荧光共振能量转移(FRET)
- 西安百萤生物科技有限公司2024年1月3日 8:58 点击:512
荧光共振能量转移 (FRET) 是两个发色团(供体分子和受体分子)之间依赖于距离的能量转移。当靠近时,电子激发的供体生色团可以通过分子内长程偶极-偶极耦合相互作用以非辐射方式将能量转移到受体生色团。因此,能量的转移淬灭了供体的荧光强度并减少了其激发态寿命,同时增加了受体生色团的排放系数。由于 FRET 的效率取决于分子间分离的反六次方,因此它是一种有利的技术,可用于研究产生分子接近度变化的各种生物现象,包括受体-配体相互作用、空间分布、蛋白质复合物的组装以及膜电位传感。
AAT Bioquest 提供多种荧光供体和受体对以及非荧光Tide Quencher™和BXQ 染料,用于工程基于 FRET 的生物传感器,以及用于研究冠状病毒蛋白酶活性和免洗、时间分辨 FRET 测定的 FRET 肽。监测 G 蛋白偶联受体系统中腺苷酸环化酶的激活。
FRET 的三个主要条件
虽然许多因素会影响 FRET 效率,但 FRET 发生必须满足以下三个主要条件:
1.供体分子和受体分子必须彼此非常接近,通常为 10-100 Å (1-10 nm)。FRET 效率 (E) 由方程 E = R0⁶/(R0⁶ + r⁶) 定义,其中 R0是Förster半径,r 是供体分子和受体分子之间的实际距离。Förster半径是50%的激发能从供体转移到受体的距离,R0值通常在10-100 Å之间。由于FRET发生的可能性增加,在这个范围的较高端具有R0值的FRET对通常是首选的。
2.受体的吸收或激发光谱必须与供体的荧光发射光谱重叠(图1)。它们重叠的程度称为光谱重叠积分(Jλ,灰色阴影区域)。Jλ 的程度越大,发生 FRET 的可能性就越大。
3.供体和受体跃迁偶极子方向必须近似平行。
FRET光谱重叠积分的示意图(以灰色阴影显示)
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