Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE EM Plus说明书

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE EM Plus说明书

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE EM Plus简介：

这种新型的、高质量的自动金属学增强试剂的使用方式与传统的银增强试剂一样使用。然而，该产品不是沉积银，而是选择性地将金沉积在Nanogold®颗粒或胶体金颗粒。这对电子显微镜、光学显微镜和膜印迹有许多好处。

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE EM Plus实验：

为什么是金？金对电子显微镜有几个重要的优势。

- 更高的密度；比银有更好的对比度。

- 改进了对放大颗粒的后向散射检测--对SEM更有用。对SEM来说更有用。

- 比银增强的背景更低

在某些情况下。极其延迟的自核化。

- 金不会被四氧化锇腐蚀。

不需要对金进行调色或其他处理。

- 粘度低，易于准确混合

- 比银增强剂更温和的pH条件。

Goldenhance可在接近中性的pH值下使用。

- Goldenhance可以在生理缓冲液中使用。

金不会像银那样被卤化物沉淀。

(尽管仍建议先用水冲洗)。

- 在正常的室内照明下使用。

- 保质期极佳。

图：Nanogold®与GoldEnhance™的放大

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE EM Plus详细信息：

本试剂由2毫升溶液A（增强剂），2毫升溶液B（激活剂），2毫升溶液C（引发剂）和2毫升溶液D(缓冲液），足够200个网格使用（每个网格使用40微升）。试剂是由等量的溶液A和溶液B组合而成的，然后再加入溶液C。混合液应在使用前立即制备。为了获得极佳效果，建议在混合 A 和 B 后等待 5-10 分钟再加入 C 和 D，如果立即加入C和D，或在两小时后加入，也能成功地增强效果。Nanogold®或胶体金的核沉积在电子显微镜下，金的沉淀会产生电子密集的放大的胶体颗粒。

请注意：这种配方（目录号2114）是用于缓慢增强，以更好地控制颗粒大小，而

GoldEnhance™ EM（目录号2113）为电子显微镜提供快速发展。GoldEnhance™ LM（目录号

2112）和GoldEnhance™ Blots（目录号2115）是为在光学显微镜和膜印迹中使用而优化。

这个极佳增金时间段因应用而异，需要确定。使用这种配方，5至15分钟是将1.4纳米的Nanogold®颗粒放大到3-20纳米的最佳时间，而更长的显影时间将使颗粒放大到50纳米。

更长的显影时间可以得到更大的颗粒，尺寸可达50纳米。这种配方具有极度延迟的自核化（超过40分钟），并且可以在正常的室内照明下使用。

将组分溶液储存在2-8℃的冰箱中。避免溶液的交叉污染：为了防止更换错误的瓶盖为了防止更换错误的瓶盖，溶液A（增强剂）的瓶盖是灰色的，溶液B（激活剂）的瓶盖是蓝色的，而溶液C（启动剂）的瓶盖是红色的，而溶液C（激活剂）的瓶盖是蓝色的。(启动剂)是红色的，而溶液D(缓冲剂)是白色的。避免皮肤接触。

仅供研究使用。不建议或不打算用于人类或动物的疾病诊断。请勿在人类或动物体内或外部使用。

注意：在增强程序之前，所有成分应平衡至室温。

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html

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Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE LM使用说明

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE LM简介：

这种新型的、高质量的自动金属学增强试剂的使用方式与传统的银增强剂相同。然而，该产品不是沉积银，而是选择性地在Nanogold®或胶体金颗粒上沉积金。

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE LM实验：

- 非常敏感的检测，背景低。

- 极其延迟的自核化--对多个样品来说更方便。

对于多个样品，或者如果样品机会受到限制（如自动处理）。

- 高分辨率。

- 比化学发光快得多。

- 粘度低，易于和准确

混合成分。

- 比银增效更温和的pH条件。

GoldEnhance™在接近中性的pH值下使用，并且可以调整pH值以更好地保存样品保存。

- 可以在生理缓冲液中使用 -

金不会像银那样被卤化物溶液沉淀（但是，仍然建议先用清水冲洗一下建议）。

- 永久性染色：不褪色。

- 无自发荧光或淬灭现象。

- 用明场光学观察 -

比荧光法更简单，价格更低。

- 优秀的保质期。

图：用GoldEnhance™扩大Nanogold®的范围

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE LM详细信息：

本试剂由15毫升A液（增强剂）、15毫升B液（激活剂）、15毫升C液（引发剂）和15毫升D液（缓冲剂）组成。D（缓冲液），最多可用于600张玻片（每个样本使用100微升）。试剂是由等量的增强剂和激活剂混合而成的，然后再将其与缓冲液混合。试剂是将等量的增强剂和激活剂混合在一起，然后加入引发剂和缓冲液。该混合物应在使用前立即制备。为了获得为了达到极佳效果，我们建议在混合A和B后等待5-10分钟再加入C和D，如果立即或在两小时后加入C和D，试剂会产生成功的增强效果。Nanogold®或胶体金的核沉积

