Semaglutide ELISA（KBI5030）检测原理

Semaglutide ELISA（KBI5030）检测原理

Semaglutide（商品名Ozempic）是丹麦诺和诺德公司正在开发的用于治疗2型糖尿病的药物。它以Ozempic的名字销售。作为一种胰高血糖素样肽-1受体激动剂，它通过增加胰岛素的产生来降低血糖水平。它于2012年由诺和诺德的一组研究人员发现，作为利拉鲁肽的长效替代品。临床试验于2015年开始，3期于2016年完成。FDA批准于2016年2017月申请，16年0月FDA咨询委员会以<>-<>投票赞成。它既可以用作注射型药物，也可以用作口服型药物。

艾美捷索马鲁肽试剂盒 / 司美格鲁肽试剂盒（KBI5030）预期用途 ：

KRIBIOLISA™ Semaglutide（Ozempic™）ELISA试剂盒用于估计溶液和人血清中的Semaglutide。

马鲁肽试剂盒/司美格鲁肽试剂盒/Semaglutide ELISA检测原理：

索马鲁肽ELISA是一种用于测定索马鲁肽的竞争性免疫测定法。将抗GLP-1抗体包被在96孔板上。恒定浓度的生物素化GLP-1和不同浓度的未标记的Semaglutide或样品竞争与抗GLP-1抗体的结合。捕获的生物素化GLP-1抗体随后与链霉亲和素-HRP结合，其加入TMB底物后产生可溶性有色产物。通过将终止溶液分配到孔中来停止酶反应。溶液在450nm处的光密度（OD）与标准品或样品中存在的结合的Semaglutide分子的量成反比。

索马鲁肽试剂盒 / 司美格鲁肽试剂盒规格：

Brand：KRIBIOLISA™

Calibrator Range：0 ng/ml-3000 ng/ml

Sensitivity：50 ng/ml

Sample Type：serum and plasma

Reactivity：Human

Shipping Condition：2 - 8 Deg C

Detection Method：Colorimetric

Usage：For Research Use Only

Research Area：Diabetes

https://www.amyjet.com/products/KBI5030.shtml

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AF 680偶联试剂盒特异性及FAQ

AF染料带负电荷，具有亲水性高、亮度高、光稳定性强、仪器相容性好、对pH不敏感等特点。

AF 680偶联试剂盒参数：

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

AF 680偶联试剂盒背景：

FlyLink™ 680:FlyLink™ 680是一种出色的680nm可激发染料，是Cy5.5、Dylight 680和Alexa Fluor 680的超级替代品。它是光谱相似的680nm染料中最亮的。它产生生物学上更特异的缀合物和更少的背景。

艾美捷 AF 680偶联试剂盒信息：

AF 680偶联试剂盒FAQ：

Q1：浓缩后，样品浓度仍低于2 mg/mL？

A1：如果浓缩后样品浓度仍低于2 mg/mL，则可以适当调整标记系统的体积，但最终浓度应大于1 mg/mL。FlyLink的音量™步骤1中的AF488标记溶液应为标记系统体积的10%。在步骤2中，去离子水可能不会结块，并且激活的FlyLink的体积™ 488解决方案保持不变。你也可以根据自己的实验做出适当的调整。

Q2：如何选择合适的纯化柱，以适应不同分子量的待标记样品？

A2：纯化的柱适用于分子量为100KD至200KD的样品。如果样品的分子量大于200kD或小于100kD，则最好配备更合适的纯化柱尺寸。

Q3：待标记样品的分子量是否与FlyLink相似™ AF 488？

A3：如果样品的分子量与FlyLink相似™ AF 488，在完成与本说明书对应的标记步骤后，加入30µL 0.5µM NH4Cl，并在37°C下孵育10分钟，以猝灭freeFlyLink™AF 488，而不需要纯化步骤。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE580-3.shtml

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生物素偶联试剂盒D-AKE120样品制备

生物素偶联试剂盒D-AKE120使用简单快速的方法对抗体进行生物素化/生物素标记。它也可用于偶联其他蛋白质或肽。生物素-阿维丁系统作为一种多级信号放大系统，广泛应用于免疫检测，具有高灵敏度和强特异性。

