展青霉素（棒曲霉毒素）分子印迹SPE操作说明书

    展青霉毒素又称棒曲霉毒素、珊瑚青霉毒素，它是由曲霉和青

霉等真菌产生的一种次级代谢产物。它普遍存在于腐烂的苹果等水果中，其数量通常会被视作苹果生产的一个质量衡量标准。

展青霉毒素具有毒性作用，对胃具有刺激作用，

导致反胃和呕吐，具有神经毒性、致畸性和致癌性。

许多国家都已制定了展青霉素的限量标准。欧盟规

定在婴幼儿食用的苹果泥、苹果汁和苹果固形物产品

中允许最大水平的展青霉毒素为10µg /公斤，非婴幼儿食用苹果酱、苹果酒、苹果为原料的饮品中限量50µg /公斤，固体状态苹果加工产品25µg/Kg(欧洲委员会(EC)1881/2006)。我国规定，以苹果、山楂为原料的水果制品、果蔬汁、酒类中展青霉素的限量指标为50µg /公斤。

    AFFINIMIP®SPE展青霉毒素分析方法是基于分子印迹聚合物固相萃取小柱的分析方法。该方法对于不同样品中展青霉素的处理方式如下：

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

苹果汁

 

 

 

 

 

 

苹果汁限量标准：

Europe (EC 1881/2006) : 50µg/Kg  

USA (FDA CPG Sec.510.150) : 50µg/Kg 

婴幼儿苹果汁限量标准

Europe (EC 1881/2006) : 10µg/Kg 

 

一 样品前处理

1 样品制备

    2.5mL苹果汁，加入2.5mL的2%乙酸-水溶液，

混合。

2 净化

3mL/100mg  AFFINIMIP® SPE Patulin cartridge

活化：2mL乙腈，1mL水

上样：4mL样品稀释液

淋洗：1mL NaHCO3（1%），2mL水。抽真空10S。

      1mL乙醚淋洗。

洗脱：2mL乙酸乙酯

3 浓缩和复溶

洗脱液吹干溶剂后以0.1%乙酸-水复溶

 

二 液相色谱条件

色谱柱: Atlantis T3 column, 150mm x 2.1mm 

流动相:  水/乙腈  (95/5,  v/v) 

流速: 0.2mL/min 

波长: UV - 276nm 

进样体积: 100µL.

 

 

 

 

 

苹果酱（泥）/苹果-水果酱

苹果酱限量标准：

Europe (EC 1881/2006) : 50µg/Kg

婴幼儿苹果酱限量标准

Europe (EC 1881/2006) : 10µg/Kg 

 

一 样品前处理

1 样品制备

酶解：10g苹果酱，加入150µL果胶酶溶液

      和10mL水混合。室温放置过夜或者40°C放置2h。

提取：4500r/min离心5min，过0.2µm滤膜，收集滤液。

2 净化

3mL/100mg  AFFINIMIP® SPE Patulin cartridge

活化：2mL乙腈，1mL水

上样：5mL样品提取液

淋洗：4mL 1%乙酸-水，4mL水淋洗。抽真空10S。

      0.5mL乙醚淋洗。

洗脱：2mL乙酸乙酯

3 浓缩和复溶

洗脱液吹干溶剂后以0.1%乙酸-水复溶

 

二 液相色谱条件  

色谱柱: Atlantis T3 column, 150mm x 2.1mm 

流动相:  梯度

Concentration of Patulin(µk/kg)	Recoveries %	% RSDr
20(n=3)	84	4.5
10(n=4)	81.2	2.1

 

流速: 0.2mL/min 

波长: UV - 276nm 

进样体积: 100µL.

 

 

 

 

苹果

固体状态苹果加工产品限量标准：

Europe (EC 1881/2006) : 25µg/Kg

 

一 样品前处理

1 样品制备

A微波处理：

苹果切成小块，微波90s 。粉碎。

15g样品加7.5mL水和150µL果胶酶溶液混合。

60°C恒温 15min ，过4-7µm膜。

B搅拌机处理： 

苹果切小块，放入搅拌机后加入1/2水 

 (2:1  苹果: 水) 混合1min。

15g 样品加300µL 果胶酶溶液，60°C恒温 15min，

过4-7µm膜。

2 净化

3mL/100mg  AFFINIMIP® SPE Patulin cartridge

活化：2mL乙腈，1mL水

上样：3mL样品提取液

淋洗：3mL 2%乙酸-水。抽真空10S，排干残液。

      0.25mL乙醚淋洗。抽真空10S，排干残液。

洗脱：1mL乙酸乙酯

3 浓缩和复溶

洗脱液吹干溶剂后以0.1%乙酸-水复溶

 

二 液相色谱条件

色谱柱: Atlantis T3 column, 150mm x 2.1mm 

流动相:  梯度

 

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苹果酒

苹果酒限量标准：

Europe (EC 1881/2006) : 50µg/Kg  

 

