从牛乳中分离酪蛋白

从牛乳中分离酪蛋白
一、目的要求
掌握从牛乳中分离酪蛋白的原理，学会操作方法。
二、实验原理
牛乳中含有多种蛋白质，它们有着不同的性质，在脱脂牛乳的蛋白质中酪蛋白约占80%，酪蛋白是一类含磷蛋白质的复杂混合物。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调到4.7（酪蛋白的等电点）时，酪蛋白就沉淀析出。再用乙醇和乙醚洗涤沉淀，除去脂类杂质，便可制得纯酪蛋白。
三、实验器材
恒温水浴、普通离心机、精密pH试纸或酸度计、布氏漏斗、抽滤瓶、表面皿、离心管（80 mL）、量筒、烧杯（100 mL）、玻棒、电子天平。
新鲜牛乳。
四、实验试剂
1．95%乙醇
2．乙醚
3．0.2 mol/L醋酸溶液
4．0.2 mol /L pH 4.7醋酸–醋酸钠缓冲液 ，配制方法如下：
先分别配制A 液和B 液：
A 液（0.2 mol / L 醋酸钠溶液） 称取分析纯醋酸钠（NaAc？3H2O）27.22 g溶于蒸馏水中，定容至1 000 mL。
B 液（0.2 mol / L 醋酸溶液） 称取分析纯冰醋酸（含量大于99.8%）12.0 g溶于蒸馏水中，定容至1000 mL。
取A液885 mL和B液615 mL混合，即得pH 4.7 的醋酸－醋酸钠缓冲液1 500 mL。
五、操作步骤
1．取30 mL鲜牛乳，置100 mL烧杯中，加热至40 ℃。在搅拌下慢慢加入预热至40 ℃、pH 4.7的醋酸–醋酸钠缓冲溶液40 mL，用精密pH试纸或酸度计检查pH，再用0.2 mol / L醋酸溶液调至pH 4.7，静置冷至室温。
2．悬浮液出现大量沉淀后，转移至离心管中，在3 500 r / min下离心10 min，弃去上清液，所得沉淀为酪蛋白的粗制品。
3．用40 mL蒸馏水洗涤沉淀，将沉淀搅起，同上离心分离职，弃去上清液。加入30 mL 95%乙醇，把沉淀充分搅起至成悬浊液，将其转移到布氏漏斗中抽滤，先用30 mL 95%乙醇洗涤，再用30 mL乙醚洗涤，最后抽干制得酪蛋白。
4．将酪蛋白白色粉末摊在表面皿上风干，于电子天平称重，计算得率（牛乳中酪蛋白理论含量为3.5 g/100 mL）。