IL-3检测的注意事项

IL-3检测的注意事项

    1．ConA的影响  用ConA制备脾细胞培养上清时，关键是摸索最佳ConA剂量，一般以5—10ug／mL为最宜。

    2．培养条件的影响  ①培养时间：ConA刺激后培养液的收获时间视镜下观察细胞转化情况而定，一般细胞开始转化即可收集培养上清；②细胞浓度：一般以5X10h～1X107／mL为宜；③小牛血清的不同批号对ID3产生影响很大，必须先经过鉴定。

    3．用WEHI-3细胞诱生IL-3时，培养液中不加小牛血清，因为血清中含有组胺酶，可干扰IL-3活性测定。

    4．用依赖株细胞检测IL-3时，依赖株必须生长状态良好，一般细胞活性须大于95％，否则影响检测结果。

    5．用骨髓干细胞增殖法测定ID3时，应摸索最佳细胞浓度，一般为5X106／mL，最佳培养时间为60～72h，加核素后继续培养4—8h收集细胞为宜。

    6．集落刺激法检测IL-3时，琼脂糖煮沸溶化后，应使温度维持在45~C左右，再加入37~C预温的细胞悬液，这样琼脂糖不易凝固，细胞也不会被烫死亡；使用琼脂糖较琼脂为好；琼脂凝胶要有一定的厚度，一般35mm小平皿加入lmL琼脂糖—细胞混合液。

    7．集落刺激法测IL-3时，内源性前列腺素E和IFN-a、p可能影响集落的数量和大小，可加用消炎痛(0.1ug/mL)和／或IFN中和血清以消除其影响。

    8．MTr法检测IL-3时，需摸索细胞代谢MTr的最适时间，以4h为宜。加入酸化异丙醇溶解甲腊颗粒时，培养液血清浓度一定不应大于5％。

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