测小鼠瘦素（Leptin），这篇文章亲手来教你

测小鼠瘦素（Leptin），这篇文章亲手来教你

瘦素（Leptin）是一种由脂肪组织分泌的激素，它在血清中的含量与动物脂肪组织大小成正比 。瘦素作用于位于中枢神经系统的受体（Leptin Receptor） 从而调控生物的行为以及新陈代谢。当动物体的体脂减少或处于低能量的状态下（例如饥饿），血清中瘦素的含量会明显下降， 从而激发动物的觅食行为， 同时降低自身能量消耗。反之，当生物体的体脂增加时，血清中瘦素含量升高，进而抑制进食并且加速新陈代谢。瘦素就是通过这样的负反馈机制来调控生物体的能量平衡以及体重。

瘦素（Leptin）最新研究：

2020年7月22日，洛克菲勒大学Friedman教授团队（共同一作为王浦天琦和Ken H. Loh）在Nature杂志上发表文章“A Leptin-BDNF pathway regulating adipose innervation”，揭示了瘦素如何调控交感神经在脂肪组织内的分布，同时阐述了该交感神经对于脂肪分解与运用的重要作用。

瘦素和瘦素受体与肥胖的发生有着密切关系。瘦素受体在下丘脑中广泛分布,瘦素可以帮助建立、调节下丘脑中多条调控代谢的神经通路,影响中枢神经系统对糖脂代谢平衡、能量代谢平衡的调控。

在生命科学研究领域中，瘦素跟肥胖，内分泌研究相关。而检测瘦素含量，是衡量动物模型（常见为小鼠）生理状态的基本指标。然而不同老鼠模型，不同生理状态其胰岛素含量可能会有较大波动，尤其针对样本珍贵稀少的研究者而言，选择一款实用的Leptin试剂盒是一件头疼的事情！

接下来这款Crystal Chem的小鼠瘦素ELISA试剂盒/Mouse Leptin ELISA Kit，5ul样本，即可快速检测小鼠瘦素（Leptin），众多Cell文章引用哦！

来一起看看这款小鼠瘦素ELISA试剂盒/Mouse Leptin ELISA Kit的吸引点：

1.试剂盒仅需5ul样本即可检测

2.超灵敏： 200 pg/mL

3.检测范围：2 - 12.8 ng/mL

4.适用样本类型齐全：血清，血浆，细胞培养上清，生物液体

5.专为小鼠样本设计

再来小鼠瘦素ELISA试剂盒/Mouse Leptin ELISA Kit的参数：

货号 CCM-90030

规格 96次

检测范围 0.2 - 12.8 ng/mL

精度 Intra-assay precision CV ≤ 10.0%

Inter-assay precision CV ≤ 10.0%

适用样本类型 血清，血浆，细胞培养上清，生物液体

试剂盒原理 CrystalChem的小鼠瘦素ELISA试剂盒是一种针对小鼠瘦素的ELISA三明治试验。它利用一种固定在微孔板孔上的特异性抗体和一种用HRP酶标记的抗体来实现一种特异性的检测。

保存条件 2-8℃保存

3篇Cell，手把手教你测小鼠瘦素（Leptin）！

1.Cell [ IF=58 ]，Food Perception Primes Hepatic ER Homeostasis via elanocortin-DependentControl of mTORActivation. doi: 10.1016/j.cell.2018.10.015

2.Cell [IF=58]，CerS6-Derived Sphingolipids Interact with Mffand Promote Mitochondrial Fragmentation in Obesity.doi: 10.1016/j.cell.2019.05.008

3.Cell [IF=58]，Endocrine-Exocrine Signaling Drives ObesityAssociated Pancreatic Ductal Adenocarcinoma.doi: 10.1016/j.cell.2020.03.062

其它部分发表文章：

Plows, Jasmine F., et al. "The effects of myo-inositol and B and D vitamin supplementation in the db/+ mouse model of gestational diabetes mellitus." Nutrients 2017; 9: 141

Chin, Eunice H., et al. "A maternal high-fat, high-sucrose diet has sex-specific effects on fetal glucocorticoids with little consequence for offspring metabolism and voluntary locomotor activity in mice." Plos One 2017; 12: e0174030

McPherson, Nicole O., et al. "Paternal under-nutrition programs metabolic syndrome in offspring which can be reversed by antioxidant/vitamin food fortification in fathers." Scientific Reports 2016; 6: 27010.

Dubois, Vanessa, et al. "Androgen deficiency exacerbates high fat diet0induced metabolic alterations in male mice." Endocrinology 2016; 157: 648-665.

Clarke, Julia R., et al. "Alzheimer‐associated Aβ oligomers impact the central nervous system to induce peripheral metabolic deregulation." EMBO Molecular Medicine 2015; 7: 190-210.