FlyLink™ 生物素标记试剂盒设计用于直接从含有活性氨基的蛋白质、肽和其他配体制备生物素偶联物。我们试剂盒中提供的生物素已被预激活，可直接用于偶联。FlyLink™ 生物素标记试剂盒包含用于制备生物素标记分子的现成组件。

艾美捷生物素偶联试剂盒：

Cat #: D-AKE120

Size: 100 μg x 3

Storage: Stored at 4°C for 6 months, protected from light

生物素偶联试剂盒供应材料和储存条件：

生物素偶联试剂盒样品制备：

待标记样品的初始浓度应高于2 mg/mL。提示蛋白浓度在2.5mg/mL以上。否则，在实验之前需要增加蛋白质浓度。待标记样品的成分（或储存缓冲液）应符合以下要求：

（1）不含氨基成分，否则会影响偶联效果。

（2）少量BSA不会影响偶联效果。建议使用PBS作为存储缓冲液。

（3）如果样品中含有可能干扰标记的物质，建议用PBS代替缓冲液。具体方法如下

将样品加入超滤膜中，加入200-150µL PBS。在12000 g、4°C、10分钟的温度下离心，然后滤出滤液。然后再次加入PBS，并在12000g，4°C，10分钟下离心。离心后，取出超滤管的内芯，将其置于干净的外管中，并在4000g，4℃，2分钟下离心以收集样品。

*该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE120-3.shtml

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AP偶联试剂盒，一种简单快速的标记方法

背景资料：

AP标记试剂盒设计用于直接从含有游离氨基的蛋白质、肽和其他配体制备AP缀合物。

产品描述：

AP偶联试剂盒提供了一种简单快速的方法标记抗体、蛋白质、多肽等含有游离氨基的样本。

产品特点：

AP偶联试剂盒应用于偶联标记

保存建议：

请将未开封使用的保存于2-32℃；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。

艾美捷AP偶联试剂盒：

Cat #: D-AKE110

Size: 100 μg x 3

Storage: Stored at 4°C for 6 months, protected from light

AP偶联试剂盒样品制备：

待标记样品的成分（或储存缓冲液）要求清单：

设置偶联反应：

待标记样品与AP的适合摩尔比为1:1至1:2。我们建议以大约1:1的比例进行配对实验。你可以通过初步实验来确定适合摩尔比。以标记抗体为例，推荐剂量从1:1到1:2如下

缀合物的储存：

缀合物可以在4°C的黑暗中稳定储存一个月。为了长期储存，请在20°C的黑暗中分离和储存。避免重复冷冻和解冻。我们建议在共轭物中加入相同体积的甘油。如果需要稀释缀合物，请避免使用富含磷酸盐的PBS等缓冲液，并使用不含磷酸盐（如TBS）的缓冲液。

*该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

https://www.amyjet.com/products/D-AKE110-3.shtml

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快速消化丨内切酶EcoRI, 无动物源性

EcoRI（“I”是“1”的意思）是一种限制性核酸内切酶，来自某些特定品系的大肠杆菌（E. coli，也是其名称由来），是此种细菌体内参与限制修饰系统的酶。在分子生物学或其他分子层次的生物学研究上，EcoRI限制酶能专一识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开切割后的小片段端点为5'端突出的黏状末端（sticky end）。

经过基因工程改造的EcoRI，ADCF，能够在5~15分钟内消化DNA。它可用于鉴定质粒DNA、PCR产物和基因组。EcoRI，ADCF具有以下特点：在5到15分钟内快速消化，极好的酶活性冗余，易于处理底物过量或具有挑战性的模板消化。这种酶不含动物来源的成分

艾美捷内切酶EcoRI, 无动物源性：

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

内切酶EcoRI, 无动物源性使用方法：

1.快速DNA消化方案

① 按照指示的顺序在冰上混合以下反应组分：

a.DNA底物不应含有苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则会影响EcoRI、ADCF的酶活性；甲基化DNA会抑制某些限制性内切酶的消化

② 轻轻混合（不要涡流）并向下旋转；

③ 在37°C下培养15分钟-60分钟，一般建议5～10 U酶/ug DNA，10～20 U酶/ugDNA，温浴1小时，如果需要过夜酶消化，请将酶量调整为10；④通过在80°C下加热20分钟使酶失活，或通过基于柱的苯酚/氯仿纯化终止反应。

