Cell Biolabs丨艾美捷——293/Cas9细胞
- 武汉艾美捷科技有限公司2022年1月20日 3:39 点击：560
Cell Biolabs丨艾美捷——293/Cas9细胞
293细胞系是从原代胚胎人类肾脏转化而来的永久性细胞系人腺病毒5型DNA。腺病毒E1区（E1a和E1b）编码的基因为在这些细胞中表达，并参与病毒启动子的反式激活，使这些细胞产生高水平的蛋白质。E1还补充重组腺病毒载体中的E1缺失，允许病毒复制。Cell Biolabs
293/Cas9细胞系稳定表达Cas9和嘌呤霉素抗性基因。利用逆转录病毒将Cas9和嘌呤霉素抗性基因导入亲代293细胞。
Cell Biolabs
Cell Biolabs：细胞学试剂品牌，为生物技术和研究类客户提供基于细胞功能研究以及疾病等方面的技术和服务。主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。
Cell Biolabs / 艾美捷 293/Cas9细胞系表达Cas9蛋白。293个细胞或293/Cas9细胞用酶裂解RIPA缓冲液，并使用Cell Biolab的Cas9 ELISA试剂盒（Cat#PRB-5079）检测Cas9蛋白水平（见下图）。
Cell Biolabs 293/Cas9细胞，通过形态学测定，台盼蓝染料排除，活细胞计数。293/Cas9细胞已经过测试，没有微生物污染。
1.培养基：DMEM（高糖），10%胎牛血清（FBS），0.1 mM MEM非必需氨基酸（NEAA），2 mM L-谷氨酰胺，1%Pen-Strep，（可选）1-2µg/mL嘌呤霉素。
2.冷冻培养基：70%DMEM、20%FBS、10%DMSO。
从冷冻细胞建立293/Cas9培养基
1.将10毫升完整的DMEM生长培养基置于50毫升锥形管中。解冻冰冻的食物在37°C水浴中轻轻搅拌，在1-2分钟内将细胞冷冻。净化空气用70%（v/v）乙醇擦拭冷冻瓶表面。
2.将解冻的细胞悬浮液转移到含有10mL生长培养基的锥形管中。
3.在室温下，以1000 rpm的转速离心5分钟，收集细胞。移除通过抽吸生长培养基。
4.通过轻轻移液，将细胞重新悬浮在锥形管中的15ml新鲜生长培养基中然后下来。
5.将15 mL细胞悬浮液转移至T-75组织培养瓶中。将电池置于37°C的温度下培养箱中的二氧化碳浓度为5%。
6.每天监测细胞密度。细胞应在培养物达到95%汇合时传代。
Cell Biolabs 相关试剂盒研究方案：
1.CBA-100：细胞选择™ 24孔细胞迁移试验（8µm，比色法）
2.CBA-106：细胞选择™ 96孔细胞迁移分析（8µm，荧光法）
3.CBA-120：细胞选择™ 24孔伤口愈合试验（显微镜）
4.CBA-125：半径™ 24孔细胞迁移分析（显微镜）
5.CBA-126：半径™ 96孔细胞迁移分析（显微镜）
艾美捷科技是Cell Biolabs的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
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Cell Biolabs丨艾美捷——pMXs-Cas9-Puro逆转录病毒载体
逆转录病毒是将可遗传基因导入分裂细胞基因组的有效工具。Cell Biolabs / pMXs Puro逆转录病毒载体基于莫罗尼小鼠白血病病毒（MMLV）。向量提供病毒包信号、转录和处理元件以及用于克隆目标的MCS基因由包装细胞系产生的病毒env基因编码包膜蛋白，该蛋白确定病毒传染性范围。转染包装细胞系产生高滴度，不能复制的病毒。除了哺乳动物体内外源基因的转移和表达最近，逆转录病毒被用于表达沉默RNA（siRNA）以降低表达目的基因在体外和体内的表达。
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Cell Biolabs：细胞学试剂品牌，为生物技术和研究类客户提供基于细胞功能研究以及疾病等方面的技术和服务。主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。
Cas9（CRISPR相关蛋白9）是一种RNA引导的DNA内切酶。这种酶与CRISPR（聚集的规则间隔短回文重复序列）适应性免疫系统各种细菌，包括化脓性链球菌。Cas9能够解开外源DNA（例如质粒DNA或入侵噬菌体DNA），然后检查与20碱基互补的位点对引导RNA的间隔区。如果DNA底物与指导RNA互补，Cas9切割入侵的DNA。
pMXs-Cas9-Puro逆转录病毒载体图谱
注：处理含有传-染-性-病毒的样本，需要遵循推荐的方法，NIH关于所有含有BSL-2生物体的材料的指南。始终戴手套，使用过滤过的尖端和在生物安全罩下工作。
相关文献：
1. Kitamura T., et al., (2003) Exp. Hematol. 31, 1007-1014.
2. Heler, R; Samai, P; Modell, J. W.; Weiner, C; Goldberg, G. W.; Bikard, D; Marraffini, L. A.
(2015). Nature. 519 :199–202.
