翻袋式离心机在VB。2细胞收集上的应用研究

丙酸菌厌氧法是目前国内生产VB。：的主要方法之一，生产过程中从发酵液中收集细胞采用板框过滤。由于发酵液粘稠且成分复杂，存在滤速慢、收率低、杂质包埋、批次间差异大等问题，是制约VB ：生产水平提高的主要因素。德国海因克尔公司生产的翻袋式离心机具有分离因数高、运行平稳可靠的优点，主要用于终端产品的过滤分离。但用于细胞分离方面未见报道，本实验对这种离心机用于VB ：细胞收集进行了研究。

1 材料与试验方法

1．1 材料

    VB ：发酵液(由河北中润制药有限公司提供)；去离子水；其他试剂为分析纯。滤布。

1．2 仪器设备

    翻袋式离心机(直径300 mln，德国海因克尔公司)；高效液相色谱仪(安捷伦一1100)、红外水分天平(德国沙多利斯)；电子天平(梅特勒一AX 205)；秒表；量筒等。

1．3 实验方法及操作

1．3．1 方法

   将VB ：发酵液计量体积，用翻袋式离心机过滤收集细胞，将细胞破壁检测VB ：含量以计算过滤收率。

1．3．2 操作步骤

   检查离心机确认完好后装好滤布。取处理好的发酵液精确计量体积并测定VB ：含量。开启翻袋式离心机。在转速2 500—3 000 r／rain下缓慢加入VB 拔酵液，收集滤液填入离心机至滤液完全澄清透明。连续加入发酵液，离心至无滤液流出。降低转速，缓慢加水浸洗滤饼，提高转速甩至无滤液流出。低速转动下将离心机的滤袋推出，提高转速甩出滤饼收集，停机。计量滤饼重量。同时收集滤液，计量滤液体积。分别送样测VB ：含量及滤饼含水量。连续处理5批，与同批次生产中板框过滤进行比较。全过程记录每步操作时间，试验结束后计算滤速、收率。

1．4 检验方法

    1．4．1 精密称取收集的VB ：细胞，水解破壁用氰化钠转化，以高效液相色谱仪进行检测。色谱柱：C 。，5 m，250 rain，流动相：乙腈2％磷酸二氢钠缓冲液=20：80，保留时间6．4 min。

    1．4．2 精密称取收集的VB ：细胞，用红外水分天平称重后红外加热至恒重，记录加热前后重量。1-5 计算方法收率=(滤饼中VB ：含量×滤饼重量)／(发酵液中VB ：含量x发酵液体积)滤饼含水量=(加热恒重前滤饼重量一加热恒重

后滤饼重量)／加热恒重前滤饼重量

2 结果

2．1 收率

    用翻袋式离心机处理滤液与生产中板框过滤的同批次发酵液比较收率结果，如表1所示。

表1翻袋式离心机与板框过滤收率比较



2．2 滤速

    用翻袋式离心机处理滤液与生产中板框过滤的同批次发酵液比较收率结果，如表2所示。



2．3 含水量

    用翻袋式离心机处理滤液与生产中板框过滤的同批次发酵液比较收率结果，如表3所示。



3 结 论

     用翻袋式离心机收集发酵液与生产上采用的板框过滤相比，不仅可以简化操作、降低劳动量、改善操作条件，而且滤速和收率都略有提高；残液量大大降低，有利于下一步操作；批次间差异很小，解决了滤速波动造成的收率降低和进度滞后，使规范化生产成为可能。因此，翻袋式离心机在VB。：细胞收集上优于板框过滤，可用于工业生产。开辟了细胞收集方式工业化的新思路。