HPLC日常维护
- 互联网2009年10月27日 13:04 点击：9651
压 力 异 常
操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。
A没有压力显示，没有流动相流动
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原 因
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解决方法
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1、电源问题
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1、接通电源，开机
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2、保险丝被烧坏
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2、更换保险丝
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3、控制器设定不正确或设定失败
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3、a、采取恰当的设定
b、修理或更换控制器
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4、柱塞杆折断
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4、更换柱塞杆
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5、泵头内有空气
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5、溶剂脱气、启动泵抽出空气
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6、流动相不足
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6、a、补充流动相
b、更换入口滤头
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7、单向阀损坏
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7、更换单向阀
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8、漏液
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8、拧紧或更换手紧接头
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B流动相流动正常，但没有压力显示
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原 因
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解决方法
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1、仪表损坏
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1、更换仪表
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2、压力传感器损坏
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2、更换压力传感器
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C压力持续偏高
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原 因
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解决方法
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1、流速设定过高
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1、调整流速设定
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2、柱前筛板堵塞
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2、a、在允许情况下反冲色谱柱
b、更换筛板
c、更换色谱柱
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3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀
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3、a、使用恰当的流动相
b、冲洗色谱柱
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4、色谱柱选择不当
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4、选择恰当的色谱柱
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5、进样阀损坏
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5、清洗或更换进样阀
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6、柱温过低
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6、提高温度
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7、控制器失常
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7、修理或更换控制器
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8、保护柱阻塞
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8、清洗或更换保护柱
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9、在线过滤器阻塞
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9、清洗或更换在线过滤器
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D压力持续偏低
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原 因
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解决方法
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1、流速设定过低
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1、调整流速
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2、系统漏液
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2、确定漏液位置并维修
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3、色谱柱选择不当
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3、选择恰当的色谱柱
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4、柱温过高
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4、降低温度
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5、控制器失常
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5、维修或更换控制器
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E压力不断上升
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原 因
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解决方法
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1、见列表C
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1、见列表C
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F压力降为零
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原 因
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解决方法
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1、见列表A、B
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1、见列表A、B
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G压力不断下降，但不回零
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原 因
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解决方法
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1、见列表D
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1、见列表D
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H压力波动
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原 因
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解决方法
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1、泵中有气体
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1、a、溶剂脱气
b、从泵中除去气体
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2、单向阀损坏
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2、更换单向阀
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3、泵密封损坏
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3、更换泵密封
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4、脱气不充分
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4、a、溶剂脱气
b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）
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5、系统漏液
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5、确定漏液位置并维修
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6、使用梯度洗脱
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6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动
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漏 液
通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。
A接头处漏液
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原 因
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解决方法
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1、接头松动
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1、拧紧
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2、接头磨损
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2、更换
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3、接头过紧
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3、a、拧松，再重新拧紧
b、更换
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4、接头被污染
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4、a、拆下清洗
b、更换
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5、部件不匹配
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5、使用同一品牌的配件
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B 泵漏液
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原 因
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解决方法
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1、单向阀松动
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1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧）
b、更换单向阀
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2、接头松动
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2、拧紧接头（不必拧的过紧）
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3、混合器密封损坏
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3、a、更换混合器密封
b、更换混合器
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4、泵密封损坏
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4、维修或更换泵密封件
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5、压力传感器损坏
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5、维修或更换压力传感器
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6、脉冲阻尼器损坏
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6、更换脉冲阻尼器
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7、比例阀损坏
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7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换
b、检查手紧接头，损坏的立即更换
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8、放空阀的损坏
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8、a、拧紧放空阀
b、更换放空阀
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C进样阀漏液
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原 因
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解决方法
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1、转子密封损坏
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1、重新安装或更换进样阀
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2、定量环阻塞
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2、更换定量环
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3、进样口密封松动
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3、调整
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4、进样针头尺寸不合适
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4、使用恰当的进样针
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5、废液管中产生虹吸
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5、保持废液管高于废液液面
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6、废液管阻塞
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6、更换或疏通废液管
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D色谱柱漏液
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原 因
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解决方法
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1、尾端接头松动
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1、拧紧接头
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2、卡套内有填料
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2、拆下、清洗卡套、重新安装
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3、筛板厚度不合适
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3、使用合适的筛板（参考下表）
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筛板选择指导
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物质粒径
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筛板孔径
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3-4u
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0.5u
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5-20u
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2u
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E检测器漏液
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原 因
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解决方法
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1、流通池垫片损坏
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1、a、避免过大的背景压力（压力降）
b、更换垫片
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2、流通池窗破碎
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2、更换窗口
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3、手紧接头漏液
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3、拧紧或更换
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4、废液管阻塞
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4、更换废液管
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5、流通池阻塞
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5、重新安装或更换
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谱图的各种问题
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A峰拖尾
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原 因
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解决方法
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1、筛板阻塞
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1、a、反冲色谱柱
b、更换进口筛板
c、更换色谱柱
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2、色谱柱塌陷
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2、填充色谱柱
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3、干扰峰
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3、a、使用更长的色谱柱
b、改变流动相或更换色谱柱
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4、流动相PH选择错误
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4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
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5、样品与填料表面的溶化点发生反应
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5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂
b、更改色谱柱
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B峰前延
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原 因
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解决方法
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1、柱温低
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1、升高柱温
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2、样品溶剂选择不恰当
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2、使用流动相作为样品溶剂
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3、样品过载
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3、降低样品含量
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4、色谱柱损坏
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4、见A1、A2
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C峰分叉
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原 因
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解决方法
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1、保护柱或分析柱污染
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1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
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2、样品溶剂不溶于流动相
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2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。
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D峰变形
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原 因
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解决方法
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1、样品过载
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1、减少样品载量
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E早出的峰变形
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原 因
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解决方法
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1、样品溶剂选择不恰当
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1、a、减少进样体积
b、运用低极性样品溶剂
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F早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
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原 因
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解决方法
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1、柱外效应
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1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）
b、使用小体积的流通池
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G K’增加时，脱尾更严重
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原 因
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解决方法
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1、二级保留效应，反相模式