3. Jinek, M.; Chylinski, K.; Fonfara, I.; Hauer, M.; Doudna, J. A.; Charpentier, E. (2012). Science.
337: 816–821.
4. Mali, Prashant; Esvelt, Kevin M; Church, George M (2013). Nature Meth. 10: 957-963.
5. Mali, Prashant; Aach, John; Stranges, P Benjamin; Esvelt, Kevin M; Moosburner, Mark; Kosuri,
Sriram; Yang, Luhan; Church, George M (2013). Nature Biotech. 31: 833-838.
6. Gilbert, Luke A.; Larson, Matthew H.; Morsut, Leonardo; Liu, Zairan; Brar, Gloria A.; Torres,
Sandra E.; Stern-Ginossar, Noam; Brandman, Onn; Whitehead, Evan H.; Doudna, Jennifer A.;
Lim, Wendell A.; Weissman, Jonathan S.; Qi, Lei S. (2013). Cell. 154: 442-451.
7. Zheng Q, Cai X, Tan MH, Schaffert S, Arnold CP, Gong X, Chen C-Z, and Huang S. (2014)
BioTechniques 57:115-124.
Cell Biolabs 相关试剂盒研究方案：
1.CBA-100：细胞选择™ 24孔细胞迁移试验（8µm，比色法）
2.CBA-106：细胞选择™ 96孔细胞迁移分析（8µm，荧光法）
3.CBA-120：细胞选择™ 24孔伤口愈合试验（显微镜）
4.CBA-125：半径™ 24孔细胞迁移分析（显微镜）
5.CBA-126：半径™ 96孔细胞迁移分析（显微镜）
艾美捷科技是Cell Biolabs的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
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Cell Biolabs丨艾美捷——NIH3T3/Cas9细胞
NIH 3T3细胞是从NIH瑞士小鼠胚胎中建立的。这些细胞高度接触抑制对肉瘤病毒病灶形成和白血病病毒传播敏感。细胞现在已经丢失了他们的接触抑制。已建立的NIH3T3生产线进行了5次以上的连续循环试验亚克隆以形成具有最适合转化的形态特征的亚克隆化验。“3T3”名称是“3天转移，接种物3 x 105”的缩写细胞。“那NIH3T3细胞系是zui 常用的成纤维细胞系之一。Cell Biolabs /NIH3T3/Cas9细胞系稳定表达Cas9和嘌呤霉素抗性基因。Cas9和嘌呤霉素耐药基因均为阴性使用逆转录病毒导入亲代NIH3T3细胞。
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Cell Biolabs：细胞学试剂品牌，为生物技术和研究类客户提供基于细胞功能研究以及疾病等方面的技术和服务。主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。
Cell Biolabs / 艾美捷 NIH3T3/Cas9细胞系表达Cas9蛋白。检测NIH3T3细胞或NIH3T3/Cas9细胞用RIPA缓冲液溶解，并使用Cell Biolab的Cas9 ELISA试剂盒（Cat）检测Cas9蛋白水平#PRB-5079）（见下图）。
该冷冻瓶至少含有1.0×10，6台盼蓝形态学测定的NIH3T3/Cas9细胞染料排除和活细胞计数。NIH3T3/Cas9细胞经测试无微生物污染。
1.培养基：D-MEM（高糖），10%胎牛血清（FBS），0.1 mM MEM非必需氨基酸（NEAA），2 mM L-谷氨酰胺，1%Pen-Strep，（可选）1-2µg/mL嘌呤霉素。
2.冷冻培养基：70%DMEM、20%FBS、10%DMSO。
过程：
1.将10毫升完整的DMEM生长培养基置于50毫升锥形管中。解冻冰冻的食物在37°C水浴中轻轻搅拌，在1-2分钟内将细胞冷冻。净化空气用70%（v/v）乙醇擦拭冷冻瓶表面。
2.将解冻的细胞悬浮液转移到含有10mL生长培养基的锥形管中。
3.在室温下，以1000 rpm的转速离心5分钟，收集细胞。移除通过抽吸生长培养基。
4.通过轻轻移液，将细胞重新悬浮在锥形管中的15ml新鲜生长培养基中然后下来。
5.将15 mL细胞悬浮液转移至T-75组织培养瓶中。将电池置于37°C的温度下培养箱中的二氧化碳浓度为5%。
6.每天监测细胞密度。细胞应在培养物达到95%汇合时传代。
Cell Biolabs 相关试剂盒研究方案：
1.CBA-100：细胞选择™ 24孔细胞迁移试验（8µm，比色法）
2.CBA-106：细胞选择™ 96孔细胞迁移分析（8µm，荧光法）
3.CBA-120：细胞选择™ 24孔伤口愈合试验（显微镜）
4.CBA-125：半径™ 24孔细胞迁移分析（显微镜）
5.CBA-126：半径™ 96孔细胞迁移分析（显微镜）
艾美捷科技是Cell Biolabs的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
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Cell Biolabs丨艾美捷——小鼠抗FLAG标记单克隆抗体
Cell Biolabs 小鼠抗FLAG标记单克隆抗体基本参数：
cat#：AKR-004
存储：-20ºC
数量和浓度：100µg蛋白A纯化抗体，1mg/mL，1XPBS，pH值7.2，含0.05%NaN3