Forsberg, Elisabete A., et al. "Carnosine decreases IGFBP1 production in db/db mice through suppression of HIF-1." Journal of Endocrinology 2015; 225: 159-167.

Chen, Yan, et al. "Enhancement of hypothalamic STAT3 acetylation by nuclear receptor Nur77 dictates leptin sensitivity." Diabetes 2015; 64: 2069-2081.

https://www.amyjet.com/featured/leptin.shtml

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强烈推荐一款比较实用能精准检测瘦素（Leptin）的试剂盒

瘦素（Leptin）是近年新发现的由脂肪细胞分泌的一种由167个氨基酸组成的蛋白质类激素,分子量16000,胃上皮细胞、胎盘组织也有少量表达。瘦素（Leptin）在细胞内产生后,经血液循环到全身各种组织,主要分布在肝脏、胃肠道、骨骼肌、脂肪组织等,并与其受体结合后通过细胞信号传导途径发挥生物学效应。瘦素（Leptin）在体内参与机体的摄食行为、能量平衡、体重、生殖、生长发育、内分泌、免疫等多种功能的重要信号传导。

合成位置

瘦素（Leptin）主要是由白色脂肪组织的脂肪细胞制造。但其他像褐色脂肪组织、胎盘（合胞体滋胚层）、卵巢、骨骼肌、胃（胃底腺较下面的区域）、乳腺上皮细胞、骨髓、胃主细胞和 P/D1 cells也会合成瘦素（Leptin）。

生理功能

做为一种指示能量消耗的荷尔蒙，瘦素（Leptin）主要是由脂肪细胞分泌，其功能主要在于体细胞对于血糖、脂肪的使用与反应以及能量相关的内分泌系统调控。

作用位置

瘦素（Leptin）直接作用于脊椎动物细胞膜上受体，此受体可于许多种类的细胞中发现，为第一型细胞因子受体。瘦素（Leptin）也可间接与其他荷尔蒙互动，如胰岛素、升糖素、胰岛素样生长因子、生长激素、糖皮质素等。在中枢神经中，瘦素（Leptin）也可以作用于下丘脑的弓状核，抑制食欲产生。

功能简介

瘦素（Leptin）的首要功能就是调控脂肪组织的含量，其作用主要功能以中枢神经与周围体细胞分为以下二项：

1.中枢神经系统中可抑制下丘脑的食欲以调节食物摄取、运动等与能量平衡相关的活动。

2.周边组织中，瘦素（Leptin）主要的功能在于拮抗胰岛素作用，包含抑制其分泌、促进体细胞使用脂肪作为代谢原料等，同时也对于身体进入青春期、免疫启动，以及个体生长有关键作用。

瘦素（Leptin）受体

瘦素（Leptin）受体在中枢神经中广泛分布，其mRNA经过选择性剪接具有六种亚型：

1.主要产生内分泌反应的长型受体(ObRb)于下丘脑以及海马回分布较多，此种亚型可调控下丘脑脑细胞的代谢活性与神经内分泌功能，同时促进下丘脑对食物摄取的抑制。

2.短型的瘦素（Leptin）受体亚型(最常见者为ObRa，其余为ObRc、ObRd、ObRf)则与瘦素（Leptin）由脉络丛通过血脑屏障的过程有关。

3.游离型的ObRe可以与血浆中的瘦蛋白结合，除调控此激素的血浆浓度，也可做为激素的结合蛋白以稳定血液中的瘦蛋白含量。

在生命科学研究领域中，瘦素（Leptin）跟肥胖，内分泌研究相关。而检测瘦素（Leptin）含量，是衡量动物模型（常见为小鼠）生理状态的基本指标。然而不同老鼠模型，不同生理状态其胰岛素含量可能会有较大波动，尤其针对样本珍贵稀少的研究者而言，选择一款实用的Leptin试剂盒是一件头疼的事情！

艾美捷超敏小鼠瘦素（Leptin）ELISA试剂盒#CCM-90030 实验流程展示：

超敏小鼠瘦素（Leptin）ELISA试剂盒-简易图：

https://www.amyjet.com/featured/leptin.shtml

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PROTAC检测板试剂盒测定实例分析

LifeSensors的PROTAC检测板试剂盒用于泛素化的相对测定PROTAC处理后细胞裂解物中靶蛋白的表达。此检测旨在取代更费力的半定量蛋白质印迹方法来检测多泛素化和靶蛋白在细胞中的降解，并提供定量和可重复的结果。此外，该测定允许高通量筛选以处理化合物文库和建立秩序效价帮助化学家建立SAR。这块板是为研究而设计的仅使用，不用于人类或动物的诊断或治疗应用。