金的沉淀，在光镜下呈现出密集的黑色信号。

请注意：此配方是为光镜优化的。替代的EM配方（目录号2113和2114）用于EM。GoldEnhance™ Blots(目录号2115)是为在膜印迹中使用而优化的。极佳的增金时间因应用而异，但10至20分钟被认为是用于组织切片的光镜的极佳时间。将各组分溶液保存在2-8°C的冰箱中。避免溶液的交叉污染：为了防止更换错误的瓶盖，溶液A（增强剂）的瓶盖是绿色的，溶液B（激活剂）的瓶盖是黄色的，而溶液C（启动剂）的瓶盖是紫色的。溶液D（缓冲剂）为白色。避免皮肤接触。

警告。仅供研究使用。不建议或打算用于人类或动物的疾病诊断。请勿在人体或动物体内或外部使用。或外用在人类或动物身上。

注意：在增强程序之前，所有成分应平衡至室温。

用于光镜的金增强剂

GoldEnhance™ LM在使用前立即准备，将等量的溶液A（增强剂）和溶液B（激活剂）混合。

然后是溶液C（引发剂）和溶液D（缓冲剂）。为了达到极佳效果，我们建议在混合A和B后等待5分钟再加入C和D。为了获得极佳效果，建议在混合A和B后等待5分钟再加入C和D。试剂以滴瓶形式提供，以便于少量分配。如果使用了含醛的试剂进行固定，建议在贴标前将其淬灭。这可以通过可通过将标本在PBS（pH7.4）中的50mM甘氨酸溶液中孵育5分钟来实现；氯化铵（50mM）或可以用PBS中的硼氢化钠（0.5 - 1 mg/ml）代替甘氨酸。

以下程序是由Hacker等人开发的用于原位杂交标本的金增强，对于发现该程序对光镜下的组织切片的增强是有效的。经过观察。我们发现10-20分钟的时间可以获得极佳效果；但是，这种试剂的目的是在广泛的条件下发挥作用。不同的清洗和显影时间可能会在你的应用中产生更好的效果。应该按正常流程，直到使用金结合物；下面的协议描述了此后的步骤：

1. 根据目前的协议或使用缓冲液将切片与Nanogold®或胶体金共轭物进行孵化。

2. 用PBS pH7.6洗，2次，每次5分钟。

3. 在PBS-Gelatin pH7.6中清洗5分钟。

4. 在蒸馏水中反复洗涤，总共至少10分钟，最后两次用超纯水（EM级）冲洗。

5. 使用等量的四种成分（溶液A,B,C,和D）制备GoldEnhance™；每张玻片制备约100µL

每张幻灯片。

a. 将溶液A（增强剂：绿色盖子）分配到一个干净的试管或盘子中，加入溶液B（激活剂：黄色盖子），并

彻底混合。

b. 等待5分钟。

c. 加入溶液C（引发剂：紫色盖子）和溶液D（缓冲液）并充分混合。

d. 涂抹100微升，或足以覆盖标本的量。

e. 将试样显影10-20分钟。可以使用更多或更少的时间来控制颗粒的大小和信号的强度。

信号的强度。

6. 当达到极佳染色效果时，立即用去离子水仔细冲洗，停止染色。

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html

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Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE BLOTS步骤说明

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE™ BLOTS简介：

这种新型的、高质量的金自动金属学增强试剂可以以与传统的银增强剂相同的方式使用。增强剂一样使用。然而，该产品不是沉积银，而是选择性地将金沉积在Nanogold®或胶体金颗粒上。

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE™ BLOTS实验：

- 非常敏感的检测，背景低。

- 自核最小 - 更加方便

对于多个样本，或者如果样本的获取受到限制（如自动处理）。

- 高分辨率。

- 比化学发光快得多。

- 黏度低，易于准确混合

- 比银增效更温和的pH条件。

GoldEnhance™在接近中性的pH值下使用，并且你可以调整pH值以更好地保存样品

保存。

- 可以在生理缓冲液中使用 - 金不会像银那样被卤化物溶液沉淀。不会像银那样被卤化物溶液沉淀。(然而，仍然建议先用水冲洗建议）。

- 永久性染色：不褪色。

- 无自发荧光或淬灭现象。

- 用明场光学观察--比荧光更简单，更便宜。

- 优秀的保质期。

图：用GoldEnhance™扩大Nanogold®的范围

Nanoprobes 艾美捷GOLDENHANCE™ BLOTS详细信息：

Moeremans等人已经描述了金免疫印迹的基本程序；以下程序是根据该协议改编的。

GoldEnhance™在使用前立即准备，将等量的溶液A（增强剂）和溶液B(激活剂）、溶液C（引发剂）和溶液D（缓冲液）等量混合。将溶液A（增强剂）和溶液B（激活剂）充分混合，等待5分钟，然后加入溶液C（引发剂）和溶液D（缓冲液）并再次充分混合。试剂是以滴瓶形式提供的以方便分装相同的数量。我们发现20-30分钟的显影时间是有效的；但是，这种试剂的目的是在广泛的条件下发挥作用，你的实验可能需要不同的时间或试剂。显影时间