⑤ 添加到反应中的酶的体积不应超过总体积的10%，以避免过量的甘油，这可能导致星形活性。

⑥ 限制性内切酶储存缓冲液中的添加剂（如甘油和盐）和底物中的污染物（如盐、EDTA或乙醇等）是相似的。反应体积越小，对酶消化反应的抑制作用越强。

⑦ 对于小规模反应，推荐的反应组分如下。

DNA     0.1 μg    0.5 μg

EcoRI, ADCF    1 U       5 U

10× EcoRI Buffer 1 μl 2.5 μl

Total      10 μlb     25 μl

b.为了避免蒸发，10μl反应缓冲液的孵育时间不应超过1小时

https://www.amyjet.com/products/C-BSM2504S-5000U.shtml

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PK Mito Red/Orange/Deep Red实验步骤

PK Mito Deep Red 线粒体探针是一种基于活细胞成像的荧光染料，能够特异性结合到各类细胞的线粒体上。与传统染料相比，PKMITO 系列线粒体染料光毒性大幅度降低，能够在成像时最大程度保持线粒体状态，是非常好的超分辨及长时程线粒体成像染料。每份PKMITO 染料足够100-500次成像。

浦海景珊(Genvivo)的PK Mito线粒体探针，基于北京大学陈知行团队于2020年发表于英国皇家化学会旗舰期刊Chemical Science的学术成果的转化，德国马普所的Stefan W. Hell教授（2014年诺贝尔化学奖得主）特别点赞PK Mito使用效果，他强调：“PK Mito高度还原了线粒体精细动态的细节。”

PK Mito能够特异性结合到各类细胞的线粒体上，与传统染料相比，PKMITO系列线粒体染料能够实现超分辨率成像，使细胞轮廓更清楚，同时光毒性大幅度降低，能够在成像时最大程度保持线粒体状态，最大程度减少对生物细胞生理反应的影响，是绝佳的超分辨及长时程线粒体成像染料。  

目前艾美捷PKMITO系列主要供应3款不同颜色的探针：

名称 货号 包装 适用范围

PK Mito Red PKMR-1 25nmol 荧光显微镜、Confocal、SIM

PK Mito Orange PKMO-1 25nmol 荧光显微镜、Confocal、SIM、STED

PK Mito Deep Red PKMDR-1 25nmol 荧光显微镜、Confocal、SIM

保存条件：-20℃，避光

保质期：1年

实验步骤：

1在PK Mito Red/ Orange/ Deep Red中加入100pL新鲜干燥的DMSO,混合均匀，得到250μM母液。

2将培养基预热至37℃,将PK Mito Red/ Orange/ Deep Red母液按照1000-5000倍稀释比例加入到预热的培养基中，稀释后的染液建议尽快使用，久置后可能导致部分染料分解或沉淀。

3吸去细胞原有的培养基，更换为稀释好的培养基染液，在培养箱中孵育15分钟。

4用预热的培养基清洗细胞一至两次，即可用于荧光成像。

注：建议对大多数细胞系和原代细胞使用200-300 nM,如HeLa、COS7、U-2OS、Vero细胞、原代神经元、脂肪细胞和肝细胞；对组织染色使用500-600 nM。不同样品染色条件有所差异，建议起始染色方法为1000倍稀释，15分钟染色，请根据实际染色效果进行调整。

PK Mito Orange(货号：PKMDR-1)成像结果赏析：

Hessian-SIM 超分辨成像中PK Mito Red和商业探针MitoTracker Red的光毒性对比

https://www.amyjet.com/featured/pk-mito-2.shtml

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脂肪酸氧化，Fatty Acid Oxidation (FAO) Assay Kit

脂肪酸β-氧化活性测定基于辛酰基CoA的氧化，其与INT还原为INT甲zan的NADH依赖性还原偶联。甲zan产物在492nm处表现出最大吸收（消光系数=18mm-1cm-1），允许灵敏地测量细胞/组织提取物中存在的FAO活性。请注意，FAO的活性受所用细胞/组织的线粒体含量的影响。如果储存和处理得当，套件组件至少可以稳定一年。

Assay Genie脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒是一种高度灵敏的试剂盒 用于定量测量脂肪酸的比色法 细胞和组织中的氧化。

艾美捷 FAO检测试剂盒以多个单独的成分（装在6个小瓶中）装运，以确保试剂在没有干冰的情况下至少一周的完整性。重建前，将试剂盒储存在4℃。请按照以下说明重新配制FAO分析溶液和20倍FAO基质溶液。

