转基因构建35S启动子-GUS基因PCR试剂盒检测步骤

转基因构建35S启动子-GUS基因PCR试剂盒检测步骤：

一、试剂的准备

从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。

设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂每个反应加入的量 N个反应加入的量

荧光PCR反应液 14µL N×14µL

酶混合物 1 µL N×1 µL

总量 15 µL N×15µL

（1）计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。

7.2 qPCR反应条件

将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。

推荐循环条件:

1循环 50℃ for 2 min

预变性 1循环 95℃ for 10 min

PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

（来源：上海一研生物科技有限公司）

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