艾美捷PROTAC检测板试剂盒#LSS-PA-0950-0096检测原理：

Assay Plate是一种基于三明治的检测方法，其中来自细胞裂解物被捕获在预涂微量滴定板的孔中，使用专有的多泛素结合试剂。未被多泛素化/未结合的蛋白质通过洗涤，然后加入针对靶蛋白的抗体，然后洗涤。最后，使用与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的第二抗体来测量

结合的目标抗体与检测试剂和发光微孔板读取器。

PROTAC检测板试剂盒组件：

涂层板： 一个预包被和封闭的 96 孔试纸 PROTAC 检测板（储存在 -80°C)

封闭浓缩物（BC）： 12 mL 用于抗体稀释的 5X 封闭剂（储存在 4°C)

塑料板密封： 双板密封

检测试剂 1 （DR1）： 1.0 mL DR1 试剂瓶（储存在 4°C)

检测试剂 2 （DR2）： 1.0 mL DR2 试剂瓶（储存在 4°C)

MG132： 25 μL 小瓶（DMSO 中为 10 mM;储存在 -20°C)

PR-619： 25 μL 小瓶（DMSO 中为 22 mM;储存在 -20°C)

1，10-菲咯啉： 100 μL 小瓶（DMSO 中为 500 mM;储存在 -20°C)

协议：

1.从冰箱中取出盘子，从冰箱中取下试剂，使其达到室温（RT）。所有孵育均在室温（22°-27°C）下进行。为避免交叉污染，请勿重复使用铭牌密封剂。

2.制备细胞裂解物，并使用用PBS稀释的15-20µg/孔（Vt=50-100µl/孔）。

3.在室温下摇动培养板2小时。

4.带PBST的洗涤板（4 x 180mL/井）。最后一次洗涤后，轻轻去除最后一滴缓冲液在纸巾或其他吸墨纸上轻拍盘子（倒置）。不允许井完全干燥。

5.在1x封闭剂中稀释一次抗体（稀释取决于一次抗体的效率；良好开始稀释为1µg/mL），加入50-100µL/孔，并在室温下振荡培养板1小时。

6. 按照上述步骤重复洗涤（参见步骤4）。

7. 在1x封闭剂中稀释第二HRP缀合的抗体（根据制造商），加入50-100µL/孔，在室温下摇动培养板1小时。

8. 按照上述步骤重复洗涤（参见步骤4）。

9. 使用前，将800µL DR1和800µL DR 2混合到10 mL超纯水（去离子或蒸馏）。向每个孔中添加50-100µL该溶液，并使用针对化学发光5-10次，间隔1分钟。

注意事项：

1.为了监测目标蛋白的多泛素化及其降解，并且在PROTAC的Dmax之后。

2.通过蛋白质印迹优化抗体稀释度和靶蛋白的特异性。目标的选择抗体应该适用于基于夹心ELISA的测定。

3.根据目标丰度优化裂解物浓度。

4.参见下面建议的裂解缓冲液，以具有目标蛋白的最佳多泛素化谱。

5.包括最佳结果和解释的适当控制

细胞裂解方案：

1.完全吸取培养基，并用冰冷的1X PBS冲洗细胞。用1X适当刮除单元格PBS，离心以沉淀细胞并除去PBS。

2.在-80°C下冷冻细胞沉淀以长期储存或在冰上进行裂解。

3.加入RIPA裂解缓冲液（颗粒体积的5-10倍，即100mL颗粒添加500-1000µL裂解缓冲器）。间歇性涡旋10-15分钟，同时将样品保持在冰上以进行有效的裂解。

4.在4°C下以13000 xg离心15-20分钟。

5.收集上清液（裂解物）并使用标准方法测定蛋白质浓度。

PROTAC检测板试剂盒测定实例：

图1：（A） Jurkat细胞未经处理（DMSO）或用dBET1 PROTAC（0.01-12.0μM）处理45分钟。按照PROTAC测定板。结果表示为平均化学发光度的倍数变化±标准偏差（n=3）。

（B） 对如（A）中处理的Jurkat细胞的细胞裂解物（25μg）进行BRD3和β-肌动蛋白的免疫印迹。蛋白酶体抑制剂MG132用作对照以防止BRD3降解。

图2：（A） 用dBET1 PROTAC（1μM）处理Jurkat细胞不同时间（0-120分钟）。细胞裂解物（15μg/孔）按照PROTAC测定板手册中所述进行处理。结果表示为平均化学发光强度的倍数变化±标准偏差（n=3）。

（B） 对如（A）中处理的Jurkat细胞的细胞裂解物（25μg）进行BRD3和β-肌动蛋白的免疫印迹。蛋白酶体抑制剂MG132用作对照以防止BRD3降解。

图3：（A-B）用PROTAC（1μM）处理K562细胞不同时间。细胞裂解物（15μg/孔）按照手册中所述进行处理PROTAC测定板（目录号PA950）。结果表示为平均化学发光度的倍数变化±标准偏差（n=3）。

