生物素标记的RNA/miRNA探针--pCp-Biotin

生物素标记的RNA/miRNA探针--pCp-Biotin

pCp-Biotin是推荐用于利用T4 RNA连接酶进行RNA/miRNA 3'末端标记的试剂，它能够将单个生物素分子连接到RNA/miRNA模板的3'-羟基团上。由此产生的生物素标记的RNA/miRNA探针非常适合用于杂交实验，如基于微阵列的表达谱分析或电泳迁移率变化实验（EMSA）。生物素部分的检测可以使用与辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）或荧光染料结合的链霉亲和素来进行。另外，生物素标记的RNA/miRNA探针也可以通过与链霉亲和素结合的琼脂糖/磁珠进行纯化。

艾美捷pCp-Biotin（NU-1706-BIO）物理性质：

运输：通过凝胶包装进行运输。

储存条件：在-20°C下保存。短期暴露（累计长达1周）于环境温度下是可行的。

保质期：自交货日期起12个月。

分子式：C25H42N6O13P2S1（自由酸形式）。

分子量：728.65克/摩尔（自由酸形式）。

精确质量：728.20克/摩尔（自由酸形式）。

纯度：≥ 95%（高效液相色谱法，HPLC）。

形态：10 mM Tris-HCl溶液。

颜色：无色至微黄色。

浓度：1.0 mM至1.1 mM。

pH值：7.5 ±0.5。

光谱性质：zui大吸收波长λmax为271纳米，摩尔吸光系数ε为8.9 L·mmol^-1·cm^-1（Tris-HCl，pH 7.5）。

应用：通过T4 RNA连接酶介导的3'末端标记，将该物质整合入RNA/miRNA中。

供一般实验室使用。

pCp-Biotin相关产品：

pCp-Desthiobiotin, #NU-1706-Desthiobio

pCp-Cy3, #NU-1706-CY3

pCp-Cy5, #NU-1706-CY5

pCp-Amine, #NU-1706

pCp-Azide, #NU-1708

pCp-Alkyne, #NU-1709

pCp-Bioti文献参考：

Kashida et al. (2018) Nanoparticle-based local translation reveals mRNA as translation-coupled scaffold with anchoring function. doi:10.1101/483727.

Booy et al. (2016) RNA Helicase Associated with AU-rich Element (RHAU/DHX36) Interacts with the 3′-Tail of the Long Non-coding RNA BC200 (BCYRN1). J. Biol. Chem. 291 (10):5355.

https://www.amyjet.com/brand/biotin-digoxin.shtml

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pCp-Desthiobiotin：RNA/miRNA探针杂交实验

pCp-Desthiobiotin是推荐用于利用T4 RNA连接酶进行RNA/miRNA 3'末端标记的试剂，它能够将单个去硫生物素分子连接到RNA/miRNA模板的3'-羟基团上。由此产生的去硫生物素标记的RNA/miRNA探针非常适合用于杂交实验，如基于微阵列的表达谱分析或电泳迁移率变化实验（EMSA）。去硫生物素部分的检测可以使用与辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）或荧光染料结合的链霉亲和素来进行。另外，去硫生物素标记的RNA/miRNA探针也可以通过与链霉亲和素结合的琼脂糖/磁珠进行纯化。