时间和背景信号的出现可能因使用的金探针类型和用于印迹的膜的类型而不同。应将目标物印迹在膜上，然后按照常规程序用主探针检测。你应该在使用Nanogold®或免疫金试剂之前，应遵循常规或推荐的方案，然后继续以下步骤。

以下步骤；也可参见上面的注释。辅助缓冲液1和2的配方在程序后给出。

1. 根据现行的或推荐的方案，用1/100至1/500稀释的NANOGOLD®试剂或胶体金结合物进行孵化。

2. 用缓冲液1（3 X 5分钟）冲洗，然后用缓冲液2（2 X 5分钟）冲洗。

3. 可选的（可提高灵敏度）。用缓冲液2中1%的戊二醛进行后处理（10分钟）。

4. 用去离子水冲洗（2 X 5分钟）。

5. 使用等量的四种成分（溶液A、B、C和D）制备GoldEnhance™。

a. 将溶液A（增强剂：绿色盖子）分配到一个干净的试管或盘子中，加入溶液B（激活剂：黄色盖子），并彻底混合。

b. 等待5分钟。

c. 加入溶液C（引发剂：紫色盖子）和溶液D（缓冲液）并充分混合。

d. 用溶液覆盖印迹。

e. 展开试样20-30分钟。可以用更多或更少的时间来控制颗粒的大小和信号的强度。

信号的强度。

6. 用去离子水反复冲洗。

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html

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Nanoprobes 艾美捷Palmitoyl NANOGOLD使用说明

Nanoprobes 艾美捷Palmitoyl NANOGOLD®是一种固体，从甲醇溶液中干燥后提供。收到后应冷冻，并储存在-20℃。仅供研究使用。不建议或不打算用于人类或动物的疾病诊断。请勿在人或动物体内或外部使用。无放射性，无致癌性。

Nanoprobes 艾美捷Palmitoyl NANOGOLD®使用说明：

棕榈酰NANOGOLD®是疏水性的，特定波长下的消光系数如下：

对于甲醇溶液：

波长（纳米） 辐射系数

280 2.25 X 105

420 1.12 X 105

 *对5 X 10-6 M的甲醇溶液进行了测量。

重金标记的脂质体可以通过将Palmitoyl NANOGOLD®溶解在lv仿中，与水混合形成。

蒸发lv仿，然后用超声处理或其他通常的制备方法来形成囊泡1。

Nanoprobes 艾美捷 Palmitoyl NANOGOLD®也可以用未标记的也可以用未标记的脂质进行稀释，用于制备标记较少的脂质体。将0.1到1％的棕榈酰NANOGOLD®与未标记的脂质结合，通常适合制备NANOGOLD®标记的脂质体，其特性和形态与未标记的脂质体相同。一旦与胶束或其他结构结合，就可以根据个别实验的要求使用。其方式与未标记的棕榈酸相同。

对于显微镜，胶体金方法可以成功地与NANOGOLD™免疫试剂一起使用。类似的稀释液和

阻断剂是合适的。

主要的区别在于结果。

NANOGOLD®是一种极其均匀的1.4纳米直径的金颗粒（±10%）。

NANOGOLD®结合物是市面上最小的金探针，在标准的透射电子显微镜（TEM）下是可见的。

NANOGOLD®共轭物是目前市场上最小的金探针，在标准的透射电子显微镜（TEM）下是可见的，并能穿透和到达其他金探针所不能到达的抗原。

NANOGOLD®结合物通过凝胶过滤柱进行色谱纯化。不存在聚合物或其他分子量的杂质。这与其他胶体金共轭物形成鲜明对比，后者通常是通过离心法制备的。

与之形成鲜明对比的是，其他胶体金共轭物通常通过离心法制备，以去除最大的聚集物，并经常包含较小的聚集物。

接近1个NANOGOLD®颗粒与1个脂质分子的比例使该产品有别于0.2-10的可变比例的胶体金结合物。

NANOGOLD® 颗粒不像其他胶体金那样与蛋白质有亲和力。这减少了背景和虚假标识。NANOGOLD®与银的关系比其他大多数胶体金更好，因此它的灵敏度更高。银增强可以用来使免疫标记在电子显微镜、光学显微镜和免疫印迹中得到改善。带来更好的结果。

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html

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Nanoprobes 艾美捷DPPE-NANOGOLD使用说明