中文名称：脂肪酸氧化 (FAO) 检测试剂盒

英文名字：Fatty Acid Oxidation (FAO) Assay Kit

货号：BR00001

规格：48assays

Fatty Acid Oxidation (FAO) Assay Kit组分：

1.FAO测定溶液-5 ml（用于100个孔），储存在-70°C（测定过程中遮光溶液）

2.20倍FAO底物（20倍辛烷酰基辅酶A）-0.25 ml，储存在70°C

3.10倍细胞裂解溶液-25 ml，储存于4°C（含1%TX-100；稀释前短暂旋转瓶）

重构一个FAO检测试剂盒（5 ml FAO检测溶液和0.25 ml 20x FAO基质）

FAO测定溶液（5 ml）的重组：

1.在室温下解冻试剂1（0.5 ml棕色微管）。将FAO含量测定溶液（5毫升装在绿盖小瓶中）置于冰上。

2.将试剂1溶液转移到FAO分析溶液中，并立即混合溶液以防止试剂沉淀。把冰上的混合溶液遮光。

3.轻敲试剂2小瓶（透明微管），将内容物放入其中。将试剂2的内容物转移到FAO分析溶液中，并通过轻轻搅拌溶解内容物（如有必要，用一些FAO分析液冲洗干净的小瓶，以确保完全转移）。在遮光的冰上轻轻搅拌FAOAssay溶液约5分钟。重构的FAO含量测定溶液应储存在-70℃下。

重组20倍FAO基质（0.25毫升）：

1.轻敲20 x FAO基质小瓶（透明微管），将内容物放入其中。

2.将0.25 ml ddH2O（装在透明微管中）加入20 x FAO基质小瓶和涡流管中溶解。重构的20倍FAO基质溶液应在-70℃下储存。

对照溶液和反应溶液的制备：

将1份dH2O和19份FAO含量测定溶液混合制备对照溶液，例如将25µl dH2O与475μl FAO含量检测溶液混合。将溶液放在冰上。将1份20x FAO基质和19份FAOAssay溶液混合制备反应溶液，例如将25μl 20x粮农组织基质与475μl粮农组织测定溶液混合。将溶液放在冰上并立即使用。

从正常仓鼠心脏（F1B菌株）和衰竭心脏（TO2菌株）制备组织匀浆。FAO检测试剂盒检测了FAO的活性，表明衰竭的仓鼠心脏的脂肪酸氧化能力降低。

https://www.amyjet.com/products/BR00001.shtml

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C-BSM583快速内切酶XhoI解决方案

快速内切酶，可在5~15 min内完成反应，最适反应温度为37℃，受CpG甲基化影响，序列完全重叠，剪切受阻，失活条件为80℃温育20 min，3 h温育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。

艾美捷快速内切酶XhoI：

Cat #: C-BSM583

Size: 500 rxns

Storage: -20°C

快速内切酶XhoI组成：

Components Amount

FlyCut⁷"  Xhol 500μl

10x CutOne' Buffer 3x1 ml

10x CutOne' Color Buffer 3×1 ml

使用方法：

1.快速DNA消化方案

①将以下反应组分按所示顺序在冰上混合：

对于纯化的PCR产物。如果PCR产物未纯化，则10×CutOne的量™ 缓冲液应减少到2μl，以减少未纯化的PCR产物中剩余的金属离子。我们建议在消化用于克隆之前纯化PCR产物，因为一些DNA聚合酶的核酸外切酶活性可能会改变切割DNA的末端。

②轻轻搅拌并向下旋转；

③在37°C下培养15分钟（质粒DNA）或15～30分钟（PCR产物）或30～60分钟（基因组DNA）；

④ 可选：在80°C下加热20分钟使酶失活；

⑤如果CutOne™ 在反应中使用颜色缓冲液，将反应混合物的等分试样直接装入凝胶中。

2.DNA的双重和多重消化

① 使用每种酶1μl，并适当扩大反应条件；

② 反应混合物中酶的总体积不应超过总反应体积的1/10；

③如果酶需要不同的反应温度，从需要较低温度的酶开始，然后加入第二种酶并在较高温度下孵育。

3.扩大质粒DNA消化反应

https://www.amyjet.com/products/C-BSM583-500rxns.shtml