IHCAb CK14鼠单抗 (BGT047)，能特异性识别人CK14蛋白

IHCAb CK14鼠单抗 (BGT047)，能特异性识别人CK14蛋白

该基因编码角蛋白家族的一个成员，角蛋白家族是zui多样化的中间丝。这种基因产物，一种I型角蛋白，通常被发现为具有两个角蛋白5分子的异四聚体，一种II型角蛋白。它们共同形成上皮细胞的细胞骨架。这些角蛋白基因的突变与大疱性单疱性表皮松解症有关。至少在17p12-p11处鉴定出一个假基因

艾美捷IHCAb CK14鼠单抗 (BGT047)：

Cat #: B-IMW4064

Size: 100 μL

Storage: Store at -20°C. Avoid repeated freeze / thaw cycles.

IHCAb CK14鼠单抗 (BGT047)：

应用/稀释：IHC-p 1:100-500，WB 1:200-1000，IF 1:100-500

同种型/来源：小鼠，单克隆

特异性：该抗体能特异性识别人CK14蛋白。在福尔马林固定的石蜡包埋组织切片上的免疫组织化学中，抗体特异性标记鳞状基底细胞亚细胞位置：细胞质。核表现为丝状

表达：在角膜上皮中表达（蛋白质水平）（PubMed:26758872）。在基底层中检测到，在更顶部的层中降低，特别是在棘层、颗粒层中，但在角质层中未检测到。在生长卵泡的外根鞘中强烈表达，但在生发基质、内根鞘或头发中不表达（PubMed:9547912）。在休止期球杆毛周围的角质形成细胞中发现（PubMed:9547912）

配方：PBS中的液体，含有50%甘油、0.5%BSA和0.32%叠氮化钠

储存：储存温度为15°C至25°C

图1：用抗细胞角蛋白14抗体对人宫颈鳞状细胞癌组织进行染色。

图2：用抗细胞角蛋白14抗体对人前列腺组织进行染色。

仅供研究使用，不用于人类或临床诊断。

https://www.amyjet.com/products/B-IMW4064-100uL.shtml

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IHCAb Insulin鼠单抗 (PT0156)染色人胰腺组织示例

去除前体信号肽后，胰岛素原被翻译后切割成三种肽：通过两个二硫键共价连接形成胰岛素的B链和A链肽，以及C肽。胰岛素和胰岛素受体（INSR）的结合刺激葡萄糖摄取。已经鉴定出许多具有表型效应的突变等位基因。有一个通读基因INS-IGF2，它在5'区与该基因重叠，在3'区与IGF2基因重叠。选择性剪接导致多种转录物变体。

艾美捷IHCAb Insulin鼠单抗 (PT0156)：

Cat #: B-IMW4117

Size: 100 μL

Storage: Store at -20°C. Avoid repeated freeze / thaw cycles

IHCAb Insulin鼠单抗 (PT0156)：

应用/稀释：IHC-p 1:100-500，WB 1:200-1000，IF 1:100-500

同种型/来源：小鼠，单克隆

特异性：该抗体可检测人体内源性胰岛素水平

亚细胞定位：分泌

表达：细胞质

配方：PBS中的液体，含有50%甘油、0.5%BSA和0.26%叠氮化钠

储存：储存温度为15Cto-25°C

人胰腺组织用抗胰岛素抗体染色

仅供研究使用，不用于人类或临床诊断。

https://www.amyjet.com/products/B-IMW4117-100uL.shtml

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重组人膜连蛋白A5（活性）的性质&注意事项

膜联蛋白V（ANXA5或膜联蛋白A5）是膜联蛋白家族的一员，当钙存在时，它具有选择性地结合膜磷脂的能力。这种特殊的染料对磷脂酰丝氨酸（PS）表现出很强的亲和力，磷脂酰丝氨酸存在于质膜的内小叶中。在细胞凋亡的初始阶段，PS从质膜的内叶向外叶扩散，从而使其暴露在外部环境中。膜联蛋白V作为早期细胞凋亡的独特标志物，可以有效地检测PS向外部环境的转移事件。