Nanoprobes 艾美捷DPPE-NANOGOLD®由1.4纳米的NANOGOLD®颗粒与单分子的二棕榈酰

磷脂酰乙醇胺。共轭是通过分子中乙醇胺头部的胺基进行的。它是作为一种脂质标签

用于胶束和其他双相系统1,2，其方式与之前描述的十一烷酸膜标签3相同。它已被用于制备金装饰的脂质体1也被用来追踪一种脂质体包裹的抗真菌药物的输送情况2。

其结构如图所示。

Nanoprobes 艾美捷DPPE-NANOGOLD®是一种固体，从甲醇溶液中干燥后提供。收到后应冷藏，并储存在2 - 8°C。仅供研究使用。不建议或打算用于人类或动物的疾病诊断。请勿在人或动物体内或外部使用。

Nanoprobes艾美捷DPPE-NANOGOLD使用说明：

甲醇溶液的消光系数。

波长(纳米) 消光系数 *

280 2.25 X 105

420 1.12 X 105

*5 X 10-6 M的甲醇溶液的测量结果。

将Nanogold®-DPPE溶解在lv仿中，与水混合，蒸发lv仿，然后用超声处理，可以形成重度金标记的脂质体。

. Nanogold®-DPPE还可以用也可以用未标记的DPPE或其他脂质稀释，用于制备标记程度较低的脂质体。将0.1-1 %的Nanogold®-DPPE与未标记的脂质结合。

与未标记的脂质结合，通常适合于制备纳戈尔德®标记的脂质体，其特性和形态与未加金标记的脂质体相同。

脂质体的性质和形态与不含金标签的脂质体相同2。

. 一旦纳入胶束或其他结构，就可以按照个别实验所需的程序使用

一旦纳入胶束或其他结构，就可以按照个别实验的要求，以与未标记的DPPE相同的方式使用。

使用纳米金®试剂进行染色的一般注意事项：

在显微镜下，胶体金方法可以成功地与NANOGOLD®免疫试剂一起使用。类似的稀释度和

阻断剂是合适的。主要的区别在于结果：

NANOGOLD®是一种极其均匀的1.4纳米直径的金颗粒（±10%）。

NANOGOLD®结合物是市面上最小的金探针，在标准的透射电子显微镜（TEM）下是可见的。

NANOGOLD®共轭物是目前市场上最小的金探针，在标准的透射电子显微镜（TEM）下是可见的，并能穿透和到达其他金探针所不能到达的抗原。

NANOGOLD®结合物通过凝胶过滤柱进行色谱纯化。不存在聚合物或其他分子量的杂质。这与其他胶体金共轭物形成鲜明对比，后者通常是通过离心法制备的。

与之形成鲜明对比的是，其他胶体金共轭物通常通过离心法制备，以去除最大的聚集物，并经常包含较小的聚集物。

接近1个NANOGOLD®颗粒与1个脂质分子的比例使该产品有别于0.2-10的可变比例的胶体金结合物。

NANOGOLD® 颗粒不像其他胶体金那样与蛋白质有亲和力。这减少了背景和虚假

标识。

NANOGOLD®与银的关系比其他大多数胶体金更好，因此它的灵敏度更高。银增强

可以用来使免疫标记在电子显微镜、光学显微镜和免疫印迹中得到改善。

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html

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Nanoprobes 艾美捷高密度可靠的预包埋Nanogold标记

Nanoprobes 艾美捷预包埋Nanogold标记是一种非常可靠的包埋前免疫金方法。

NINDS的Susan Cheng博士和合作者已经改进了他们的包埋前程序，使用Nanogold®-Fab'和HQ银进行极均匀、一致和可靠的包埋前标记。

用户在使用该方案时发现了：

与其他方法相比，金标记的密度更高。

非常高的特异性。

极大的分辨率。

Tanner和他的同事已经描述了这个程序，据报道，与其他方法相比，这个程序可以得到明显更高密度的银增强的金纳米粒子。下面是一个结果的例子。

图：Nanogold®:-Fab'山羊抗兔IgG（目录#2004）标记大鼠大脑中的K+通道Kv2.1亚基，然后用HQ银（目录#2012）增强。注意免疫染色的高密度和特异性，甚至阐明了亚单位定位在细胞膜的细胞质侧和高尔基体的外堆；轴突和终端明显是阴性的。由J.Du, J.-H. Tao-Cheng, P.Zer.完成的工作。Tao-Cheng, P. Zerfas, and C. J. McBain, NIH完成。见神经科学，84，37-48（1998）Bar 1微米。

Nanoprobes艾美捷DPPE-NANOGOLD材料和试剂：

磷酸钠缓冲液。0.1M磷酸钠，pH值调整为7.4。

磷酸盐缓冲液（PBS）缓冲液。0.02M磷酸钠缓冲液与0.15M氯化钠，pH值调整为7.4。

磷酸盐缓冲盐水（PBS）缓冲液。0.02M磷酸钠缓冲液加0.15M氯化钠，pH值调至7.4，含(a)5%牛血清白蛋白和0.05至0.1%叠氮钠；和(b)1%山羊血清和0.1%NaN3，3-4 X 5 min

