博赛生物抗体中心抗体定制中的部分相关问题

博赛生物抗体中心抗体定制中的部分相关问题

1、一般需要多少量的抗原才可以制备一个抗体？

 如果制备“多抗”，根据选择免疫对象不同，分以下几种情况：（1）山羊，需要5-10mg抗原；（2）兔子，需要3-5mg抗原；（3）小鼠，需要1-2mg抗原。如果制备“单抗”，需要大约3mg抗原。当然，根据抗原纯度、分子结构、免疫原性、分子量等不同所用抗原量会有所增减。

2、抗原要求

 对抗原的要求，尽量纯度高、免疫原性强、活性好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞，细菌，病毒等颗粒性抗原，可根据免疫对象取适量抗原直接免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂或不完全佐剂并经充分乳化后免疫，如为SDS-PAGE纯化后的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。还有一些小分子半抗原（如多肽等），在免疫之前需要偶联一些大分子载体蛋白，如KLH，BSA，OVA, HSA等。

3、抗体制备对于抗原有哪些要求？比如蛋白质的纯度，浓度，分子量。

 制备抗体时对抗原的纯度，活性，分子量等都有一定要求。一般来讲，蛋白的纯度要在90％以上，浓度在1mg/ml以上，分子量>10kDa。最好溶解在合适的缓冲液中 ，一般溶解在0.01M PH7.2的PBS中。

4、一只小鼠大约可以获得多少腹水？其中抗体的浓度是多少？

 一只Balb/c小鼠大约可以获得2ml的腹水，而F1小鼠可以获得3-5ml的腹水，抗体的浓度因抗原而有所变化，纯化前大约在10mg/ml。

5、每种免疫的动物大概可以获得的抗血清量是多少？

 1)免疫两只新西兰白兔或日本大耳白白兔，每只获得抗血清量大约50ml；2)免疫两只小鼠，每只小鼠获得的抗血清量约0.5ml; 3)免疫一只山羊，每只山羊可获得的抗血清量500ml左右。

6、制备出的抗体效价如何?

 我们承诺给客户方的最低标准是1：10000，但事实上我们所做的抗体，效价基本上都可以达到1：100000以上。

7、关于腹水的纯化，有哪些方法？一定需要纯化吗？

 纯化方法很多，常用的有几种：
 (a)饱和硫酸铵沉淀法，现在有改进的辛酸沉淀法，原理都是利用蛋白在高浓度的盐溶液中的盐析原理。这个方法操作比较简单，而且损失较少，但是只能除去腹水中的非Ig蛋白，所以不是很纯。

 (b)protein－A，protein-G层析法，亲和层析的柱材基质上共价联合着配体，配体可以和抗体发生可逆的特异性结合，在一定的条件下，单克隆抗体结合在柱子上，未结合的蛋白质被洗掉，然后改变实验条件，使单克隆抗体从柱子上洗脱下来，亲和层析具有高效，快速，纯化结果好的优点，但是也有一些缺点：成本高，费用大，损失多。这种方法纯化得到的抗体纯度较高，但是损失也很大。一般如果不是有很高的要求，实验室用抗体是不用这个方法纯化的。

8、抗体的保存

 短期保存：4摄氏度保存。

长期保存：-20摄氏度，一般需要加入合适的防腐剂。小包装，避免多次反复冻融。

9、制备一个抗体需要多长时间?

 制备“多抗”大概需要1-3个月，制备“单抗”大概需要3-6个月。