艾美捷重组人膜连蛋白A5（活性）：

Cat #: D-AKP303

Size: 1 mg / 10 mg / 30 mg

Storage: Store at -20°C

重组人膜连蛋白A5（活性）性质：

● 序列：人膜联蛋白V亚型（P08758）（Met1-Asp320）。

● 蛋白质长度：320个氨基酸（N-Met）

● 分子量：预测分子量为36kDa。

● 生物活性：与磷脂酰丝氨酸（PS）结合。具有抗磷脂酶活性。

● 配方：从无菌PBS中冻干，pH 7.4。

●  保存：冷冻保存的人膜联蛋白V/ANXA5活性蛋白应在-18°C以下干燥保存12个月。重建后，蛋白质应在4°C下储存2-7天，并在-18°C以下储存3个月。对于长期储存，建议添加载体蛋白（0.1%HSA或BSA）。请防止冻融循环。

重组人膜连蛋白A5（活性）使用注意事项：

打开试管前一定要离心。以12000rpm离心1分钟。使用提供的缓冲液以≥1 mg/mL的浓度重新构建人膜联蛋白V蛋白，然后稀释。对于缀合，使用不含氨基的缀合缓冲液重建蛋白质。蛋白质浓度应大于2 mg/mL。

左图：人膜联蛋白V/ANXA5活性蛋白（D-AKP303）的SDS-PAGE分析

右图：用喜树碱处理Hela细胞24小时，用膜联蛋白V-AF 488和PI染色。细胞内可见凋亡/坏死，显示膜联蛋白V-AF 488和PI染色（绿色膜，红色碎裂核）。

仅供研究使用，不用于人类或临床诊断。

https://www.amyjet.com/products/D-AKP303-10mg.shtml

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长效型抗荧光淬灭剂/封片剂-即用即用，无需配置

荧光猝灭是指荧光分子由于光、pH、温度或与其他分子的相互作用等环境因素而发生的不可逆降解。这种现象导致通过荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察到的可见信号的强度降低。然而，使用防褪色安装介质可以有效地防止荧光信号的猝灭，保持其亮度和稳定性。长效型抗荧光淬灭剂/封片剂用于密封荧光组织和细胞样品，含有独特的抗荧光猝灭剂成分，并与多种荧光染料兼容，以保护紫外线和红外光谱，防止荧光信号猝灭。当样品在4°C或-20°C下储存时，原始发光强度可以保持2周以上

艾美捷长效型抗荧光淬灭剂/封片剂：

Cat #: D-ABM104

Size: 10mL / 50mL

Storage: Stored at -20°C for 12 months, protected from light

长效型抗荧光淬灭剂/封片剂功能和优点：

较强的抗荧光猝灭作用：避光保存2周以上，仍能保持原有的发光强度。

高兼容性：精心优化的配方可与多种荧光染料兼容。

易于操作：即用即用，无需配置。

长效型抗荧光淬灭剂/封片剂分析程讯：

I粘附细胞：

1.染色后，吸干液体。

2.在载玻片上滴一滴LongFluo Antifade Mountant Medium，在盖玻片上涂上细胞，让细胞接触安装液，尽量避免气泡。

3.然后你可以在荧光显微镜下观察细胞样品。

II纸巾切片：

1.染色后，吸干液体。

2.在纸巾片上滴一滴LongFluo Antifade Mountant Medium，用盖玻片覆盖，让纸巾片接触到安装液，并尽量避免气泡。

3.然后你可以在荧光显微镜下观察组织切片。

图：展示使用Biogradetech LongFluo的结果™ Antifade Mountant Mediumin位于第二排，提供了品牌a和品牌B产品之间的一些比较。值得注意的是，LongFluo™Biogradetech生产的AntifadeMountant Medium呈现出明显更具活力和吸引力的荧光，以其非凡的光彩吸引眼球

仅供研究使用，不用于人类或临床诊断。

https://www.amyjet.com/products/D-ABM104-10mL.shtml

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抗总微管蛋白羊多抗WB&IF应用说明

抗微管蛋白抗体（货号#ATN02）是一种亲和纯化的绵羊多克隆抗体，可对α和β微管蛋白发生反应。用于抗体生产的免疫原是纯化微管蛋白的混合物，因此该抗体具有从酵母到人类的广泛物种交叉反应性。猪提取物（货号#EXT03）作为阳性对照包括在内，ATN02在蛋白质印迹上鉴定出55 kD的特征微管蛋白条带（见图1）。ATN02以冻干白色粉末形式提供。