戊二醛和多聚甲醛。

HQ银试剂（Nanoprobes）。

去离子水或蒸馏水。

Nanoprobes艾美捷DPPE-NANOGOLD协议：

用以下方法之一固定约45分钟（对于单层培养物）。(1) 在0.1M磷酸钠缓冲液中的4%多聚甲醛，pH7.4，或(2) 在0.1M磷酸钠缓冲液中的2%多聚甲醛与0.05% - 0.1%戊二醛，pH7.4。

用0.1M磷酸钠缓冲液，pH7.4清洗，3次，每次5分钟。

用含5%山羊血清、0.1%叠氮钠和0.1%皂素的PBS阻断和通透细胞1小时。

用含有5%正常山羊血清、0.1%皂素和0.1%叠氮钠的PBS制成的第一抗体在室温下孵育1小时。

用含1%山羊血清和0.1%叠氮钠的PBS洗3-4 x 5分钟。

在1毫升含有1%山羊血清和0.1%叠氮钠的PBS中，用Nanogold标记的Fab'抗兔或小鼠（取决于一级抗体）二级抗体结合物（4升）孵育1小时，室温下。

用含有1%山羊血清和0.1%叠氮钠的PBS清洗，一次，然后用PBS清洗，两次。

用PBS中的2%戊二醛固定30分钟。

用PBS洗3次。储存过夜。

第二天用水彻底清洗。

进行银增强（HQ银增强试剂盒，Nanoprobes, NY）。

用水清洗。在LM下仔细检查；只对有希望的标本进行EM处理。

在0.1M磷酸盐缓冲液中清洗，pH7.4。

在0.1M磷酸盐缓冲液中加入0.2%的OsO4，30分钟。

清洗，用乙酸铀染色，在乙醇中脱水，然后嵌入。

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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Nanoprobes 艾美捷LI Silver 增强协议

Nanoprobes 艾美捷LI Silver：

用银色增强剂进行凝胶染色：LI Silver

具体：仅开发Nanogold®标记带

快速：1-5分钟

敏感：比普通凝胶染色更敏感

可直接用于凝胶或印迹转移

Nanoprobes艾美捷1.4纳米的Nanogold®颗粒可以用银进行显影，使其成为肉眼可见，从而将信号放大数千倍。如果你使用了单马来酰亚胺纳米金、单NHS纳米金®或单氨基纳米金®来标记蛋白质或其他分子，那么这些可以很容易地在凝胶上使用银增强技术进行分析和检测。以下是在凝胶或印迹上检测Nanogold®标记的条带的方案。

用Nanoprobes 艾美捷Nanogold®标记后，通过柱色谱法、蔗糖梯度法或其他纯化方法去除未结合的金颗粒。在样品中留下多余的游离Nanogold®会干扰预期的凝胶染色。

像往常一样运行凝胶，但有两个预防措施。

A) Nanogold®会被β-巯基乙醇（或DTT）降解，所以样品不能与还原剂混合，即必须运行非还原性凝胶。其他成分（SDS等）的正常浓度是可以接受的。

B) 样品不能被加热。通常样品在加载到凝胶前会在SDS中煮沸。由于Nanogold®在50℃以上会被降解，所以建议不要加热。这通常不是一个限制，因为大多数样品无需加热即可获得正常的凝胶图案。

如果需要，可以将凝胶电转到硝酸纤维素上，尽管这不是必须的。

用多次更换的去离子水冲洗凝胶。由于银显影剂是由卤化物沉淀的，所以必须去除微量的氯化钠。

将凝胶或印迹放在一个合适的盘子里，涂上足够的新鲜制备的LI银（目录号2013）以覆盖凝胶。LI银是通过混合等量的A和B成分制备的。不要使用通常的凝胶银染色剂，它们与LI银完全不同，不能有效地显影Nanogold®。

注意带状物的发展，它应该呈现棕黑色。没有进入凝胶的金的聚集物或少量的游离金可能会产生背景染色。通常的显影时间为1-5分钟。过长的显影时间（大于30分钟）会导致一些非特异性的背景自核染色。

当达到最佳染色效果时，用去离子水冲洗，停止显影。最终染色的凝胶现在是一个永久的记录。

为了对所有条带进行比较和观察，可以运行一个重复的凝胶，用库马西蓝或凝胶银染色剂进行染色。

由于Nanogold®颗粒的重量增加（约15,000），Nanogold®标记的分子在凝胶上通常会高出约15,000 MW。因此，标记的和未标记的分子被分开，它们的比例可以通过通常的凝胶染色（Coomassie或凝胶银染色）来估计，凝胶染色显示总的蛋白质含量。

相关文献：

Gregori, L., J. F. Hainfeld, M. N. Simon, and D. Goldgaber. 1997. Binding of amyloid beta protein to the 20S proteasome. J Biol Chem 272 (1): 58–62

Wilkens, S. and Capaldi, R.A. Monomaleimidogold labeling of the gamma subunit of the Escherichia coli F1 ATPase examined by cryoelectron microscopy. Arch Biochem. Biophys., 229, 105-109 (1992).

