反相色谱法测定有机化合物中甲苯的含量

实验目的：

1. 了解高效液相色谱仪的基本结构及基本操作；

2. 了解反相色谱法的基本规律；

3. 掌握利用内标法进行色谱定量分析的实验方法 。
　

实验原理：

高效液相色谱法的特点

1. 分析速度快
2. 分离效率高
3. 灵敏度高、易于实现操作自动化

高效液相色谱仪的基本组成

         HPLC的基本组成示意图
   输液系统 进样系统 色谱柱  检测器 工作站 废液瓶

             六通阀示意图

基本操作：

实验步骤：

1. 确定实验条件（流动相、流速、检测波长等）

2. 溶液的配制：

（1）内标物溶液的配制：准确称取一定量苯酚纯品，加甲醇溶解后制成0.400mg/mL的标准溶液 ；

（2）甲苯标准溶液的制备：准确量取一定量甲苯的标准品，加甲醇溶解后制成0.500mg/mL的标准溶液 ；

（3）样品溶液的制备：准确称取适量样品，加甲醇超声溶解，定容于100mL容量瓶中，过滤备用。

3.相对校正因子的测定：

    取1.00mL甲苯标准溶液和1.00mL苯酚标准溶液混合，待仪器稳定后，注入10µL混合溶液，记录色谱图，平行测定三次。
                        f’=AsWi/AiWs

4.样品分析：
    取1.00mL内标标准溶液和1.00mL样品溶液混合，待仪器稳定后，注入10µL混合溶液，记录色谱图，平行测定三次。
                      Wi=f’ Ai’ Ws’/As’
　

注意事项：

1. 检查流动相是否充足；

2. 待仪器稳定后，再进样；

3. 进样器要充分洗涤。