图1.抗微管蛋白抗体的蛋白质印迹分析。通过电泳分离蛋白质样品并按照方法所述转移到PVDF膜上。将ATN02抗体稀释至50 0 ng/ml （1：1000）进行蛋白质印迹分析。在10μg牛脑提取物中检测到微管蛋白（见55kD处的箭头）。分子量标记物来自Invitrogen。

图2.用抗微管蛋白多克隆抗体探测的细胞提取物的蛋白质印迹（货号#ATN02）。果蝇 S2 细胞提取物（50 μg，泳道 1）、非洲爪蟾 A6 细胞（50 μg，泳道 2）、小鼠瑞士 3T3 细胞（50 μg，泳道 3）、大鼠 NRK 细胞（50 μg，泳道 4）、人 HeLa 细胞（50 μg，泳道 5）和牛脑（50 μg，泳道 6）提取物中微管蛋白的化学发光检测在 55 kD（见箭头）。用500 ng/ml（1：1000）稀释的ATN02探测印迹。

储存和重组：

在环境温度下运输。冻干蛋白可在4℃下干燥保存6个月。对于重构，应短暂离心产品管，以收集管底部的粉末。

将每根试管在100μl Mili-Q水加30%甘油中重新配制，并在4℃下储存长达一个月。为防止细菌在4℃下生长，添加50μg/ml硫酸庆大霉素或其他抗菌剂。对于超过一个月的储存，抗体应等分并在70°C下储存。

将脑提取物阳性对照蛋白重新悬浮在500μl 1x SDS-PAGE样品加载缓冲液中，最终浓度为2 mg/ml，等分为20 X 25μl量（各50μg），并在20°C下储存。

艾美捷抗总微管蛋白羊多抗蛋白质印迹（WB）应用：

按照1:1000稀释度的方法使用，足够200 ml的工作强度Ab。

Western印迹法：

1.在SDS-PAGE上运行蛋白质样品和对照样品。

2.在电印迹之前，在室温下将凝胶在蛋白质印迹缓冲液（25mM Tris pH 8.3，192mM甘氨酸，5%甲醇）中平衡15分钟。

3.在75V下将蛋白质转移到PVDF膜上60分钟，或在20V下4℃下过夜。

4.用TBST洗涤膜一次10分钟（10mM Tris-HCl pH 8.0150mM NaCl，0.05%吐温20）。

5.在室温下，在持续搅拌的情况下，用TBST中的5%脱脂奶粉封闭膜表面30分钟。

6.将膜与在TBST/1%脱脂乳中稀释的ATN02抗体的1:1000稀释液在室温下孵育1h或在4°C下持续搅拌过夜。

7.在TBST中洗涤膜3次，每次5分钟。

8.我在室温下用TBST/1%脱脂乳中的抗绵羊二级抗体的适当稀释液（例如1:20000）对膜进行浸泡60分钟。

9.在TBST中洗涤膜6次，每次10分钟。

10.使用增强化学发光检测方法来检测信号

（例如，SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate；ThermoFisher）。

IF方法：

1.在玻璃盖玻片上培养组织培养细胞，使其达到所需的融合度。

2.取出培养基，用isotemp PBS（37℃）轻轻清洗细胞一次。

3.用甲醇在-20°C下固定细胞3分钟。

4.用PBS洗涤细胞三次。

5.将盖玻片的细胞面朝上放在培养皿内的石蜡膜上。在有盖的培养皿里放一张湿滤纸，以保持潮湿的空气。向每个盖玻片中加入100μl渗透缓冲液（1%Triton X-100，PBS），孵育20分钟。