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1、a、加入三乙胺（或碱性样品）
b、加入乙酸（或酸性样品）
c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）
d、更换一支柱子
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2、二级保留效应，正相模式
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2、a、加入三乙胺（或碱性样品）
b、加入乙酸（或酸性样品）
c、加入水（或多官能团化合物）
d、试用另一种方法
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3、二级保留效应，离子对
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3、加入三乙胺（或碱性样品）
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H酸性或碱性化合物的峰拖尾
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原 因
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解决方法
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1、缓冲不合适
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1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液
b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
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I额外的峰
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原 因
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解决方法
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1、样品中有其他组份
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1、正常
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2、前一次进样的洗脱峰
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2、a、增加运行时间或梯度斜率
b、提高流速
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3、空位或鬼峰
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3、a、检查流动相是否纯净
b、使用流动相作为样品溶剂
c、减少进样体积
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J 保留时间波动
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原 因
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解决方法
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1、温控不当
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1、调好柱温
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2、流动相组分变化
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2、防止变化（蒸发、反应等）
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3、色谱柱没有平衡
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3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
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K 保留时间不断变化
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原 因
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解决方法
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1、流速变化
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1、重新设定流速
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2、泵中有气泡
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2、从泵中除去气泡
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3、流动相选择不恰当
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3、a、更换合适的流动相
b、选择合适的混合流动相
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L基线漂移
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原 因
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解决方法
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1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）
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1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器
图
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2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）
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2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
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3、流通池被污染或有气体
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3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）
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4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）
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4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。
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5、流动相配比不当或流速变化
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5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
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6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时
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6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
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7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
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7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂
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8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
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8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
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9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
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9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
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10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
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10、将波长调整至最大吸收波长处
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M基线噪音（规则的）
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原 因
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解决方法
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1、在流动相、检测器或泵中有空气
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1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
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2、漏液
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2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。
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3、流动相混合不完全
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3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
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4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）
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4、减少差异或加上热交换器
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5、在同一条线上有其他电子设备
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5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。
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6、泵振动
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6、在系统中加入脉冲阻尼器
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N基线噪音（不规则的）
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原 因
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解决方法
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1、漏液
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1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。
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2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成
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2、检查流动相的组成。
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3、流动相各溶剂不相溶
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3、选择互溶的流动相
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4、检测器/记录仪电子元件的问题
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4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。
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5、系统内有气泡
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5、用强极性溶液清洗系统
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6、检测器内有气泡
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6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器
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7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）
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7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
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8、检测器灯能量不足
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8、更换灯
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9、色谱柱填料流失或阻塞
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9、更换色谱柱
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10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常
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10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置
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O宽峰
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原 因
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解决方法
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1、流动相组成变化
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1、重新制备新的流动相
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2、流动相流速太低
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2、调节流速
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3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）
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3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。
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4、检测器设定不正确
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4、调整设定
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5、柱外效应影响
a、柱子过载
b、检测器对反应时间或池体积响应过大
c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大
d、记录仪响应时间太长
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5 a、 小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品
b、减少响应时间或使用更小的流通池
c、 使用内径为0.007-0.01的短管路
d、减少响应时间
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6、缓冲液浓度太低
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6、增加浓度
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7、保护柱污染或失效
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7、更换保护柱
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8、色谱柱污染或失效，塔板数较低
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8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。
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9、柱入口塌陷
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9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子
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10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰
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10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果
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11、柱温过低
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11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃
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12、检测器时间常数太大
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12、使用较小的时间常数
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P分离度降低
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原 因
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解决方法
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1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）
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1、重新配置流动相
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2、保护柱或分析柱阻塞
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2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。
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Q所有的峰面积都太小
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原 因
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解决方法
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1、检测器衰减设定过高
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1、减少衰减的设定
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2、检测器时间常数设定太大
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2、设定较小的时间常数
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3、进样量太少
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3、增大进样量
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4、记录仪连接不当
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4、使用正确的连接
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R所有的峰面积都太大
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原 因
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解决方法
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1、检测器衰减设定过低
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1、采取较大的衰减
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2、进样过多
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2、减少进样量
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3、记录仪连接不正确
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3、正确连接记录仪
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进样阀的问题
以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。
A手动进样阀，转动不灵
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原 因
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解决方法
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1、转子密封损坏
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1、更换或调整转子密封
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2、转子太紧
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2、调整转子的松紧度
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B手动进样阀，载样困难
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原 因
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解决方法
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1、进样阀安装不当
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1、重新安装
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2、定量环阻塞
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2、清洗或更换定量环
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3、进样器污染
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3、清洗或更换进样器
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4、管路阻塞
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4、清洗或更换管路
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C自动进样阀，不能转动
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原 因
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解决方法
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1、无压力（或电源）
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1、提供恰当的压力（电源）
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2、转子太紧
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2、调整转子的松紧度
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3、进样阀安装不当
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3、重新安装
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D自动进样阀，其它问题
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原 因
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解决方法
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1、阻塞
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1、清洗或更换阻塞部件
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2、机械故障
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2、见随机维修手册
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3、控制器故障
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3、维修或更换控制器
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