艾美捷pCp-Desthiobiotin（NU-1706-Desthiobio）物理性质：

运输：通过凝胶包装进行运输。

储存条件：在-20°C下保存。可以短期（累计最多1周）暴露于室温环境下。

保质期：自交货之日起12个月。

分子式：C25H44N6O13P2（自由酸形式）。

分子量：698.60克/摩尔（自由酸形式）。

精确质量：698.24克/摩尔（自由酸形式）。

纯度：≥ 95%（高效液相色谱法，HPLC）。

形态：10 mM Tris-HCl溶液。

颜色：无色至微黄色。

浓度：1.0 mM至1.1 mM。

pH值：7.5 ±0.5。

光谱性质：最大吸收波长λmax为271纳米，摩尔吸光系数ε为8.9 L·mmol^-1·cm^-1（Tris-HCl，pH 7.5）。

应用：通过T4 RNA连接酶介导的3'末端标记，将该物质整合入RNA/miRNA中。

供一般实验室使用。

pCp-Desthiobiotin相关产品：

pCp-BIO, #NU-1706-BIO

pCp-Cy3, #NU-1706-CY3

pCp-Cy5, #NU-1706-CY5

pCp-Amine, #NU-1706

pCp-Azide, #NU-1708

pCp-Alkyne, #NU-1709

pCp-Desthiobiotin产品引用：

Supplementary   The Human-Specific and Smooth Muscle Cell-Enriched LncRNA SMILR Promotes Proliferation by Regulating Mitotic CENPF mRNA and Drives Cell-Cycle Progression Which Can Be Targeted to Limit Vascular Remodeling

Amira D. Mahmoud, Margaret D. Ballantyne, ..., Andrew H. Baker

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高纯度高效液相色谱法--5'-Biotin-ApG

5'-Biotin-ApG应用：启动子二核苷酸用于体外转录标记RNA。

5'-生物素-ApG的结构式：

艾美捷5'-Biotin-ApG（NU-888-BIO）物理性质：

运输：通过凝胶包装进行运输。

储存条件：在-20°C下保存。可以短期（累计最多1周）暴露于室温环境下。

保质期：自交货之日起12个月。

分子式：C36H53N13O16P2S（自由酸形式）。

分子量：1017.90克/摩尔（自由酸形式）。

精确质量：1017.29克/摩尔（自由酸形式）。

纯度：≥ 95%（高效液相色谱法，HPLC）。

形态：经30 kDa过滤的水溶液。

颜色：无色至微黄色。

浓度：100 mM至110 mM。

pH值：7.5 ±0.5。

光谱性质：zui大吸收波长λmax为260纳米，摩尔吸光系数ε为25.0 L·mmol^-1·cm^-1（Tris-HCl，pH 7.5）。

供一般实验室使用。

5'-Biotin-ApG相关产品：

NU-1006, dNTP Mix - 10 mM Solution

NU-1010-SOL, ATP - Solution

NU-1127, 2'OMe-GTP

NU-805-BIO, N6-(6-Aminohexyl)-ATP-Biotin

NU-1184, 2'OMe-ATP

NU-151, 2'-Fluoro-dATP

NU-831-BIOX, Biotin-11-CTP

NU-821-CY5, Aminoallyl-UTP-Cy5

NU-821-BIO16, Biotin-16-UTP

CLK-NU-001, N6-Propargyl-ATP (N6pATP)

5'-Biotin-ApG文献参考：

[1] Pitulle et al. (1992) Initiator oligonucleotides for the combination of chemical and enzymatic RNA synthesis. Gene. 112 (1):101.

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2D/3D细胞培养方案：胶原蛋白包被培养板，培养瓶，培养皿

胶原蛋白（Collagen）是一类蛋白质家族，已至少发现了30余种胶原蛋白链的编码基因，可以形成16种以上的胶原蛋白分子，根据其结构，可以分为纤维胶原、基膜胶原、微纤维胶原、锚定胶原、六边网状胶原、非纤维胶原、跨膜胶原等。

I 型胶原用于2D和3D细胞培养，使体外细胞环境更接近体内。包被一层薄的胶原蛋白溶液可支持一些原代细胞贴壁，增殖和功能表达，常用于上皮细胞、肝细胞、肌细胞等原代细胞的培养。

Advanced BioMatrix（2D/3D细胞培养专家），除了可以提供多种类型的胶原蛋白，还可以提供胶原蛋白包被的培养板，培养瓶，培养皿：

艾美捷胶原蛋白包被培养板，培养瓶，培养皿相关产品：

货号  名称

5029-10EA   T-25 Flasks,PureCol Collagen Coated/I型胶原蛋白包被的培养瓶

5028-10FA   100X20 mm Dishes,PureCol Collagen Coated/I型胶原蛋白包被的100X20 mm培养皿"

