人抗丝集蛋白抗体（AFA）ELISA试剂盒使用说明书

人抗丝集蛋白抗体（AFA）ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：人抗丝集蛋白抗体（AFA）酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于定性测定人血清，血浆及相关液体样本中抗丝集蛋白抗体（AFA）。

实验原理

本试剂盒采用间接法测定标本中人抗丝集蛋白抗体（AFA）。用纯化的丝集蛋白（AFA）抗原包被微孔板，制成固相抗原，与样品中抗丝集蛋白抗体（AFA）温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人抗丝集蛋白抗体（AFA）的存在与否。，

试剂盒组成

标本要求

1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

操作步骤

1.         编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔

2.         加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，37℃温育45分钟。

3.         配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。

5.         加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟

6.         洗涤：操作同4。

7.         加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

8.         洗涤：操作同4。

9.         显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.     终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.     测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

结果判定：

  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

  阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为人丝集蛋白抗体（AFA）阴性