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html

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Nanoprobes 艾美捷基因检测的进化，从Nanogold到EnzMet

来看看Nanoprobes 艾美捷如何在DNA（和RNA）被组合在一起后进行检测--通过原位杂交。

Nanoprobes公司一直处于用新试剂盒和产品改进原位杂交方法的qian沿，关于Nanogold®原位杂交的文章仍然是我们网站上访问量极大的页面之一。最近又开发了一种强大的原位杂交新技术。EnzMet™。

Nanoprobes 艾美捷原位杂交技术各有其应用范围希望能帮助用户选择适合各自研究领域的方法。

Nanoprobes艾美捷金相原位杂交的进展：

(a)和(b): SiHa细胞中HPV-16的单拷贝通过泰拉米信号放大（TSA，也称为CARD，或催化报告沉积）检测，然后用（a）链霉亲和素过氧化物酶与DAB显影，以及（b）链霉亲和素-纳米金®与醋酸银自动金属化。HPV-16的拷贝显示为单点。(H&E反染色。原始放大率X 560）。

(c) Nanogold® with gold enhancement (GOLDFISH)程序在有HER2基因扩增的组织中，显示多个基因拷贝紧密相连的大而密集的核信号。核快速红色反染色剂（原始放大倍数400）。

(d): EnzMet™检测石蜡包埋的人类浸润性乳腺癌活检中单个HER2基因拷贝的扩增；正常的、未扩增的细胞含有两个HER2基因拷贝，而浸润的HER2扩增的癌细胞显示多个拷贝（原始放大倍数X400。图片由克利夫兰诊所基金会的R.R. Tubbs博士提供）。

Nanoprobes艾美捷金相原位杂交相关文献：

Powell, R. D.; Pettay, J. D.; Powell, W. C.; Roche, P. C.; Grogan, T. M.; Hainfeld, J. F., and Tubbs, R. R.: Metallographic in situ hybridization. Hum. Pathol., 38, 1145-1159 (2007).

Abstract and full article available on the Human Pathology website

Institutional access at SciVerse ScienceDirect

Tubbs, R. R.; Pettay, J.; Skacel, M.; Downs-Kelly, E.; Powell, R. D.; Hicks, D. G., and Hainfeld, J. F.: Gold and Silver-Facilitated Metallographic In Situ Hybridization Procedures for Detection of HER2 Gene Amplification. In: Molecular Morphology in Human Tissues; Hacker G.W., and Tubbs, R. R. (Eds): CRC Press, Boca Raton, FL. Ch. 5, pp. 101-106 (2005).

Full text available from CRCNetBase (Shibboleth, Athens)

Tubbs, R.; Pettay, J.; Hicks, D.; Skacel, M.; Powell, R.; Grogan, T., and Hainfeld, J.: Novel bright field molecular morphology methods for detection of HER2 gene amplification. J. Mol. Histol., 35, 589-594 (2004).

Abstract and full text available from SpringerLink.

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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Nanoprobes 艾美捷用于免疫组织化学和印迹的EnzMetTM

虽然EnzMetTM不只是用于原位杂交的光学检测。它对生物芯片上的DNA电检测也非常有效，在这里，它比银增强的胶体金提供了改进，可以使用电极阵列对目标DNA进行电检测。现在，在他们最近发表在《生物传感器和生物电子学》上的论文中，Schüler、Fritzsche和合作者证明了这一过程可以用在丝网印刷的电极结构上，用于基于芯片的病毒DNA（人类CMV DNA的150bp PCR产物）的电检测。这些电极阵列是在玻璃基底上生产的，使得额外的光学读数成为可能。丝网印刷的结构显示了所需的精度，并与应用的生化协议兼容。当与通过标准光刻技术生产的芯片基底相比，丝网印刷的芯片显示出同样的灵敏度和特异性。因此，用于电学检测的DNA芯片电极阵列的丝网印刷为生产具有微结构电极的DNA芯片提供了一种有趣的和具有成本效益的方法。

如果你想亲自尝试这种应用，Nanoprobes 艾美捷 EnzMetTM HRP检测试剂盒可用于研究应用。

Nanoprobes艾美捷 EnzMetTM HRP检测试剂盒参考文献：

Schüler T, Asmus T, Fritzsche W, Möller R.: 丝网印刷是检测病毒DNA的带电读数的DNA芯片的成本效率制造方法。Biosens. Bioelectr., 24, 2077-2084 (2009).