一 样品前处理

1 样品制备

超声脱气：1h

样品稀释：加入2%乙酸-水溶液稀释2倍，混合。

2 净化

3mL/100mg  AFFINIMIP® SPE Patulin cartridge

活化：2mL乙腈，1mL水

上样：4mL样品稀释液

淋洗：1mL NaHCO3（1%），2mL水。抽真空10S，

      排干残液。0.5mL乙醚淋洗。

洗脱：2mL乙酸乙酯

3 浓缩和复溶

 洗脱液吹干溶剂后以0.1%乙酸-水复溶

 

二 液相色谱条件

色谱柱: Atlantis T3 column, 150mm x 2.1mm 

流动相:  水/乙腈  (95/5,  v/v) 

流速: 0.2mL/min 

波长: UV - 276nm 

进样体积: 100µL.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

诺曼第苹果酒（POMMEAU）和烈酒

苹果为原料的饮品限量标准：

Europe (EC 1881/2006) : 50µg/Kg  

简介：

曼泽拉酒（Manzella liquor）含 20%酒精和2.1% 浓缩苹果汁。

诺曼第苹果酒（POMMEAU）是 苹果白兰地（Calvados）和苹果汁的混合物，含 17% 酒精。

一 样品前处理

1 样品制备

    1mL曼泽拉酒（Manzella liquor）/诺曼第苹果酒（POMMEAU），加2mL水，混合。

2 净化

3mL/100mg  AFFINIMIP® SPE Patulin cartridge

活化：2mL乙腈，1mL水

上样：3mL样品稀释液

淋洗：A：3mL 水（或者B：NaHCO3（2%））。

      抽真空10S，排干残液。0.25mL乙醚淋洗。

      抽真空10S，排干残液。

洗脱：2mL乙酸乙酯

3 浓缩和复溶

 洗脱液吹干溶剂后以0.1%乙酸-水复溶

二 液相色谱条件

色谱柱: Atlantis T3 column, 150mm x 2.1mm 

流动相:  梯度

 

流速: 0.2mL/min 

波长: UV - 276nm 

进样体积: 100µL.

 

 

 

 

 

苹果干

固体状态苹果加工产品限量标准：

Europe (EC 1881/2006) : 25µg/Kg

 

一 样品前处理

1 样品制备

    3g样品（事先切成小块），加30mL 水和150µL果胶酶溶液混合。室温放置过夜。4500r/min离心5min ，过0.2µm膜。

2 净化

3mL/200mg  AFFINIMIP® SPE Patulin cartridge

活化：4mL乙腈，2mL水

上样：10mL样品稀释液

淋洗：5mL NaHCO3（2%），5mL水。抽真空30S，排干残液。0.5mL乙醚淋洗。

洗脱：2mL乙酸乙酯

3 浓缩和复溶

 洗脱液吹干溶剂后以0.1%乙酸-水复溶

 

二 液相色谱条件

色谱柱: Atlantis T3 column, 150mm x 2.1mm 

流动相:  梯度

 

流速: 0.2mL/min 

波长: UV - 276nm 

进样体积: 100µL.

 

 

 

 

 

 

 

番茄酱和番茄粉

一 样品前处理

1 样品制备

A 番茄酱：

    10g样品，加10mL 水和150µL果胶酶溶液混合。室温放置过夜。过0.2µm膜。

B 番茄粉：

    10g样品，加20mL 水混合。取10g混合液，加10mL 水和150µL果胶酶溶液混合。室温放置过夜。4500r/min离心5min ，过0.2µm膜。

2 净化

3mL/100mg  AFFINIMIP® SPE Patulin cartridge

活化：2mL乙腈，1mL水

上样：5mL番茄酱样品提取液/2mL番茄粉样品提取液

淋洗：4mL NaHCO3（1%），4mL水。抽真空10S，

      排干残液。0.5mL乙醚淋洗。

洗脱：2mL乙酸乙酯

3 浓缩和复溶

 洗脱液吹干溶剂后以0.1%乙酸-水复溶

 

 

二 液相色谱条件

色谱柱: Atlantis T3 column, 150mm x 2.1mm 

流动相:  梯度

 

流速: 0.2mL/min 

波长: UV - 276nm 

进样体积: 100µL.

 

 

 

 

 

 

 

蓝莓汁

一 样品前处理

1 样品制备

    5mL蓝莓汁，加入5mL的2%乙酸-水溶液，混合。

2 净化

3mL/100mg  AFFINIMIP® SPE Patulin cartridge

活化：2mL乙腈，1mL水

上样：4mL样品稀释液

淋洗：1mL NaHCO3（1%），2mL水。抽真空10S，

      排干残液。0.5mL乙醚淋洗。

洗脱：2mL乙酸乙酯

3 浓缩和复溶

洗脱液吹干溶剂后以0.1%乙酸-水复溶

 

二 液相色谱条件

色谱柱: Atlantis T3 column, 150mm x 2.1mm 

流动相:  梯度

 

流速: 0.2mL/min 

波长: UV - 276nm 

进样体积: 100µL.