春暖花开，万物复苏，当我们沉浸在这美好的春意之中，怡然自得时，实验室的细胞培养小能手或许得注意了，那些危害细胞的细菌、真菌、支原体也活跃起来了。在细胞培养的过程中，究竟有哪些常见的污染呢？我们又该如何去预防控制呢？小编总结了一些，希望对实验室的伙伴们有帮助！

    凡是混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都可视为污染。细胞污染可分为三大类：微生物污染、细胞间交互污染和化学污染。

一、微生物污染

微生物污染：包括真菌、细菌、支原体和病毒污染。细菌和真菌污染是较容易发现的，而病毒、支原体和其他细胞系的污染是不容易被察觉的。

1. 细菌污染时培养液pH值改变，溶液变浑浊。细菌的大量增殖导致细胞液中营养大量消耗，并产生毒素抑制细胞的生长，最终导致细胞崩解死亡。在有抗生素存在的条件下易造成隐性污染。

2. 病毒污染是最难发现和清除的，对于实验人员也是一个潜在的危险因素，不过病毒具有严格的宿主性和自限性。

3. 支原体污染是一种比较严重的细胞污染，难发现难去除。该种污染在显微镜下看不到，不引起培养液浑浊和pH改变。由于支原体营养要求高，故不容易用传统的微生物培养法检测到。此外，支原体不能通过过滤清除，且大多数抗生素对其无效！

4. 真菌污染中多是毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等污染，易通过孢子传播。霉菌污染后多数在培养液中形成肉眼可见的白色或浅黄色漂浮物，短期内培养液不浑浊。显微镜下观察可见在细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树状菌丝。常规的抗生素、紫外线和酒精对真菌的灭菌效果较差，难以消除。真菌污染大部分是人为带进细胞间，或者空气环境造成。

二、细胞系交叉污染

细胞间交互污染指的是非同种的其他细胞污染，该污染难于发现，当传代细胞出现生长速度异常时，可怀疑该种污染。预防该类型污染时，操作人员应同一时间只传一种细胞，每种细胞液要有单独的培养液，并且建立细胞库，每三个月更换一次细胞。

 三、化学污染

指影响细胞生存的非细胞所需的化学成分。

    预防为主是细胞培养过程中必要的思路！及早不预防，细胞死翘翘！

1、良好的无菌操作

• 所有细胞培养的相关耗材、试剂瓶均应灭菌完全

• 细胞培养液与相关试剂的配制应严格无菌操作

• 实验前备齐所需实验器材及物品，避免来回出入细胞培养区

• 超净台内勿放置过多用品或重叠摆放，否则会阻挡紫外照射而降低灭菌效果

• 培养前将移液器、废液缸、试管等用75%酒精棉球擦拭后置超净台内紫外照射15min

• 吸入或吸出液体时，切勿触及细胞培养瓶的瓶口

• 培养液应分装并置4℃保存

• 每种细胞应使用单独的培养液

• 细胞培养时需佩戴口罩和无菌手套，减免交谈，

• 每次实验结束后，用75%酒精清理台面，并紫外照射15min  

2、合理使用抗生素

不可过度使用抗生素，滥用抗生素常导致耐药菌的产生，牢记抗生素不能代替无菌操作

3、建立细胞库

4、良好的规章制度

• 只有相关实验人员才可进入细胞间

• 细胞间必须和其他实验区域分开

• 细胞培养区应避免使用水池，从而避免微生物污染

5、保持细胞间的清洁

• 定期对地面和台面进行清洗和消毒

• CO2培养箱应定期消毒清洗（2-3个月），所有溅出或溢出的液滴应立即擦拭并消毒，每周培养箱内的水盘需彻底消毒清洗并更换灭菌水。

• 及时清理废弃物和易感染材料

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