6.去除渗透缓冲液，加入100μl块缓冲液（PBS中的3%BSA），并培养30分钟。

7.用PBS清洗盖玻片一次。

8.将100-200μl 1:500稀释的ATNO2抗体在封闭缓冲液中加入到每张盖玻片中。

9.在渗透缓冲液中洗涤每个盖玻片三次（孵育5分钟）。

10.在封闭缓冲液中向每张盖玻片中加入200μl 1:500稀释的罗丹明缀合的抗绵羊抗体。培养30分钟。

11.将每个盖玻片在PBS中洗涤三次（每次静置5分钟）。

12.在PBS中用200μl的100nM DAPl对DNA进行反染色5分钟。

13.将盖玻片倒置在载玻片上的一滴防褪色安装介质上。用纸巾轻轻地去除多余的培养基，让安装的培养基干燥。

14.使用配备有适用于罗丹明和DAPI荧光团的过滤装置的荧光显微镜检查染色的盖玻片。

15.将幻灯片保存在4摄氏度的黑暗中。

16.典型结果如图2所示。

https://www.amyjet.com/products/ATN02.shtml

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CENP-E运动结构域蛋白（重组人）的用途及生物活性

人类CENP-E（KIF10）的保守运动域在原核系统中表达。重组蛋白在氨基末端含有GST标签，组合分子量为71 kDa。该蛋白在微管激活的ATP酶活性测试中已被确定为具有生物活性。蛋白质以白色冻干粉末形式提供。

艾美捷CENP-E运动结构域蛋白（重组人）的用途：

微管活化ATP酶活性的测定

鉴定/表征影响运动ATP酶活性的蛋白质或小分子

鉴定/表征影响驱动蛋白运动性的蛋白质或小分子

鉴定/表征影响运动/微管相互作用的蛋白质或小分子

蛋白质纯度：

是通过在12%聚丙烯酰胺凝胶上扫描考马斯蓝染色蛋白质的密度测定法确定的。所有驱动蛋白运动域的纯度均为>85%。有关纯度示例，请参见图1。

生物活性 - 微管活化的 ATP酶测定通过使用：

驱动蛋白ELIPA测定试剂盒（货号#BK060）监测实时游离磷酸盐的生成来测量CENP-E ATP酶活性。该测定基于330-氨基-360-巯基-2甲基嘌呤核糖核苷（MESG）在无机磷酸盐（Pi）存在下催化转化为6-氨基-7-巯基-2-甲基嘌呤时发生的吸光度偏移（6 nm - 7 nm）。一个Pi分子将在基本上不可逆的反应中产生一个分子的2氨基-6-巯基-7-甲基嘌呤。因此，360nm处的吸光度与驱动蛋白ATP酶反应中产生的Pi量成正比。在下面概述的条件下，CENP-E 微管激活的 ATP 酶活性的 Vmax 为每毫克 CP900 每分钟产生的 >01 nmoles ATP（图 2）。使用10分钟终点测定（驱动蛋白ATP酶终点测定试剂盒，货#BK053）的ATP酶速率为每毫克CP900每分钟>01 nmoles ATP（数据未显示）。

图1：驱动蛋白运动域蛋白的纯度。BimC（BM01），CENP-E（CP01）和Eg5（EG01）在SDS-PAGE凝胶上运行，并用考马斯蓝染色。

图2：使用驱动蛋白ELIPA检测试剂盒（货号#BK060）的CENP-E微管激活ATP酶活性

https://www.amyjet.com/products/CP01-A.shtml

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微管结合蛋白 Spin Down 检测试剂盒解决方案

该测定允许鉴定将在体外与微管（MTs）结合的蛋白质。该测定依赖于这样一个事实，即MT在以100,000 x g 离心时会沉淀。因此，与MT相关的任何蛋白质都会在离心过程中沉淀。对上清液与沉淀级分进行简单的SDS-PAGE分析将确定蛋白质是否能够与MTs相关联。本手册中给出的测定描述适用于重组表达的“测试”蛋白，但是，该测定可以适用于细胞裂解物或体外翻译产物。

应该注意的是，应获得MT关联的体内确认，以确认该蛋白质可以归类为MAP。这种关联不需要在整个细胞周期中发生，甚至可以在发育上受到调节，事实上，MAP与微管的短暂关联是常态而不是例外。

