胶原蛋白酶——Worthington四种类型的粗胶原酶

胶原蛋白酶——Worthington四种类型的粗胶原酶

胶原蛋白酶，又称骨胶原酶，简称胶原酶。由溶组织梭菌（Clostridum histolytirum）制取而得。

Worthington 已经建立了几种类型的粗胶原酶：类型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗胶原酶具有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。

• 2 型含有较高相对水平的蛋白酶活性，尤其是梭菌蛋白酶。

• 3 型含有最低水平的二级蛋白酶。

• 4 型被设计成胰蛋白酶活性特别低，以限制对膜蛋白和受体的损害。

艾美捷Worthington无动物型 AFA、AFB 和 AFC、STZ1 和 STZ2胶原蛋白酶源自在完全不含动物成分的培养基中生长的培养物，设计用于必须防止引入潜在动物源性病原体的生物加工应用。二级蛋白酶的水平与 1 型和 2 型胶原酶相似。

胶原蛋白酶测定是Mandl的改进，其中将胶原酶与天然胶原一起温育5小时，并使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法测定胶原分解的程度。释放的氨基酸以每毫克胶原酶微摩尔亮氨酸表示。

艾美捷Worthington胶原蛋白酶用途：

粗胶原酶广泛用于酶促原代细胞分离和组织解离程序。大多数研究人员要么使用粗制胶原酶制剂，例如 1、2、3 和 4 型，要么使用色谱纯化的胶原酶（代码：CLSPA）；后者通常与二级酶如弹性蛋白酶、透明质酸酶等结合。为了获得最佳结果，必须针对要解离的组织调整蛋白水解活性的精确混合。不同组织的类型和有效性之间的相关性很好，但并不完美，并且可能部分取决于使用参数和目标以及批次间的差异。

艾美捷Worthington胶原蛋白酶相关研究：

胶原蛋白 (CL)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

弹性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)

木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)蛋白酶 K (PROK)

胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)

细胞分离优化系统 (CIT)

肝细胞分离系统 (HIS)

新生儿心肌细胞分离系统 (NCIS)

木瓜蛋白酶解离系统 (PDS/PDS2)

来源：https://www.amyjet.com/products/WBC-LS004188.shtml

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Worthington弹性蛋白酶的应用和相关研究

弹性蛋白酶，由动物的胰脏用水提取而得，也可用细菌的培养液在低温下用水提取而得。

弹性蛋白酶的性状：

1.其外观呈淡黄色至深黄色粉末，也可是浅褐至深褐色液体。可溶于水，不溶于乙醇，有吸湿性。

2.纯胰弹性蛋白酶，由240个氨基酸残基组成的单一肽链，相对分子质量约为25000，等电点为9.5。

3.弹性蛋白酶 可使结缔组织蛋白质中的弹性蛋白消化分解，包括肽键结合的、酰胺结合的和酯结合的进行加水分解。作用的最适pH值7.8，最适作用温度25℃。

4.弹性蛋白酶 具有明显的β-脂蛋白酶作用，能活化磷酯酶A，降低血清胆固醇，改善血清脂质，降低血浆胆固醇及低密度脂蛋白、甘油三酯，升高高密度脂蛋白、阻止脂质向动脉壁沉积和增大动脉的弹性，具有抗动脉粥样硬化及抗脂肪肝作用。

5.弹性蛋白酶最初以酶原的形式存在，经过酶切后才有活性。

弹性蛋白酶的用途：

在医学临床主要用于治疗高血脂症，防止动脉粥样硬化、脂肪肝。也可用于肉类和水产加工中的嫩化。  

艾美捷Worthington弹性蛋白酶分子特征：

猪胰弹性蛋白酶由 240 个氨基酸的单肽链组成，并含有 4 个二硫键 (Sawyer et al . 1973)。它与来自其他物种的胰腺弹性蛋白酶具有高度的序列同一性，例如与其共享 86% 同一性的大鼠（MacDonald等人，1982）。弹性蛋白酶 I 和 II 基因具有序列相似性，尤其是在 5' 近端侧翼区域，包括 TATA 盒和推定的组织特异性增强子序列（Ornitz等人1985、Stevenson等人1986、Swift等人1984， Tani等人1987 和 Gestin等人1997）。

艾美捷Worthington弹性蛋白酶的应用：

组织解离：因为弹性蛋白在结缔组织的弹性纤维中的浓度最高，所以经常使用弹性蛋白酶解离含有广泛细胞间纤维网络的组织。为此，它通常与其他酶一起使用，例如胶原酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。