摘要（由Science Direct提供）。

EnzMetTM也是免疫组化（IHC）的理想检测和可视化方法，它可用于高度敏感的检测，背景最小，在印迹上的对比度非常高。使用高复杂度组织微阵列（TMA）测试了免疫组化的应用。使用自动玻片染色系统（Ventana Medical Systems），通过酶金属学（EnzMet）对88种常见的实体瘤进行了评估；选择目标是为了评估EnzMet在TMAs中特异性定位核（雌激素受体）、细胞质（细胞角蛋白）和细胞质膜（HER2）的编码抗原的能力。对于乳腺肿瘤以及肾脏、结肠和前列腺的癌肿，所评估的所有三种抗原的染色强度是相当的。然而，与DAB相比，EnzMet IHC制备的染色质量更清晰，染色沉积物更明确，显示出更多的点状外观。EnzMet和传统IHC的结果完全一致。EnzMet反应产物密集而清晰，没有明显的扩散，并为评估的核、细胞质和细胞膜定位抗原在石蜡切片中提供了出色的高分辨率的细胞区段区分。酶金相术中沉积的元素银密度较高，允许在相对较低的放大率下评估核心免疫表型，不需要浸油，可以有效地筛选更多的组织。此外，信号是稳定的，可以提供永久的记录。

参考文献。

Tubbs R.; Pettay J.; Powell R.; Hicks D. G.; Roche P.; Powell W.; Grogan T., and Hainfeld, J. F.: 通过酶金属学对组织微阵列中的亚细胞区进行高分辨率的免疫分型。Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol., 13, 371-375 (2005).

摘要（由PubMed（Medline）提供）。

对于免疫组化，使用Nanoprobes EnzMet EnzMet HRP Detection Kit for IHC/ISH（目录号6001）。

左图：石蜡包埋的人膀胱肿瘤中上皮细胞角蛋白的免疫过氧化物酶染色。

(a)用DAB进行二次免疫过氧化；(b)用EnzMetTM进行二次免疫过氧化方法（原始放大倍数为400）。

右图。使用（c）DAB和（d）EnzMetTM开发的HRP结合物对his标记的融合蛋白进行Western blot检测的比较。

转移后，将膜与抗His-Tag（6xHis）单克隆抗体孵化，然后用BSA阻断，然后暴露于辣根过氧化物酶（HRP）结合的第二抗体。然后通过DAB检测（面板A）或EnzMetTM检测（面板B）对His标记的融合蛋白进行可视化。泳道1和4：0.1 µg的34 kDa his-tagged ATF-1。泳道2和5：0.1 µg 68 kDa his-tagged YY1。泳道3和6：0.1微克BSA和0.1微克卵清蛋白。

在大多数情况下，使用Nanoprobes EnzMetTM印迹方案可以替代传统的DAB显影，而无需进一步修改方案。然而，由于其更高的灵敏度，为了达到灵敏度和清晰度的极佳组合，可能需要更大的一级抗体或二级探针稀释度。在免疫组织化学实验中，五倍到十倍的额外稀释已经被发现可以获得良好的结果，在这里也可能是合适的。

Nanoprobes 艾美捷 EnzMetTM印迹方案参考文献：

Liu, W.; Mitra, D.; Powell, R.; Tubbs, R.; Pettay, J., and Hainfeld, J.: Enzyme Metallography Silver Deposition for HRP Detection. Presented at ASCB 2007, Washington DC, December 1-4, 2007,: Poster # B349, Presentation # 1209.

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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Nanoprobes 艾美捷：处理HQ银&控制Nanogold化学计量

Nanoprobes 艾美捷：处理HQ银：

HQ银是一种独特的银增强试剂。它含有一种增稠剂，是一种天然的聚合胶：它被用来调节混合物与金纳米粒子的反应速度。这使该试剂具有一些优势，与其他银增强剂相比，性能得到了提高，如下图所示。

图：使用Nanogold®和HQ Silver预包埋免疫电子显微镜。Nanogold Fab山羊抗兔IgG二级抗体标记大鼠脑中K+通道Kv2.1亚单位，随后HQ银增强。注意免疫染色的高密度和特异性，甚至可以阐明细胞膜细胞质侧和高尔基体外堆的亚单位定位；轴突和终末明显为阴性。J.Du，J.-H.的工作。Tao Cheng，P.Zerfas和C.J.McBain，NIH。见《神经科学》，8437-48（1998）。棒=1微米

这些特点使HQ银成为电子显微镜的理想选择，但由于天然增稠剂的存在，其成分比其他一些银增强试剂更容易受到微生物的污染，而且其粘稠的性质意味着你在使用这种试剂时可能需要更小心。在使用HQ银时，使用这些提示和技巧，将获得极佳效果。