艾美捷微管结合蛋白 Spin Down 检测试剂盒 #BK029用途：

确定蛋白质或化合物是否与微管结合。

测试各种缺失突变体仍然结合微管的能力，然后计算它们对微管的亲和力，从而鉴定微管结合位点。

在ATP（驱动蛋白）或GTP（动力蛋白）的不可水解类似物存在下，从细胞中提取这些或在突变时显示其结合亲和力。

微管结合蛋白 Spin Down 检测试剂盒内容：

该试剂盒包含足够的材料，可根据检测量进行 30-100 次检测。包括以下试剂：

微管蛋白， >99% 纯度， （# T240）

微管相关蛋白级分（阳性对照）（# MAPF）

牛血清白蛋白（BSA）蛋白（阴性对照）

一般微管蛋白缓冲液（# BST01）

微管蛋白甘油缓冲液（# BST05）

GTP （# BST06）

微管重悬缓冲液

紫杉醇（# TXD01）

二甲基亚胺

盐提取缓冲液

包含详细协议和广泛故障排除指南的手册

微管结合蛋白 Spin Down 检测试剂盒示例结果：

通过将MT与微管相关蛋白级分（Cat.#MAPF）或BSA相结合来测试微管结合旋下测定。正如预期的那样，MAPF与微管共沉积，而BSA则不（图1）

图：使用 BK029 的 MAP 旋速测定。将微管与缓冲液（MT），MAP蛋白（MT + MAPF）或BSA（MT + BSA）混合，并通过100,000×g离心沉淀MTs.通过SDS-PAGE检查上清液（S）和沉淀（P）级分。MAP蛋白，但不是BSA，与MT结合并共沉淀。MAP（MAPF）或BSA（BSA）蛋白单独不能沉淀。

https://www.amyjet.com/products/BK029.shtml

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Tubulin聚合检测（荧光法-96assays 猪脑 tubulin）试剂盒

微管蛋白聚合 HTS 测定使用 >99% 纯微管蛋白，基于荧光 （BK011P）。该测定是确定药物或蛋白质对微管蛋白聚合影响的经济一步法。它是对最初由Bonne，D.等人描述的测定的改编（1）。聚合之后是荧光增强，因为随着聚合发生，荧光报告基因被掺入微管中。标准测定使用神经元微管蛋白（Cat.#T240），其产生代表微管形成的三个阶段的聚合曲线;即成核、生长和稳态平衡。其他微管蛋白，如HeLa细胞微管蛋白（货号#H001）也可用于该测定。每次检测的低体积为50μl，微管蛋白浓度低，最终浓度为2mg/ml（每次检测100μg），使其成为研究更昂贵的癌细胞微管蛋白试剂和高通量应用比较好的选择。

艾美捷Tubulin聚合检测（荧光法-96assays 猪脑 tubulin）试剂盒用途：

用于抗癌化合物的经济高效的高通量筛选。

测量化合物IC50和微管蛋白特异性的基础研究。

筛选蛋白质对微管蛋白聚合活性的影响。

药理学本科/研究生班的教学辅助。

Tubulin聚合检测（荧光法-96assays 猪脑 tubulin）试剂盒内容：

试剂盒含有足够的材料，可用于50μl格式的96次测定。包括以下组件：

1.>99%纯微管蛋白（#T240）

2.具有荧光报告子的通用微管蛋白缓冲液

3.微管甘油缓冲液（#BST05）

4.GTP溶液（#BST06）

5.紫杉醇阳性对照（#TXD01）

6.半区96孔板。黑色，平底

7.包含详细协议和广泛故障排除指南的手册

Tubulin聚合检测（荧光法-96assays 猪脑 tubulin）试剂盒示例结果：

与微管蛋白相互作用的化合物或蛋白质通常会改变聚合的一个或多个特征相。例如，图1显示了在标准聚合反应中加入抗有丝分裂药物紫杉醇的效果。3µM浓度的紫杉醇消除了成核阶段，并提高了生长阶段的Vmax。因此，该测定法的一个应用是鉴定新的抗有丝分裂剂。图1还显示了添加微管失稳药物长春碱的效果。在最终浓度为3µM时，长春碱会导致Vmax急剧降低，最终聚合物质量降低。

图：使用基于荧光的微管蛋白聚合测定法（BK011P）进行微管蛋白聚合。微管蛋白与紫杉醇或长春碱单独孵育（对照）。每种情况都测试了两次。通过在360nm处激发和在420nm处发射来测量聚合。对照聚合曲线标记了微管蛋白聚合的三个阶段；I： 成核，II：生长，III：稳态平衡。

文献参考：

Bonne, D., Heusele, C., Simon, C., and Pantaloni, D.  (1985).  4’, 6-Diamidino-2-phenylindole, a fluorescent probe for tubulin and mictrotubules. J. Biol. Chem. 260, 2819-2825.

https://www.amyjet.com/products/BK011P.shtml