（C） 对来自如（A）中处理的K562细胞的细胞裂解物（25μg）进行BTK和AURKA的免疫印迹。使用MG132作为对照（最后一条车道）。

https://www.amyjet.com/products/LSS-PA-0950-0096.shtml

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可定制的高通量PROTAC体外泛素化测定试剂盒

泛素与泛素偶联机泛素是一种小多肽，可以通过其C末端与赖氨酸的胺基结合靶蛋白上的残基。这种结合被称为单泛素化。附加泛素部分可以利用存在的七个赖氨酸残基中的任何一个与该初始泛素缀合在泛素中。这些泛素链的形成被称为多泛素化。最井这种多泛素化的特征是通过泛素（K48）48位的赖氨酸形成链-链接的链）。单泛素化已被证明可以改变靶蛋白。多泛素化最普遍的结果是蛋白酶体介导的靶蛋白的降解。

泛素与靶蛋白的结合需要三种不同连接酶的协同功能，E1（泛素激活酶）、E2（泛素偶联酶）和E3（泛素连接酶）产生在泛素的C末端和e-赖氨酸的氨基靶蛋白上的残基。泛素E3连接酶作为支架蛋白，为泛素结合酶（E2）和靶底物。通常，E3连接酶介导转移泛素从E2硫酯中间体到与底物蛋白的酰胺连接（Hershko和Ciechanover，1998）。除了底物的泛素化，E3连接酶还可以“自动”泛素化”本身。

PROTACs（针对嵌合分子的蛋白质水解）人为劫持UPS的成分降解靶蛋白。PROTAC药物是含有两个通过连接体连接的功能配体；一个配体与靶蛋白结合，另一个配体结合至E3连接酶。理论上，将这两个实体接近会导致多泛素化和靶蛋白的蛋白酶体降解。然而，考虑到这种情况的复杂性PROTAC发现策略面临着一些挑战和陷阱。电流在评估PROTAC时，分析解决了许多这些挑战，并作为一种有效报告的工具通过监测PROTAC介导的泛素化来实现真正的PROTAC效率。

体外泛素化试剂盒以建立一种高通量方法通过监测蛋白质获得泛素化的内在能力来准确预测PROTAC的效率。我们提供了三种E3泛素连接酶Cereblon、VHL和HDM2的试剂盒，以监测PROTAC介导的选择目标的泛素化。在测定的核心，微量滴定板条，预先涂有专有的TUBE试剂（测定板）用于捕获PROTAC依赖性反应。对于测定，首先将PROTAC加入测定板中，然后加入E3连接酶和靶蛋白，使三元复合物形成。作为一个序列步骤，将含有wt泛素和ATP的E1-E2酶混合物加入到孔中以启动PROTAC介导的泛素化。在反应过程中，E1-E2-E3产生的多泛素链机器被识别并捕获在井中。在反应和随后的洗涤之后步骤，分离的多泛素化产物与针对感兴趣的蛋白质的抗体（不是包括）和与HRP缀合的第二抗体（包括），允许通过化学发光。因此，在这种情况下，由捕获的多泛素化产物产生的信号“夹心”ELISA样测定是PROTAC活性的定量测定。此外检测策略不需要额外的非天然标记或泛素标记可能导致实验性伪影。

