透析知识

1. 透析袋原理

技术指标：MWCO（截留分子量），单位：Diatoms 。

透析时，小于MWCO的分子在透析膜二边溶液浓度差产生的扩散压作用下渗过透析膜，其速度与浓度梯度、膜面积及温度成正比。欲快速透析可采用直径较小的透析袋以增加膜面积。常用温度：4℃，升温、更换袋外透析液或用磁力搅拌器，均能提高透析速度。

2. 透析袋用途

透析即用半透膜（透析袋）将大分子蛋白质分离出来。在生物大分子制备过程中除去盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质和浓缩样品，透析法最简便。

3. 透析袋使用方法:

① 把透析袋剪成适当长度（10cm左右）的小段。

② 取适量透析袋处理液（Fast-Tre Solution）稀释100倍，将透析袋放于其中煮沸10分钟。 

③ 取出用蒸馏水彻底清洗透析袋。 

④ 暂不使用的话需要将透析袋完全浸泡到稀释100倍后的透析袋储存液（Long-Sav Solution）中，存放于4度。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 

⑤ 浸泡在透析袋储存液中的透析袋取出使用前，须将透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净，冲洗三次即可。

实验要求不高的可以用简易处理方法：在沸水中煮10min即可使用

⑥使用时，一端用下沉透析袋夹子夹紧，灌满水后，用手指适当加压，检查不漏，方可装入样品。通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。装完样品后，用上浮夹子夹紧袋口，可在袋内放一玻璃珠，以使透析袋处于悬浮状态，即可进行透析。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁力搅拌器。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。

4. 透析袋相关配件

5.透析袋使用中注意事项及技巧

透析袋用之前一定要处理；

1）除盐透析时将高盐的样本加入透析袋中，夹紧，用你选择的保存液进行透析，一般在2-8度透析过夜，中间要更换一到两次透析液，另外透析液体积尽量大些。

先把透析液放进容器中（容器的直径小于透析袋长度），再将夹好的透析袋竖直放进去，这样透析袋与透析液的接触面积是最大的，几乎整个透析袋都与透析液接触，溶液的置换面积最大，置换速度最快。

        如果夹子很稳，那就夹好，先把透析液放进容器中（容器的直径小于透析袋长度），再将夹好的透析袋竖直放进去，这样透析袋与透析液的接触面积是最大的，几乎整个透析袋都与透析液接触，溶液的置换面积最大，置换速度最快。

        假如夹子夹不稳，那就尽量避免有夹子的一端接触透析液，以免漏出去。把透析液放进容器中（容器的直径小于透析袋长度），再将夹好的透析袋平放进去，这样透析袋与透析液的接触面积不大，大约只有一半的透析袋与透析液接触，置换速度最慢。

        假如夹子不是特别不稳，那就将透析袋两端回折，夹子夹在回折的中间，这样可以减小漏液的危险，再让透析袋放在容器液面上，夹子向上（容器的直径小于透析袋长度）。要注意定时打湿整个透析袋，不然接触不到透析液的透析袋可能会干裂漏液。

透析袋一定不能装满，因为透析液的渗透压低于透析袋内样品，样品中的盐出去的时候透析液也会进来，造成样品的体积增大，严重的时候可能会胀破透析袋，在夹子不稳时会很容易漏液。

除了第一次使用，透析袋还是干的，要预处理之外，第二次就不用预处理了。透析袋用完之后要冲洗干净，然后4度保存，要保湿不能干掉。要是干了或者生长微生物，就丢弃，免得影响实验效果。

透析的时间不确定，但是勤搅拌（例如磁力搅拌）和勤换洗脱液会加快达到目的的速度。

2）蛋白质吸附量，小于1ug/克，（以透析袋干重计）。

正常使用PH值5-9（可重复使用）。

极限使用PH值2-12（一次性使用）。

3）前处理：煮沸5分钟后用蒸馏水60℃洗冲2分钟，置4℃蒸馏水中待用。

长期保存液：0。05%-0。1%叠氮钠，1mMEDTA或50%甘油，温度（4℃），使用前以蒸馏水洗净。