百萤课堂之-细胞增殖实验测定

细胞增殖测定是在细胞生物学和药物发现研究中具有广泛应用价值的工具。它们通常用于评估正常细胞的健康状况，对评估新型化疗药物的抗增殖效力和复合毒性至关重要。AAT Bioquest 提供了几种评估细胞增殖的策略，这些策略基于跟踪细胞分裂的世代或监测细胞健康的关键参数，包括代谢活性、 DNA 合成或 ATP 浓度。从广泛的传统比色测定试剂中选择用于确定细胞增殖的试剂，特别是四唑盐，以及用于流式细胞术、成像和微孔板应用的几种高度敏感的基于荧光的测定方法。

一．细胞增殖的测定方法

测定细胞增殖最准确的方法是在 DNA 复制过程中通过 BrdU掺入来测定新合成的 DNA。尽管这种方法具有高度的准确性和可重复性，但由于随后用荧光抗 BrdU 抗体进行检测是测量增殖所必需的，因此这种方法可能相当繁琐。或者，通过用 WST，resazurin 或细胞酯酶分离染料测量代谢活性的速率或用 CytoTellTM 染料或 CFSE 跟踪细胞分裂的世代，可以更快地评估细胞增殖。最终，选择最适合的细胞增殖试验主要取决于细胞类型，研究方案，以及希望研究的作用机制。

二．DNA合成细胞增殖实验

原位测定新合成的 DNA 是鉴定增殖细胞最可靠、最精确的方法。实现这一点的方法是在细胞周期的 S 期将 BrdU细胞增殖检测试剂 (17030)添加到新复制的 DNA 中。然后可以使用荧光标记的抗 BrdU 抗体来测量增殖的 BrdU 标记细胞。BrdU 染色适用于各种应用，包括 IHC、 ICC 和 ELISA，并且可以用流式细胞术中适合的其他生物标志物进行染色。我们提供用 PE (V103305)标记的小鼠单克隆抗 BrdU 抗体克隆 Bu20a 和未标记的小鼠单克隆抗 BrdU 抗体克隆 Bu20a (V103300)和克隆 MoBu-1(V103295)的荧光缀合物，其可以用我们最亮和光最稳定的 iFluor系列染料标记。

点击-化学驱动的 BucculiteTM XdU 细胞增殖测定

与 BrdU 测定不同，BucculiteTM XdU 细胞增殖测定不依赖于抗体来量化新生 DNA，也不需要 DNA 变性来促进 BrdU 标记核苷的抗体检测。相反，BucculiteTM XdU 细胞增殖测定使用含炔的胸苷类似物 XdU 的专有混合物，其掺入到新合成的 DNA 中，随后通过铜催化的叠氮化物-炔环加成检测(即单击反应，图1)。

细胞增殖测定原理。在 XdU 存在下的增殖细胞在 S 期加入了胸腺嘧啶碱基的化合物。荧光标记的叠氮化合物与掺入的 XdU 反应，以便通过成像或流式细胞仪进行检测(图在 BioRender 中制作)。

由于点击反应利用双正交部分检测增殖细胞，背景干扰是最小的。更重要的是，由于反应条件温和，Bucculite^TM XdU 细胞增殖测定法保留了细胞形态，抗原结合位点和样品完整性，为用户提供了用细胞周期染料，针对细胞表面标记物的抗体和荧光蛋白进行多重分析的机会。在 XdU 掺入后，点击反应和随后的洗涤步骤可以在60分钟内完成，并且新生 DNA 可以使用标准成像系统或流式细胞仪进行定量。还提供环境安全的无铜 Bucculite^TM FdU 细胞增殖测定绿色，红色和深红色荧光。这些试剂盒利用我们的专利 Buccutte^TM 标记化学，以促进检测新合成的 DNA 在活跃增殖的细胞。

用 Bucculite XdU 细胞增殖试验检测 IL 细胞增殖。使用 Bucculite  XdU 细胞增殖 iFluor  488成像试剂盒(22326)和 Bucculite XdU 细胞增殖 iFluor  647成像试剂盒(22328)中提供的试剂和固定/检测方案处理 HeLa 细胞。两个样本均用 Hoechst 33342核酸染色(17530)进行复染，并用荧光显微镜成像。

表1.可用于流式细胞术和增殖实验的产品