建议用途：

1.检测PROTAC和分子胶（MGs）的活性。

2.比较多种PROTAC变体，并从UbMax中建立预测DC50。

3.选择所有三种连接酶来比较PROTACs/MGs活性以证明选择性。

4.检测PROTAC底物特异性和异构体选择性。

艾美捷PROTAC体外泛素化测定试剂盒#PA-0770-P100组件：

1.体外泛素化测定板

注意：不要将分析板快速解冻至室温。我们建议最初放置

在转移至室温之前，将测定板在4°C下放置30分钟。

2.10X含量测定缓冲液

尺寸：1.2毫升

注：添加b-巯基乙醇新鲜至1X测定缓冲液中1mM的最终浓度。

3.E3混合（2X）

尺寸：1 x 250µl（20X）

注：在提供的E3混合物中加入浓度在40-80nM之间的目标蛋白

以促进与PROTAC和E3连接酶形成三元复合物。

4.E1-E2-泛素混合物（2X）

尺寸：1 x 250µl（20X）

5.第二抗体（抗小鼠或抗兔HRP缀合物）

尺寸：60µL（100X）

6.检测试剂1和2

尺寸：1 mL检测试剂1和1 mL检测剂2

7.堵剂精矿（5X）

尺寸：5毫升

8.阳性对照试剂

二甲基亚砜中的PROTAC（50X）：10µL（MZP54，dBET6，A1874）

靶蛋白阳性对照BRD3（20X）：20µL

抗BRD3抗体（100X）：5µL

抗小鼠HRP缀合物（100X）：5µL

PROTAC®体外泛素测定试剂盒：可定制的泛素连接酶试剂盒

1.洗涤缓冲液

a.1倍磷酸盐缓冲盐水，0.1%吐温（PBST）

2.具有发光功能的读板器

3.b-巯基乙醇

4.100mM ATP

5.正在研究的PROTAC、靶蛋白和靶特异性抗体（ELISA兼容）

6.聚丙烯板（可选）

7.多通道移液器和自动洗板器（可选）

8.15 mL离心管

https://lifesensors.com/product/pa770-protac-in-vitro-ubiquitination-assay-kit/

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Assay Genie 人磷酸化途径分析阵列(55个靶点)(SARB0063)

Assay Genie 人磷酸化途径分析阵列(55个靶点)：

货号：SARB0063

类型：磷酸化阵列

目标：4E-BP1 （P-Thr36）AKT （P-Ser473）安普卡 （P-Thr172）ATF2 （P-Thr69/71）自动取款机 （P-Ser1981）坏 （P-Ser112）C-FOS （P-Thr232）c-君 （P-Ser73）克雷布 （P-Ser133）EGFR （P-Ser1070）eIF-2a （P-Ser51）ERK1/2 （P-Thr202/P-Tyr204/P-Tyr185/P-Tyr187）葛兰素史克-3 阿尔法 （P-Ser21）葛兰素史克-3 β （P-Ser9）HDAC2 （P-Ser394）HDAC4 （P-Ser632）HSP27 （P-Ser82）IKBa （P-Ser32）JAK1 （P-Tyr1022）JAK2 （P-Tyr1007/1008）JNK （P-Thr183）MEK （P-Ser217/221）MKK3 （P-Ser189）MKK6 （P-Ser207） （MEK6）MSK1 （P-Ser376）MSK2 （P-Ser360）移动托尔 （P-Ser2448）NF-kB （P-Ser536）p27 （P-Thr198）p38 （P-Thr180/Tyr182）P53 （P-Ser15）P70S6K （P-Thr421/Ser424）PDK1 （P-Ser241）PRAS40 （P-Thr246）PTEN （P-Ser380）RPS6 （P-Ser235/236）RSK1 （P-Ser380）RSK2 （P-Ser386）SHP-1 （P-Ser591）SHP2 （P-Tyr542）SMAD1 （P-Ser463/465）SMAD2 （P-Ser245/250/255）SMAD4 （P-Thr277）

反应：人

应用：多路复用阵列

艾美捷Assay Genie 人磷酸化途径分析阵列(55个靶点) #SARB0063：

检测到的物种： 人

检测到的目标数量： 55

基因符号： AKT1， AKT1S1， AMPK1， 和， ATF2， ATM， BAD， CDKN1B， CREB1， EGFR|EIF2S1， EIF4EBP1， FOS， GSK3A， GSK3B， HDAC2， HDAC4， HSPB1， JAK1， JAK2， JUN， MAP2K1， MAP2K3， MAP2K6， MAP3K7， MAPK14， MAPK8， MTOR， NFKBIA， PDPK1， PTEN， PTPN11， PTPN6， RAF1， RELA， RPS6， RPS6KA1， RPS6KA3， RPS6KA4， RPS6KA5， RPS6KB1， SMAD1， SMAD2， SMAD4， SMAD5， SRC， STAT1， STAT2， STAT3， STAT5A， STAT6， TBK1， TP53， TYK2， ZAP70