保质期：在适当的储存条件下，自收到之日起1年；避免多次冻融循环
宿主种类：小鼠
同型：IgG1
克隆：FG4R
免疫原：与KLH结合的DYKDDDDK合成肽
特异性：识别N-端、C-端或内部抗原表位DYKDDDDK标签
敏感性：1-5ng FLAG标记的融合蛋白（免疫印迹/ECL）
应用：免疫印迹（1:1000至1:3000；在室温下培养1小时）免疫染色（1:500至1:2000）ELISA、斑点杂交或免疫沉淀（用户确定作稀释）
Cell Biolabs
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Cell Biolabs /艾美捷 小鼠抗FLAG标记单克隆抗体结果示例：
图：抗-FLAG标记免疫印迹法克隆#FG4R。抗-FLAG标记抗体1微克/毫升（1:1000稀释度）。车道1：未被转化控制通道2:HEK293细胞转染DYKDDDDK标记蛋白载体
Cell Biolabs 相关试剂盒研究方案：
1.CBA-100：细胞选择™ 24孔细胞迁移试验（8µm，比色法）
2.CBA-106：细胞选择™ 96孔细胞迁移分析（8µm，荧光法）
3.CBA-120：细胞选择™ 24孔伤口愈合试验（显微镜）
4.CBA-125：半径™ 24孔细胞迁移分析（显微镜）
5.CBA-126：半径™ 96孔细胞迁移分析（显微镜）
艾美捷科技是Cell Biolabs的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
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Cell Biolabs细胞学试剂丨Cell Biolabs中国区代理丨艾美捷
Cell Biolabs：细胞学试剂品牌，为生物技术和研究类客户提供基于细胞功能研究以及疾病等方面的技术和服务。主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。
Cell Biolabs的诸多产品均采用了砖利技术，比如病毒纯化方面，其开发的病毒吸附Matrix能有效的识别不同的病毒包膜蛋白而特异吸附不同的病毒颗粒。另外，其Cell Biolabs砖利拥有的知名Platinum (Plat-E, Plat-A and Plat-GP) 逆转录病毒包装细胞系，在生长稳定性和病毒包装滴度方面表现优异，成为众多逆转录病毒包装细胞系中的首选细胞。
Cell Biolabs: a brand of cytological reagents, which provides biotechnology and research customers with technologies and services based on cell function research and diseases. It mainly covers cell research, cell signaling pathway and protein biology, metabolism research, pathogens and toxins, stem cell research and other fields.
Many products of cell Biolabs adopt brick technology, such as virus purification. The virus adsorption matrix developed by cell Biolabs can effectively identify different virus envelope proteins and specifically adsorb different virus particles. In addition, the well-known platinum (plat-e, plat-a and plat GP) retrovirus packaging cell line owned by its cell Biolabs patent has excellent growth stability and virus packaging titer, and has become the preferred cell among many retrovirus packaging cell lines.
Cell Biolabs 产品列表：
cell biolabs AAV-200 ViraDuctin™ AAV Transduction Kit (10 Transductions) 10 transductions
cell biolabs AAV-201 ViraDuctin™ AAV Transduction Kit (50 Transductions) 50 transductions
cell biolabs AAV-300 AAV2 Null Control Virus 50 μL
cell biolabs AAV-301 AAV1-GFP Control Virus 50 μL
cell biolabs AAV-302 AAV2-GFP Control Virus 50 μL
cell biolabs AAV-303 AAV3-GFP Control Virus 50 μL
cell biolabs AAV-305 AAV5-GFP Control Virus 50 μL
cell biolabs AAV-306 AAV6-GFP Control Virus 50 μL
cell biolabs AAV-310 AAV2-Cre Control Virus 50 μL
cell biolabs AAV-320 AAV2-Luc Control Virus 50 μL
cell biolabs AAV-400 pAAV-GFP Control Vector 10 µg
联系邮箱：kefu@labbase.net
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