5073-5FA 5-well Plates,PureCol Collagen Coated/I型胶原蛋白包被的6孔培养板

5439-5EA 12-well Plates,PureCol Collagen Coated/I型胶原蛋白包被的12孔培养板

5440-5EA 24-well Plates,PureCol Collagen Coated/I型胶原蛋白包被的24孔培养板

5181-5EA 48-well Plates,PureCol Collagen Coated/I型胶原蛋白包被的48孔培养板

5072-5FA 96-well Plates,PureCol Collagen Coated/I型胶原蛋白包被的96孔培养板

5380-5EA 384-well Plates,PureCol Collagen Coated/I型胶原蛋白包被的384孔培养板

说明：包被有PureCol 胶原蛋白，胶原蛋白产品的纯度(>99.9%胶原蛋白含量)，一致性和可重复性的标准。包被I型胶原蛋白非常适合细胞培养和各种细胞实验。

如果您正在寻找I型胶原蛋白包被的培养工具，请查看艾美捷现成的PureCol胶原蛋白包被培养板、培养瓶、培养皿。PureCol是>99.9%的纯胶原蛋白(牛胶原蛋白)，确保了实验的一致性和可靠性。

https://www.amyjet.com/brand/PureCol-Collagen-Coated.shtml

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多重检测！GlycoSense糖链分谱试剂盒使用说明

GlycoSense™是一种使用双激光流式细胞仪检测糖蛋白上糖基化模式的多重检测方法。GlycoSense™阵列由结合到多重微球（珠子）上的凝集素组成，这些凝集素能够结合糖蛋白上的末端单糖，从而快速分析存在的糖特征。这种简化的“GlycoPrint”虽然不能提供完整的糖基化谱或结构信息，但能够检测到几个关键糖特征的变化。这个阵列中的微球已经被评估过，能够结合N-连接糖上的唾液酸、半乳糖和N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）。GlycoSense™珠子可以用633/640纳米激光激发，并可以在常规流式细胞仪的APC、APC-Cy7或FL4荧光通道上进行测量。GlycoSense™检测需要对糖蛋白或检测糖蛋白的试剂（如结合伴侣或Fab片段）进行直接标记，使用488纳米激发的荧光团（例如，Alexa Fluor® 488、DyLight® 488、FITC、SureLight™ 488）。也可以直接检测（例如，GFP）标记的重组糖蛋白。不推荐使用完整的抗体进行糖蛋白的二次检测，因为抗体的糖基化可能会干扰检测。

艾美捷GlycoSense糖链分谱试剂盒（LTZ-GK0101-50UL）使用说明：

1. 在含有1 mg/mL牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲盐水（PBS/BSA）中准备一份标记或未标记的糖蛋白样品。样品中糖蛋白的浓度应介于0.5-5μM之间，以0.5-2μM为zui佳。（抗体浓度在0.5-1μM之间为zui佳。）也可以检测未知浓度的非糖蛋白，但如果超过5μM可能会导致背景信号过高。按照试剂盒中的方法，将标记的胎蛋白和去糖胎蛋白对照样品制备成1μM的浓度。检测体积可以是50-1000μL，对于大多数市售的流式细胞仪来说，100μL为zui佳体积。也可以使用其他缓冲液和无血清培养基进行GlycoSense™检测，但结果可能会有所不同。

