。

8.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测膜联蛋白V-FITC的荧光强度。当碘化丙啶加入细胞时，使用FL2通道测量细胞活力。

二、Cell Meter FITC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒光谱性质

图为Cell Meter FITC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒光谱图

光谱特性

校正因子:         0.35

消光系数:         73000

Ex(nm):           491

Em(nm):           516

量子产率:          0.92