HQ银必须储存在不允许微生物污染和生长的条件下。如果你打算几天内不使用该试剂，应将组分冷冻保存，最好是在-20℃。

反复的冻融循环会使增稠剂的性能下降。因此，第1次使用HQ Silver时，如果将每种成分分成若干等份，每份足以满足典型实验运行，然后将未使用的等份单独冷冻，将在试剂的使用寿命内获得极佳结果。然后，每次进行需要HQ Silver的实验或一系列的实验时，解冻并混合一组等分样品。

因为这些成分包括不同数量的增稠剂，它们具有不同的粘度，如果它们被快速分配，分配出相等的数量可能是一个挑战。使用可调节的移液器来吸取和分配所需的量，每种成分使用不同的吸头，可以获得极佳效果；慢慢地吸取将有助于避免气泡的产生。正排量移液器是极好的。缓慢的手动吸液实际上比自动吸液更好，因为它能使粘稠的溶液得到更准确的分装。B组份（"调节剂"）实际上不包含银沉积所需的任何成分：因此，如果先分配B组份，然后再分配A和C组份，将确保混合和添加到试样中的延迟时间极短。

Nanoprobes艾美捷所用的溶剂和缓冲液在使用前都经过脱气处理，以消除溶解氧和形成气泡的风险。如果有必要搅拌溶液，请使用设置较低的涡旋器，而不是用手搅拌；如果长时间轻轻搅拌（如用印迹或玻片），请使用设置较低的旋转摇床 - 这些将比手动搅拌引入更少的气泡。

对于光镜和印迹的应用，如果超微结构的保存和均匀的颗粒大小不是问题，应该考虑使用LI银代替。这种试剂的显影速度更慢，而且由于它是无色和非粘性的，可以通过光镜或其他光学检测方法更容易监测显影。另外，在某些应用中，金增强可能会有更好的结果。

Nanoprobes 艾美捷：控制化学计量。纳戈尔德®与生物分子的比例

Nanoprobes Monomaleimido Nanogold、Mono-Sulfo-NHS-Nanogold和Monoamino Nanogold试剂都被配制成每个金粒子含有接近一个反应性功能；这是通过Monoamino Nanogold（其他两种试剂的起始材料）在阴离子离子交换柱上的分离而实现的，它可以分离出具有不同数量氨基的金粒子，在我们的标记实验中，这些试剂以单功能的方式表现。因此，每个纳诺金颗粒将只与一种生物分子反应。

当用纳戈尔德标记时，你通常应该选择标记一个特色的官能团的反应，即在生物大分子中只出现一次的官能团，如半胱氨酸，而不是在几个不同部位出现的官能团。

尺寸对分离很重要。纳米金的分子量接近15,000，但它的行为可能类似于较小的蛋白质，因为它的大部分质量来自重金原子。当你标记一个较大的生物分子（如抗体或蛋白质）时，我们建议使用少量过量的纳戈尔德，因为从色谱上看，从共轭产物中分离过量的小金子通常比分离未标记的蛋白质要容易。然而，由于每个生物分子通常只使用1.5到3个纳诺金，而且反应产率通常低于100%，这对每个蛋白质的纳诺金标签数量提出了一个相对较低的上限。

当标记与纳戈尔德大小相似或更小的分子时，你将使用接近1 : 1的纳戈尔德：生物分子的比例，或者对于较小的分子，使用过量的小分子。由于纳戈尔德是单功能的，这就限制了大多数的标记，即使生物分子有多个结合位点，每个生物分子只有一个纳戈尔德。

纳米金标签相当大：包括其配位配体，它的整体分子直径约为2.6纳米。一旦附着，它就会阻碍其他纳戈尔德试剂接近附近的位置。这也有利于纳诺金与共轭生物分子接近1 : 1的比例。

纳米金不带电，但它是可溶的--它以提供可溶性的方式被功能化，因此它被溶解，而不是仅仅被悬浮。因此，尽管纳米金颗粒之间在溶液中没有正式的排斥力（与胶体金不同），但纳米金颗粒表面对水溶液的亲和力确保它们保持溶解和分离。

这一规则的一个例外是NTA-Ni(II)-Nanogold，它具有多个硝酸三乙酸-镍（II）功能，以便通过多个NTA-Ni(II)获得的螯合效应增加与多组氨酸标签的结合。他的结合。在这种情况下，对化学计量的控制通常是通过使用比His标签的生物分子过量的纳戈尔德来实现的：对于带有独特His标签的生物分子，过量的纳戈尔德有利于形成1：1的共轭物，这是因为His标签的生物分子遇到未结合的纳戈尔德的概率更高，也因为结合的纳戈尔德被结合的分子立体地阻碍了。如果你想使用带正电的纳戈尔德或带负电的纳戈尔德进行标记或共轭，也有类似的考虑。

Nanoprobes特色荧光纳米金探针在一个探针中结合了纳米金（Nanogold）和荧光素，用于荧光和电镜两种技术共同进行样品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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