mRNA的分离提纯—寡聚(dT)-纤维素柱法
- 来宝网2007年7月27日 9:34 点击：2619
mRNA的分离提纯—寡聚(dT)-纤维素柱法
上柱缓冲液:
20 mmol/L Tris-HCl (pH7.6)
0.5 mol/L NaCl
1 mmol/L EDTA (pH8.0)
0.1% 十二烷基肌氨酸钠
洗脱缓冲液:
10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6)
1 mmol/L EDTA (pH8.0)
0.05% SDS
寡聚(dT)-纤维素柱法提纯mRNA的过程
柱平衡(以上柱缓冲液洗脱纤维素柱,至柱流出液
的pH值小于8.0)
装柱( RNA水溶液于65OC温育5min,迅速冷却后按1V
RNA水溶液+ 1V 上柱缓冲液(2X)混合装柱
预洗(以5-10V的上柱缓冲液将未与柱结合的RNA等
洗脱下来,至OD260为很小或为零)
洗脱(以2-3V的无RNA酶的洗脱缓冲液洗脱柱,并进
行分部收集)
沉淀(1/10 V的3 M NaAc,pH 5.2; 2 V 无水乙醇;
置于冰浴中至少30min)
溶解(重蒸水或TE中)
（来源： 来宝网 ）
上柱缓冲液:
20 mmol/L Tris-HCl (pH7.6)
0.5 mol/L NaCl
1 mmol/L EDTA (pH8.0)
0.1% 十二烷基肌氨酸钠
洗脱缓冲液:
10 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6)
1 mmol/L EDTA (pH8.0)
0.05% SDS
寡聚(dT)-纤维素柱法提纯mRNA的过程
柱平衡(以上柱缓冲液洗脱纤维素柱,至柱流出液
的pH值小于8.0)
装柱( RNA水溶液于65OC温育5min,迅速冷却后按1V
RNA水溶液+ 1V 上柱缓冲液(2X)混合装柱
预洗(以5-10V的上柱缓冲液将未与柱结合的RNA等
洗脱下来,至OD260为很小或为零)
洗脱(以2-3V的无RNA酶的洗脱缓冲液洗脱柱,并进
行分部收集)
沉淀(1/10 V的3 M NaAc,pH 5.2; 2 V 无水乙醇;
置于冰浴中至少30min)
溶解(重蒸水或TE中)
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