2. 在使用前彻底振荡混匀珠子。向糖蛋白样品中加入1μL（约10,000个微球）的每种GlycoSense™珠子#。在避光的条件下，在室温下使用低速至中速旋转或振荡设备孵育1小时。胎蛋白和去糖胎蛋白对照样品直接用染料标记，不需要二次标记步骤。如果分析未标记的糖蛋白，在孵育后离心下来，去除上清液，并在避光的条件下与标记的二抗试剂（例如，100μL的1μM抗糖蛋白Fab片段）孵育30-60分钟。较长的孵育时间会导致信号增强，但背景也会增高。如果需要将两个或更多检测的结果进行直接比较，孵育时间应保持一致。（可选：为了减少背景和非特异性结合，在与染料标记的蛋白孵育后离心下来，去除上清液，并在PBS/BSA中重新悬浮珠子。）

3. 创建一个双变量前向和侧向散射（FSC/SSC）点图。将Gating Beads稀释至1:10的PBS/BSA中。在流式细胞仪上以慢速运行2-3分钟。门控整个微球总体群。稀释后的珠子可以丢弃或保存在4°C下以备将来使用。

4. 在散射门控的微球上创建一个红色荧光通道直方图（例如APC或FL4），以区分个别峰#。调整PMT设置以适应直方图中的所有峰，如有必要。在红色荧光直方图中门控个别峰#。为每个珠子峰#创建一个绿色荧光通道直方图（例如FITC或FL1）。

5. 完成步骤2中的结合孵育后，以慢速在流式细胞仪上运行样品。调整绿色通道的PMT设置，使zui高值在直方图的范围内，如有必要。收集至少1,000个事件对应于每个珠子#。

6.记录绿色通道中每个峰#的中位荧光强度，可以直接从流式细胞仪软件中读取，或使用数据分析程序。

GlycoSense 糖链分谱试剂盒数据分析：

在每个珠子#收集至少1,000个事件之后，可以直接从流式细胞仪软件中记录每个峰的中位FL1值，或者使用流式细胞数据分析程序获取，然后使用Excel等程序进行绘图。由于BSA珠子代表的是背景荧光，并且会依赖于样品（非特异性结合以及流式系统中的染料或荧光蛋白），所以可以从其他值中减去BSA珠子的读数。背景荧光在不同样品之间会有轻微的变化，因为蛋白质可能具有不同的荧光团与蛋白（F/P）比率。试剂盒中包含的胎蛋白和去糖胎蛋白的F/P比率是相似的。

下图展示了1μM SureLight™ 488标记的胎蛋白和去糖胎蛋白与五种GlycoSense™珠子#结合1小时后的代表性“GlycoPrint”（Excel图表）。使用BD Accuri C6流式细胞仪记录了中位FL1荧光值。三个独立样品值的平均值被绘制成图，并以标准差作为误差条。数据表明胎蛋白上存在α2,6-和α2,3-连接的唾液酸，这是通过更高的SNA和MAL I信号显示出来的，而通过更高的ECA信号可以看出去糖胎蛋白具有更多的末端半乳糖。

图：SureLight™488标记的糖蛋白与GlycoSense™珠结合的比较

注：使用GlycoSense™观察到的荧光值是定性的。每种凝集素或捕获试剂对其特定聚糖靶标具有不同的亲和力，并且每个微球可能具有不同数量的偶联有效分子。GlycoSense™可以监测相关样品的聚糖特征变化或糖基化差异。

https://www.amyjet.com/products/LTZ-GK0101-50UL.shtml

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NanoKAZ萤光素酶蛋白--高特异性活性

NanoKAZ荧光素酶，是一种来自Oplophorus荧光素酶的突变体，是zui小和zui亮的荧光素酶之一。这种重组蛋白经过亲和纯化处理，以获得极大的特异性活性。

