定量PCR仪的选购

荧光定量PCR的历史：
荧光定量PCR是PCR的一种。PCR仪目的为了基因扩增。在基因扩增中最重要的就是升降温过程，最早的PCR就是三个水浴锅,一个机械臂，定时抓出反应槽转换水浴锅。PCR的结果需要借助其他手段来检测。后来随着定量技术的发展，将PCR和检测做成一体，就形成了定量PCR仪。由于应用的是荧光技术，同时在每个扩增过程都能实施监控，所以标准的叫法为实时荧光定量PCR仪。准确的讲实时荧光定量PCR没有自动加样和标本处理系统，只能算半自动的。PCR仪简单的讲，就是一个温控设备和一个检测设备。
荧光实时定量PCR技术最早是在1992年由一位日本人Higuchi第一次报告提出的，他当时想实时地看到PCR反应的整个过程，由于当时EB（溴化乙锭）的广泛使用，最直接想到的标记染料就是EB，可以插入到双链核酸中受激发光，在PCR反应的退火或延伸时检测掺入到双链核酸中EB的含量就能实时监控PCR反应的进程，考虑到PCR反应的数学函数关系，结合相应的算法，通过加入标准品的方法，就可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。这样，在普通PCR仪的基础上再配备一个激发和检测的装置，第一台实时定量PCR仪就诞生了。
而真正市场化的美国应用生物系统公司自1996年推出荧光定量PCR仪，ABI公司一直标称其推出了全世界首台荧光定量PCR仪
目前市面上有多家品牌，主要有ABI、Roche、Bio-Rad和MJ

荧光定量PCR的技术
定量PCR技术自产生以来，不断发展完善，到目前为止已经非常成熟了。标记方法由最初单一的染料法，发展到了特异性更高的探针法，如Taqman、Molecular Beacon、Fret等不同方法的标记探针，其中由于Taqman探针的广泛使用，实时定量PCR的方法也称为Tagman法。
在过去很长一段时间里，由于PCR检测的灵敏性和不稳定性，容易产生假阳性，国家对这种检测方法在临床上的应用是禁止的。但是随着荧光定量PCR技术的发展成熟和完善，特别是Taqman方法的广泛使用，使得荧光定量PCR以一种新的PCR检测技术得以在在临床检测上使用，如对病毒、病菌及其它致病微生物，致病基因的检测。
Taqman探针法具有高适应性和可靠性，实验结果稳定重复性好；由引物、探针序列和引物探针相互作用关系的双重保证克服了普通PCR的缺陷，现在国家对这方面的限制正逐步解开，目前正在规范相应的法律法规，为荧光定量PCR技术在分子诊断中的广泛使用做准备工作。
最常用的有三种检测模式：
１、R Green I检测模式。
2、Taqman探针法
3、杂交探针

荧光定量检测技术的优势
相对于抗原抗体法检测具有以下优势：
1. 研发方便，设计探针和摸定反应条件可以在短时间内完成，顺利的话，只需几次反应和几天的工作量就可以完成一种检测方法的建立。而拿到一个好的抗体至少需要一个完整的免疫周期，还不考虑筛选获得一个高特异性、高滴度免疫株的成功几率。
2. 检测灵敏度高，是一个基于PCR的信号放大检测系统。
3. 可以准确定量。

荧光定量PCR的应用
荧光定量检测技术在临床诊断方面很多，主要集中在各种病原体引起疾病的临床诊断，如肝炎类疾病、性病、与优生优育相关的疾病以及肺结核等等。
荧光定量PCR的应用不仅限于临床检测，在基础研究和海关、食品卫生检疫方面的应用前景都相当广泛。
基础研究中，对某一样品中目标基因含量的测定需求是相当广泛的，荧光定量PCR技术具有操作方便、反应快速的特点，可以对一些微量样品进行检测。所以在新药开发、超早期感染用药物及疗法的研究与开发、药物疗法研究、新诊断及检验试剂的开发、血液检验漏检率等方面，荧光定量PC技术有着广泛的应用前景。
在海关卫生检疫方面，进口的粮食、食品、花果是否安全，是否含有危险或潜在危险的成分，都可以用荧光定量PCR技术进行检测。一些瘟疫流行地区进口的相关食品也需要进行检测，比如前一段时间，欧洲流行疯牛病，日本流行猪口蹄疫，那么从这些地区进口相应的肉品及肉类加工产品，就要进行食品卫生检疫
在食品卫生检疫方面，如转基因食品，由于其是否安全目前尚无定论，因此有些国家明确规定转基因食品需要标签标识区分，我国也正在出台类似的法律法规。
此外一些生物类的恐怖袭击等，都可以用荧光定量PCR的方法进行快速检测。
所以荧光定量PCR最明显的对象主要是医院的检验科、中心实验室、临检中心、地方的疾病控制中心、生物技术公司、血液制品相关的部门。当然科研院所、学校是少不了的。