弹性蛋白酶相关研究：

胶原酶 (CLS1-4/CLSPA)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

中性蛋白酶（分散酶，NPRO）

木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)

胃蛋白酶 (PM)

蛋白酶 K (PROK)

胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)

细胞分离优化系统 (CIT)

肝细胞分离系统 (HIS)

新生儿心肌细胞分离系统 (NCIS)

木瓜蛋白酶解离系统 (PDS/PDS2)

来源：https://www.amyjet.com/products/WBC-LS006367.shtml

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Worthington木瓜蛋白酶化学性质和特异性

木瓜蛋白酶（Papain），又称木瓜酶，是一种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。

化学性质：

木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液为无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙chun、lv仿和乙mi等有机溶剂。木瓜蛋白酶是一种含巯基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，但几乎不能分解蛋白胨。

木瓜蛋白酶的zui适合PH值6～7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点（pI）为8.75；木瓜蛋白酶的最适合温度55～65℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。

功能特性：

木瓜蛋白酶主要用于啤酒抗寒（水解啤酒中的蛋白质，避免冷藏后引起的浑浊）、肉类软化（水解肌肉蛋白和胶原蛋白，使肉类软化）、谷类预煮的准备、水解蛋白质和肉类香料的生产。在啤酒抗寒和肉类软化方面的应用远比其他蛋白酶类广泛。

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶特异性：

木瓜蛋白酶具有相当广泛的特异性；它具有内肽酶、酰胺酶和酯酶活性。活性位点由七个亚位点（S 1 -S 4和 S 1' -S 3'）组成，每个亚位点可以容纳底物的一个氨基酸残基（P 1 -P 4和 P 1' -P 3'）（Schechter和伯杰 1967）。特异性由 S 2亚位点控制，S 2 亚位点是一个容纳底物 P 2侧链的疏水袋。木瓜蛋白酶表现出特定的底物偏好，主要是对该子位点的大量疏水或芳香残基（Kimmel 和 Smith 1954）。在 S 2之外子位点偏好，活性位点内缺乏明确定义的残基选择性。

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶分子特征：

所有木瓜蛋白酶的成熟形式都在 212 到 218 个氨基酸之间，并表现出很强的同源性 (Azarkan 2003)。X 射线结构分析表明它们采用相同的三维折叠（Pickersgill 等人 1991、O'Hara 等人 1995 和 Maes 等人1996）。

木瓜蛋白酶被合成为具有 133 个氨基酸的 N 末端区域的酶原，该区域不是活性酶的一部分（Cohen 等人 1986）。木瓜蛋白酶前体基因 prepropapain 已被克隆并部分或整体表达（Cohen 等人 1986 和 Choudhury 等人2009）。

木瓜蛋白酶相关研究：

胶原酶 (CLS1-4/CLSPA)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)

蛋白酶 K (PROK)

胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS /TRTPCK)

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)

细胞分离优化系统 (CIT)

肝细胞分离系统 (HIS)

新生儿心肌细胞分离系统 (NCIS)

木瓜蛋白酶解离系统 (PDS/PDS2)

来源：https://www.amyjet.com/products/WBC-LS003128.shtml

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Worthington脱氧核糖核酸酶I特异性和相关研究

脱氧核糖核酸酶Ⅰ是一种核酸内切酶，zui早由M．Kunitz结晶的所得。离子的存在对切断方式有着明显的影响。在不断的研究发展过程中，也被作为一种研究材料。

脱氧核糖核酸酶Ⅰ是最有代表性的核酸内切酶。最早是由M．Kunitz从胰脏中分离出结晶的，也称为胰脱氧核糖核酸酶或DNaseⅠ， EC3．1．21．1。分子量约3.1万，等电点pH4.7，最适PH 7附近，需要Mg2 和Mn2 。分离单链和双链DNA，产生具有 5′-磷酸末端的分解物。在一般条件下其分解产物含有1到8—12个寡聚核苷酸，平均大小等于四个核苷酸。反应初期似乎是先分解dpPupPy键，但因二价离子的存在对切断的方式有显著影响。因此酶容易得到结晶，所以于核酸  的研究上广泛应用；又由于对整个结构已经明确，因而也是酶化学研究的材料。

艾美捷Worthington脱氧核糖核酸酶I特异性：

bpDNase I 不是碱基或序列特异性的；但是，它不会随机切割。它显示优先在嘧啶的 5' 侧进行裂解，并且在替代共聚物中尤其明显（Bernardi 等人 1975 和 Lomonossoff 等人 1981）。已经表明，扭曲角的变化被 DNase I 识别（Dickerson 和 Drew 1981）。DNase I 的特异性还取决于存在的二价阳离子。在存在 Ca2+ 和 Mg2+ 的情况下，它会导致单链断裂，而在存在 Mn2+ 的情况下会导致双链断裂（Junowicz 和 Spencer 1973，以及 Campbell 和 Jackson 1980）。