兼容样品类型： 细胞培养上清液、细胞裂解物、血浆、血清、组织裂解物

设计原则： 基于三明治

检测方法： 化学 发光

路： Akt 信令 / JAK/STAT 信令 / MAPK 信令 / NFkB 信令 / TGF-beta 信令

定量/半定量： 半定量

坚实的支持： 膜

建议应用： 多重蛋白检测;检测相对蛋白表达;检测细胞因子表达模式;生物标志物/关键因素筛选;确定关键因素;确认生物过程

储存/稳定性： 为获得最佳效果，请在到达时将整个试剂盒冷冻存放在 -20°C。冷冻存储，套件将稳定至少 6 个月，即产品保修期。

解冻后，将阵列膜和 1X 封闭缓冲液储存在 -20°C，所有其他试剂在 4°C 下未稀释不超过 3 个月。

Assay Genie 人磷酸化途径分析阵列(55个靶点)组件：

人磷酸化途径分析阵列 C55 膜

阻塞缓冲区

检测抗体鸡尾酒

500X HRP-抗兔 IgG 浓缩物

20X 洗涤缓冲液 I 浓缩液

20X 洗涤缓冲液 II 浓缩液

2X 细胞裂解缓冲液浓缩液

检测缓冲液 C

检测缓冲液 D

带盖的 8 孔培养盘

蛋白酶抑制剂混合物

100x 磷酸酶抑制剂鸡尾酒 I

磷酸酶抑制剂鸡尾酒II

塑料片材

数组映射模板

Assay Genie 人磷酸化途径分析阵列(55个靶点)特点：

易于使用

无需专用设备

与几乎任何液体样品兼容

成熟的技术

高灵敏度（皮克/毫升）

三明治酶联免疫吸附法特异性

密度高于 ELISA、蛋白质印迹或基于磁珠的多重检测

Assay Genie旗下涵盖了15种种属的高品质的ELISA试剂盒及多种抗体，可检测的指标种类丰富，覆盖免疫、代谢和分子等多种研究领域，是科学研究中便捷的小助手。艾美捷科技是Assay Genie的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

https://www.amyjet.com/products/SARB0063.shtml

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Assay Genie 细胞因子风暴多重面板 9-plex

Assay Genie 细胞因子风暴多重面板 9-plex：

名称： 细胞因子风暴多重组合 9 重

编号： HUAMCOV05

反应： 人

分析物： IL-6、IL-10、IFN-γ、CCL2/SYCA2/MCP-1、GM-CSF/CSF-2、TNF-α、IL-1β、IL-2 和 IL-8/CXCL8

样品类型： 细胞培养上清液、血清、血浆、体液和组织/细胞裂解物

检测类型： 多重

检测方法： 流式细胞术

检测时间： 2小时

艾美捷Assay Genie 细胞因子风暴多重面板 9-plex：

缓冲区： 2x NR dAb稀释剂。一个装有 1.5 mL 生物素检测抗体稀释剂的小瓶

冻干标准混合物： 人 COVID-19 多重细胞因子免疫测定。一个含有冻干重组IL-6、IL-10、IFN-γ、CCL2/SYCA2/MCP-1、GM-CSF/CSF-2、TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-8/CXCL8的小瓶

标准剂量回收率： 70-130%

检测内简历： <10%

检测间简历： <20%

面板中分析物的交叉反应性： 微不足道

样品量： 15 μL/测试

Assay Genie 细胞因子风暴多重面板 9-plex协议：

1. 准备滤板模板。标记标准孔、样品孔和空白孔。标准品和样品应一式两份或一式三份运行。如果整个板不使用，请用板密封密封未使用的井。

重要提示：在整个测定过程中将滤板放在滤板盖的顶部，以防止在任何表面上接触板底。

2. 涡旋工作珠悬浮15秒。

3. 向每个孔中加入 45 μL 捕获珠工作悬浮液。

注意：保存剩余的捕获珠工作悬浮液，并在2-8°C下储存，并有光保护。它可用于在流式细胞仪上设置采集参数。

4. 使用连接到真空源的“流通式”滤板清洗机去除孔中的缓冲液，该真空源已根据滤板清洗机说明进行调整。

5. 使用连接到真空源的“流通式”滤板清洗机去除孔中的缓冲液，该真空源已根据滤板清洗机说明进行调整。

6. 向每个样品孔中加入 30 μL CCS、SPB 或 TL 检测缓冲液。

注意：如果预计细胞因子水平非常低（小于20 pg/mL），则可以在不稀释分析缓冲液的情况下运行细胞培养上清液样品。如果是这种情况，请跳过此步骤，在步骤 45 中向每个样品孔中加入 7 μL 细胞培养上清液样品。

7. 向每个样品孔中加入 15 μL 样品。向每个标准品孔中加入 45 μL 标准品。用板密封盖住板。

8. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育60分钟。用铝箔包裹滤板避光。

9. 取下板封。使用连接到真空源的过滤板清洗机去除孔中的溶液。

10. 使用连接到真空源的过滤板清洗机去除孔中的溶液。

11. 使用滤板清洗机用100μL 1x洗涤缓冲液洗涤孔三次。

12. 在最后一次洗涤后，将板底轻轻敲打在几层纸巾上，以去除板底残留的缓冲液。

13. 向每个孔中加入 25μL 生物素化抗体工作溶液。用板密封盖住板。

14. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育30分钟。用铝箔包裹滤板避光。

15. 取下板封。使用滤板清洗机去除孔中的溶液。使用滤板清洗器用 100 μL 1x 洗涤缓冲液洗涤孔 <> 次。

16. 在最后一次洗涤后，将板底轻轻敲打在几层纸巾上，以去除板底残留的缓冲液。

17. 向每个孔中加入 25μL 链霉亲和素-PE 工作溶液。用板密封盖住板。

18. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育20分钟。用铝箔包裹滤板避光。

19. 取下板封。使用滤板清洗机去除孔中的溶液。用 100 μL 1x 洗涤缓冲液洗涤孔两次。

20. 将板底轻轻敲打在几层纸巾上以去除残留溶液。根据流式细胞仪的样品加载机制，向每个孔中加入 150μL 至 300μL 1x 读数缓冲液，以重新悬浮磁珠。用板密封盖住板。