市场竞争情况：

现在国内国外荧光定量PCR仪的品牌不是很多，国内外品牌及产品代理商一览（见表一）
ABI美国应用生物公司：老牌的生物公司贵族，荧光定量PCR仪有四种型号的。其中5700、7700已停产；现在剩Prism® 7000荧光定量PCR仪、Prism® 7900高通量荧光定量PCR仪。ABI在中国有自己的办事处和销售人员。由于ABI是生物仪器的著名品牌，同时在产品推广方面有独到之处，所以其产品的销路一直很好。
ROCHE罗氏诊断：单一产品LightCycler，以科研定位为主。其很特色离心、气加热、毛细管等，设计另类，是最有特色的PCR仪。
罗氏其很多产品如诊断试剂，都进入医院，与医院的关系密切，在国内很多医院使用，市场做得很不错。
MJ Research：实时荧光PCR仪刚进入中国不久，孔间能使用不同温度是其特色。，其MJ Research在北京设立了办事处，其DNA Engine Opticon产品于2003年4月2日获得国家食品药品监督管理局的医疗器械准入证。
该公司系列产品早先是由基因公司代理，市场销售十分火爆，于2003年起正式由东胜公司独家代理。MJ的扩增仪在生命科研领域比较出名，加之东胜公司的擅长在学校和科研院所的推广，所以其荧光定量PCR在以实验为主体的研究领域占有重要地位。
伯乐： iCycler是其主打，进入中国已经比较久了，产品和5700一样，是扩增仪上加装定量模块而成，特点是价格较低。

生产商 型号 参考报价 代理销售商
美国应用生物系统公司 PRISM 7900高通量型 美国应用生物系统公司（上海）

7000型
瑞士罗氏诊断 LightCycler US$88,000 罗氏诊断产品（上海）有限公司
美国MJ Research公司 Opticon 东胜创新生物科技科技有限公司

Opticon2多色荧光
美国Bio－Rad iCycler iQ 伯乐分析生化仪器有限公司（上海）
美国Stratagene Mx3000P 安莱公司

Mx4000
Corbett Roter Cene-3000 基因公司
美国Cepheid公司 SmartCycler US$38000 上海皓嘉科技发展有限公司

英国HYBAID 不祥 广州三元科技有限公司

日本BIOER 齐全 上海华耀贸易有限公司

上海枫岭生物技术公司 FTC2000 上海枫岭生物技术公司
厦门安普利生物工程有限公司 FluoScan 9700 厦门安普利生物工程有限公司

杭州博日科技有限公司 FQD-33A ￥428,000 杭州博日科技有限公司

深圳Hema公司 Hema荧光定量PCR ￥98,000 深圳Hema公司
表一

荧光定量PCR仪技术指标比较
荧光定量PCR简单讲即温控设备pcr和荧光检测系统、计算机及软件系统。
关于温控，包括温度的均一性、升降温速度。主要是介质问题。理想的介质是要求导热性好、比热大、接触紧密。
水浴和油浴：温控的首选，比热大（油比水更大）、与反应物无缝接触，效果当然最好。
缺点不能自动化、小型化，只有最初的水浴锅式使用。
硅加热：Peltier这是使用最普遍的一种，优点：易自动化、速度快、直接加热降温，效果当然好，
缺点1、成本较高；
2、第二其使用的介质是金属，导热虽然好，但是与反应管，很难做到无缝接触，定性时代可以加油，但用荧光定量，由于油有荧光信号不能用。所以在无缝接触上差一些。
空气加热：与反应体系无缝接触
缺点：空气的导热性差、比热小的弱点明显。因此空气加热的要利用离心来产生空气流动，增强导热性，同时使用毛细管，加大接触面积、试剂微量化来弥补。这样做了以后效果还是不错。
同时，使用离心，对标本量增大是有影响的，并且标本量越大，空气比热小的弱点就越明显，所以空气加热的仪器标本量都比较小。使用毛细管后由于反应液与管的接触面积增大，吸附现象更大，因此试剂的通用性差，一般要专门开发，成本高，虽然试剂用量少，但因为是专用试剂，每人份就是以实际量算，并不省试剂。反而增加了毛细管成本。
关于功能，所有的PCR仪功能都大体相同。只有MJ孔间能使用不同温度比较独特，这对于多项目同时检测以及循环参数的调整比较有用。但其实时荧光的仪器刚进入中国不久，

所以这样就可以把市面上的产品分两类，半导体Peltier和空气。
表一7家公司产品，其中罗氏的LightCycler和Corbert的RotorGene是用空气加热，其余是Peltier
当然加热还有电热丝+半导体，致冷还有压缩机
空气的加热的标本量为32/批，其他96/批，iCycler 能达到384/批，这也难怪，是扩增仪上加装定量模块而成，所以如果标本量大，建议不要用罗氏。一则会累死的。同时每个标本要分摊的标准曲线，对照成本太高，试剂也比较受限。

监测系统：
光源，钨灯、激光、发光二极管
检测器：摄像头、光电二极管、光电倍增管PMT
型号 激发光源 检测器
PRISM 7