艾美捷NanoKAZ萤光素酶蛋白（#381）

定量：NanoKAZ荧光素酶标记，使用BSA作为标准的Bradford测定法

生产：在大肠杆菌中生产的重组蛋白，经过亲和纯化，储存在TBS中，pH 7.8±0.1%（w/v）共聚物 未注册

稀释缓冲液：在-80℃下储存蛋白，避免反复冻融

NLuc检测缓冲液来自试剂盒#324（NLuc FLASH检测）或#325（NLuc GLOW检测），按照手册中的说明操作

外观：清澈液体

替代选项：TBS或PBS

活性：推荐用于发光测定仪的底物浓度为50μM。NanoKAZ荧光素酶可用作发光测定中的阳性对照。

NanoKAZ萤光素酶蛋白数据展示：

NanoKAZ萤光素酶蛋白相关产品：

321Gaussia Luciferase Protein

371Gaussia Luciferase-Streptavidin

381NanoKAZ Luciferase Protein

3815NanoKAZ Luciferase Protein (PBS)

312Renilla Mulleri Luciferase

https://www.amyjet.com/brand/D-Luciferin.shtml

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D-荧光素游离酸>99%相关参数及物理性质说明

萤火虫D-荧光素自由酸 >99%（Photinus pyralis、pyrophorus和Elateridea基质荧光素）

这是自由酸形式，而不是水溶性盐，例如钾盐或钠盐。这需要使用碱性缓冲液进行重组。

艾美捷D-荧光素游离酸>99%（#306）参数：

化合物编号：D-Luciferin (Firefly Luciferin)

CAS号：2591-17-5

IUPAC名称：(4S)-2-(6-羟基-1,3-苯并噻唑-2-基)-4,5-二氢噻唑-4-羧酸

分子式：C₁H₈N₂O₃S₂

分子量：280.32克/摩尔

D-荧光素游离酸>99%物理性质：

测试项目   规格要求   测试结果   测试方法

外观   浅黄色固体   符合要求   视觉检查

纯度   >99%   99.091%   液相色谱-质谱联用（LCMS）

鉴定   活性与结构一致   符合要求   光发射测定

鉴定   光谱与结构一致  符合要求   核磁共振氢谱（HNMR）

储存   在-20℃的干燥阴暗环境中储存，或者为了长期保存，存放在-80℃的环境中。

D-荧光素游离酸>99%相关产品：

318 萤火虫荧光素酶检测试剂

NanoFuel® 萤火虫荧光素酶检测试剂盒提供了足够的缓冲液，大约可用于1000次检测。

https://www.amyjet.com/brand/D-Luciferin.shtml

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天然腔肠菌嗪--发光海蜇荧光素的优选底物

天然腔肠菌嗪荧光素自由碱纯度 >95%，自然界中发现的荧光素zui丰富的形式。天然荧光素是发光海蜇荧光素的优选底物。

艾美捷天然腔肠菌嗪（#303）参数：

化合物编号：天然荧光素

分子式：C26H21N3O3

CAS号：55779-48-1

IUPAC名称：8-苄基-6-(4-羟基苯基)-2-[(4-羟基苯基)甲基]-7H-咪唑[1,2-a]吡嗪-3-酮

分子量：423.46克/摩尔

天然腔肠菌嗪包装内容：

500微克 - 1瓶装有500微克的冻干荧光素（CTZ）

1毫克 - 2瓶装有500微克的冻干荧光素（CTZ）

5毫克 - 1瓶装有5毫克的冻干荧光素（CTZ）

10毫克 - 2瓶装有5毫克的冻干荧光素（CTZ）

冻干荧光素的优势包括：

预先分装成小份量，每组实验都有新鲜的底物；

长效保质期（在氩气环境下包装）；

由于其细腻的晶体结构，溶解速度更快；

各分装间质量一致性高。

这种荧光素作为经过过滤、冻干、批次控制的底物进行运输。有不同的规格可供选择。

天然腔肠菌嗪相关产品：

303   Coelenterazine native

301   Coelenterazine h

340   Coelenterazine 400a

355   e-Coelenterazine

345   Coelenterazine F

346   e-Coelenterazine-F

370   v-Coelenterazine

398   NanoFuel-V Solvent

399   NanoFuel Solvent

https://www.amyjet.com/brand/D-Luciferin.shtml