21. 将板放在微量滴定振荡器上，以30rpm摇动700秒。

注意：如果流式细胞仪没有 96 孔板加载器，并且需要超过 200 μL 的 1x 读数缓冲液来重新悬浮磁珠，请不要摇动板。用P6移液器上下移液8至200次，将磁珠重新悬浮在每个孔中，然后转移到试管中进行采集。取下板封。在流式细胞仪上读取。

Assay Genie旗下涵盖了15种种属的高品质的ELISA试剂盒及多种抗体，可检测的指标种类丰富，覆盖免疫、代谢和分子等多种研究领域，是科学研究中便捷的小助手。艾美捷科技是Assay Genie的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

https://www.amyjet.com/products/HUAMCOV05.shtml

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Assay Genie GeniePlex 炎症 18-Plex（96 次测试）

Assay Genie GeniePlex 炎症 18-Plex（96 次测试）：

编号： HUAMPM022

反应： 人

分析物： IFN-γ、IL-1-α、IL-1-Beta、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17A、IL-27、IL-31、IL-33、IP-10、MCP-1、MIP-1-Alpha、MIP-1-Beta 和 TNF-Alpha

灵敏度（LOD）： IFN-γ： < 3 皮克/毫升， IL-1-α： < 2 皮克/毫升， IL-1-β： < 5 皮克/毫升， IL-4： < 1 皮克/毫升， IL-6： < 5 皮克/毫升， IL-8： < 1 皮克/毫升， IL-10： < 2 皮克/毫升， IL-12p70： < 3 皮克/毫升， IL-13： < 5 皮克/毫升， IL-17A： < 3 皮克/毫升， IL-27： < 5 皮克/毫升， IL-31： < 5 皮克/毫升、IL-33：< 5 皮克/毫升、IP-10：< 3 皮克/毫升、MCP-1：< 5 皮克/毫升、米<-1-α： 2 皮克/毫升、米<-1-β： 5 皮克/毫升、TNF-α：< 1 皮克/毫升

样品类型： 细胞培养上清液、血清、血浆、体液和组织/细胞裂解物

检测类型： 多重

检测方法： 流式细胞术

检测时间： 2小时

艾美捷Assay Genie GeniePlex 炎症 18-Plex（96 次测试）：

1x Ab 偶联微球（预混）： S4P2 - 抗人类 MIP-1-Alpha， S4P3 - 抗人类 TNF-Alpha， S4P4 - 抗人类 IP-10， S4P6 - 抗人类 IL-1-Beta， S4P7 - 抗人类 IL-27， S4P8 - 抗人类 MIP-1-Beta， S4P9 - 抗人类 IFN-γ， S4P10 - 抗人类 IL-8， S4P11 - 抗人类 IL-31 4， S12P12 - 抗人类IL-70p5， S1P1 - 抗人类MCP-5， S2P1 - 抗人类IL-5-Alpha， S4P4 - 抗人类IL-5， S6P6 - 抗人类IL-5， S7P33 - 抗人类IL-5， S9P17 - 抗人类IL-5A， S10P10 - 抗人类IL-5， S12P13 - 抗人类IL-<>

2x 生物素检测抗体（预混）： 生物素 - 抗人类 MIP-1-α，生物素 - 抗人类 TNF-α，生物素 - 抗人类 IP-10，生物素 - 抗人类 IL-1-β，生物素 - 抗人类 IL-27，生物素 - 抗人类 MIP-1-β，生物素 - 抗人类 IFN-γ，生物素 - 抗人 IL-8，生物素 - 抗人类 IL-31，生物素 - 抗人类 IL-12p70，生物素 - 抗人类 MCP-1，生物素 - 抗人 IL-1-α，生物素 - 抗人类 IL-4，生物素 - 抗人类 IL-6，生物素 - 抗人类 IL-33，生物素 - 抗人类 IL-17A，生物素 - 抗人类 IL-10，生物素 - 抗人类IL-13