艾美捷Worthington脱氧核糖核酸酶I分子特征：

与人类、小鼠和大鼠类似，牛胰腺 DNase I 基因由 9 个外显子组成，只有最后 8 个外显子编码该蛋白质（De María 和 Arruti 2003）。新生蛋白通过由外显子二编码的 22 个氨基酸信号序列引导至分泌途径细胞器。主要活性位点残基 H166 由外显子 6 编码（De María 和 Arruti 2003 和 Kraehenbuhl 等人 1977）。尽管牛和其他哺乳动物的外显子长度几乎相同，但内含子的长度差异很大。TATA 盒序列位于外显子 I 上游 35 bp（De María 和 Arruti 2003）。已经提出影响编码序列的多重剪接事件可能是下调 DNase I 表达的机制（Liu 等人 1997）。

脱氧核糖核酸酶I相关研究：

肌动蛋白

白蛋白，无核酸酶

脱氧核糖核酸酶 II

脱氧核糖核酸及相关产品

组蛋白

溶菌酶

核酸酶，微球菌

核酸酶，S1

磷酸酶，碱性

磷酸二酯酶 I

磷酸二酯酶 II

蛋白酶K

逆转录酶，重组 HIV

核糖核酸酶A

核糖核酸酶 T1

核糖核酸酶，E-Rase™ RNase 混合物

核糖核酸

来源：https://www.amyjet.com/products/WBC-LS006362.shtml

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Worthington胰蛋白酶的物化性质及特异性

胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种，EC 3.4.4.4，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后，作为胰液的成分而分泌，受肠激酶，或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶，是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。

物化性质：

胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取，纯化获得的结晶，再制成的冻干制剂。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有机溶剂。在pH1.8时，短时间煮沸几乎不失活；在碱溶液中加热则变性沉淀，Ca2+有保护和激活作用，胰蛋白酶的等电点为pH10.1。

牛胰蛋白酶原有229个氨基酸组成，含6对二硫键，其氨基酸排列顺序和晶体结构已被阐明。在肠激酶活自身催化下，酶原的N末端赖氨酸与异亮氨酸残基之间的肽键被水解，释放出来缬-天-天-天-天-赖6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量23800 ，活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。

猪胰蛋白酶的化学结构与牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸残基排列顺序中，只有41个氨基酸残基不同，但分子构型有很大区别。沉降系数S20W为2.77S，pI=10.8，热稳定性较牛胰蛋白酶稳定，Ca2+对酶的保护作用不及牛羊的明显，无螯合Ca2+的中心部位。有6对二硫键，断裂1~2个键，均不至于破坏酶分子的完整结构而保护了酶的活性。酶的活力分别相当于牛的72%及羊的61%。

羊胰蛋白酶与牛、猪的相似，但其活力略高于牛和猪的。

胰蛋白酶专一作用有碱性氨基酸精氨酸及赖氨酸羧基所组成的肽键。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶转化为α-胰蛋白酶，再进一步降解为拟胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而丧失。

除存在于脊椎动物外，还存在于蚕、海盘车、蝲姑、放线菌等范围广泛的生物体中。另外与高等动物的血液凝固和炎症等有关的凝血酶、纤溶酶、舒血管素等蛋白酶在化学结构和特异性等方面与胰蛋白酶具有密切的关系，可以认为这些酶是从共同的祖先酶在进化过程中分化而来的。胰糜蛋白酶与弹性蛋白酶在结构和催化机制方面也具有密切关系，但其特异性则完全不同。

艾美捷Worthington胰蛋白酶特异性：

胰蛋白酶切割赖氨酸和精氨酸氨基酸残基 C 端侧的肽。如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧，则不会发生切割。如果酸性残基位于裂解位点的任一侧，则水解速率已显示较慢。

胰蛋白酶相关研究：

细胞分离优化系统

胰凝乳蛋白酶

胶原酶

脱氧核糖核酸酶 I

内切蛋白酶Lys-C

肝细胞分离系统

透明质酸酶

新生儿心肌细胞分离系统

中性蛋白酶（分散酶）

木瓜蛋白酶解离系统

蛋白酶K

胰蛋白酶抑制剂

来源：https://www.amyjet.com/products/WBC-LS02124.shtml

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艾美捷Abnova多肽设计和合成解决方案

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多克隆和单克隆抗体生产

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艾美捷Abnova荧光原位杂交(FISH)探针解决方案

荧光原位杂交(FISH)是一种用于确认和定位在细胞和组织中所出现或没有出现的特殊DNA序列技术。艾美捷Abnova FISH探针， 用于探测基因的放大、缺失和易位情况。每个FISH探针都具有一对基因座特定的荧光团标记探针，这些探针取自细菌人工染色体库。