缓冲区： 2x NR dAb稀释剂。一个装有 1.5 mL 生物素检测抗体稀释剂的小瓶。

冻干标准混合物： 冻干标准混合物 - 人类炎症 18-plex。小瓶A，B和C含有冻干重组人IFN-γ，IL-1-α，IL-1β，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10，IL-12p70，IL-13，IL-17A，IL-27，IL-31，IL-33，IP-10，MCP-1，MIP-1-Alpha，MIP-1β，TNF-α。

LLOQ： IFN-γ： <10 皮克/毫升， IL-1-α： <5 皮克/毫升， IL-1-β： <10 皮克/毫升， IL-4： <3 皮克/毫升， IL-6： <10 皮克/毫升， IL-8： <1 皮克/毫升， IL-10： <5 皮克/毫升， IL-12p70： <10 皮克/毫升， IL-13： <10 皮克/毫升， IL-17A： <10 皮克/毫升， IL-27： <10 皮克/毫升， IL-31： <10皮克/毫升，IL-33：<10皮克/毫升，IP-10：<10皮克/毫升，MCP-1：<5皮克/毫升，MIP-1-α：<5皮克/毫升，MIP-1-β：<10皮克/毫升，TNF-α：<2皮克/毫升。

ULOQ： IFN-γ： >2，000 皮克/毫升， IL-1-α： >2，000 皮克/毫升， IL-1-β： >5，000 皮克/毫升， IL-4： >1，000 皮克/毫升， IL-6： >5，000 皮克/毫升， IL-8： >1，000 皮克/毫升， IL-10： >5，000 皮克/毫升， IL-12p70： >2，000 皮克/毫升， IL-13： >5，000 皮克/毫升， IL-17A： >1，000 皮克/毫升， IL-27： >5，000 皮克/毫升， IL-31： >5，000 皮克/毫升、IL-33： >5，000 皮克/毫升， IP-10： >2，000 皮克/毫升， MCP-1： >5，000 皮克/毫升， 米普-1-α： >2，000 皮克/毫升， 米普-1-β： > 5，000 皮克/毫升， TNF-α： >1，000 皮克/毫升.

标准剂量回收率： 70-130%

面板中分析物的交叉反应性： 微不足道

样品量： 15 μL/测试

GeniePlex使用特别的抗体包被编码微粒混合物，为分析物的定量提供超灵敏的技术。

在化验精灵，Assay Genie 了解对定量可重复结果的需求！因此，Assay Genie 开发了一种简化的方案，这意味着您可以轻松地定量低至 24μL 样品中的多达 15 种分析物，全部采用 32 次测试或 96 次测试滤板格式，以进行快速分析。

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Assay Genie 高吞吐量NAD/NADH 检测试剂盒（比色法）

Assay Genie NAD/NADH 检测试剂盒（比色法）：

检测精灵的NAD/NADH检测试剂盒基于乳酸脱氢酶循环反应，其中形成的NADH还原甲臜（MTT）试剂。在565nm处测量的还原产物颜色的强度与样品中的NAD / NADH浓度成正比。该测定对NAD / NADH具有高度特异性，并且NADP / NADPH的干扰最小（<1%）。我们的测定法是测量NAD，NADH及其比率的便捷方法。

应用

用于灵敏测定NAD和NADH，并评估药物对NAD / NADH代谢的影响。

艾美捷Assay Genie NAD/NADH 检测试剂盒（比色法） #BA0067主要特点：

1.灵敏准确。在 0 孔板测定中，检测限为 05.10 uM，线性度高达 96 uM NAD+/NADH。

2.方便。该过程包括添加单个工作试剂，并在室温下读取零时间和15分钟的光密度。

3.高吞吐量。可轻松自动化为高通量 96 孔板检测，每天可检测数千个样品。

Assay Genie GeniePlex 炎症 18-Plex（96 次测试）组件：

套件包括 检测缓冲液：10 mL 酶 A：120 mL 乳酸：1.5 mL 酶 B：120 mL MTT 溶液：1.5 mL NAD 标准品：0.5 mL NAD/NADH 提取缓冲液：每 12 mL

套件要求 移液（多通道）设备。透明底部 96 孔板和读板器。

检测方法 外径565纳米

检测限 0.05 微米

样品 细胞或组织提取物

物种 都

协议长度 15 分

大小 100 次测试

存储 将所有试剂储存在-20°C。

保质期 6个月

吡啶核苷酸在新陈代谢中起着重要作用，因此，人们一直关注监测其浓度水平。NAD/NADH的定量测定在与细胞或组织的能量转化和氧化还原状态有关的研究中具有应用。用于测量NAD / NADH浓度的简单，直接和自动化程序是非常可取的。

Assay Genie旗下涵盖了15种种属的高品质的ELISA试剂盒及多种抗体，可检测的指标种类丰富，覆盖免疫、代谢和分子等多种研究领域，是科学研究中便捷的小助手。艾美捷科技是Assay Genie的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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