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艾美捷Abnova集成了锁式探针（padlock probe）和滚环扩增技术（rolling circle amplification，RCA），开发出全新的单细胞单分子分析技术，mutaFISH™ Probe (mutation-specific Fluorescence In Situ Hybridization)，即为突变特异性的荧光原位杂交探针。它可以原位分析单细胞/单分子的DNA和RNA的单核苷酸突变，消除了针对PCR与杂交有效性和特异性的挑战与风险。Abnova提供越来越多的，经过验证的mutaFISH™探针和辅助试剂，以满足研究和临床环境中未满足的需求。

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高信噪比

低交叉反应性

Abnova FISH探针相关研究：

mutaFISH™ EGFR T790M T790wt RNA 探针 FP0001

mutaFISH™ EGFR L858R L858wt Ex19wt RNA 探针 FP0002

mutaFISH™ MYCNwt DNA 探针 FP0003

mutaFISH™ AR-V7 ARwt RNA 探针 FP0004

mutaFISH™ CEP8wt DNA 探针 FP0005

mutaFISH™ CEP7wt DNA 探针 FP0006

mutaFISH™ CEP17wt DNA 探针 FP0007

mutaFISH™ CEP1wt DNA 探针 FP0008

mutaFISH™ CEP1wt CEP7wt CEP8wt CEP17wt DNA 探针 FP0009

mutaFISH™ HER2wt DNA 探针 FP0010

mutaFISH™ BRAF V600E V600wt RNA 探针 FP0011

mutaFISH™ IDH1 R132H R132wt IDH2 R172K R172wt RNA 探针 FP0012

mutaFISH™ ACTBwt RNA 探针 FP0013

mutaFISH™ EML4wt ALKwt RNA 探针 FP0014

mutaFISH™ c-Mycwt RNA 探针 FP0015

mutaFISH™ TERTwt RNA 探针 FP0016

mutaFISH™ KRAS G12wt G13wt RNA 探针 FP0017

mutaFISH™ PSAwt RNA 探针 FP0018

mutaFISH™ PD-L1wt RNA 探针 FP0019

mutaFISH™ RNA探针配套试剂盒 KA4915

mutaFISH™ DNA探针配套试剂盒1（细胞样品） KA4916

mutaFISH™ DNA探针配套试剂盒2（细胞样品） KA4928

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艾美捷Abnova膜蛋白脂蛋白体解决方案

艾美捷Abnova通过将强大的体外小麦胚表达系统与特色脂质体技术相结合，形成特别的膜蛋白。协助科研工作者进一步加快药品开发和有效性研究的速度。

体外小麦胚系统 + 脂蛋白体技术

艾美捷Abnova体外蛋白质表达系统以小麦胚真核翻译机制为基础开发而成。小麦胚将所有翻译所需的成分存储于干燥浓缩的状态，在胚芽开始时即进行蛋白质的合成。普通的小麦 胚萃取物中包含有RNA N-糖苷酶麦芽凝集素和其它翻译抑制物，例如硫堇、核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶类和蛋白酶等。这类抑制物产生于胚乳中。通过充分清洗小麦胚去除其中的胚乳 污染物，形成高稳定性和高活性的萃取物。

将具有 5' 端甲基化与 3' 端 poly(A) 尾的 mRNA 与这种萃取物反应，同时加入独门脂质体，体外的翻译反应能产生出足量的膜蛋白，膜蛋白被脂质体捕获，从而正确折迭出执行生物功能所必需的蛋白质形态。常用的蛋白质表达系统，例如大肠杆菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞等都属于体内系统并且受到细胞膜的约束作用，其产量和稳定性都相对较低。与这些蛋白质表达系统相比，Abnova这一系统有着显着的优越性。此外，体外小麦胚系统能够经得起自动化高通量小分子生物筛选以及特征描述的考验。

下面一起来了解一下膜蛋白脂蛋白体解决方案：

艾美捷Abnova膜蛋白生产流程：

艾美捷Abnova膜蛋白脂蛋白体特点：

产量更高

稳定性更高

高表达成功率

天然蛋白构型

易用于自动化

艾美捷Abnova膜蛋白脂蛋白体类别：

聚类分化 (CD) 分子

G 蛋白偶联受体 (GPCR)

离子通道

转运蛋白

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