人白C 抗原（DR15）ELISA试剂盒使用说明书

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人白C 抗原（DR15）ELISA试剂盒使用说明书

 

    本试剂盒仅供研究使用。

 

药品名称：

通用名：人白C抗原（DR15）酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

  本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它组织液中白C抗原（DR15）含量。

实验原理

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白C抗原（DR15）水平。用纯化的白C抗原

 （DR15）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白C抗原（DR15），

再与HRP  标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底

物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的人白C抗原（DR15）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光

度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白C抗原（DR15）浓度。

试剂盒组成

 

  1   20 倍浓缩洗涤液           50ml×1 瓶       7    终止液                3ml×1 瓶

 

  2   酶标试剂                3ml×1 瓶        8   标准品（7.2 μg/ml） 0.5ml×1 瓶

 

  3   酶标包被板               12 孔×4 条       9   标准品稀释液              1.5ml×1 瓶

 

  4   样品稀释液               10ml×1 瓶      10   说明书                 1 份

 

  5   显色剂A 液              3ml×1 瓶       11   封板膜                 2 张

 

  6   显色剂B 液              3ml×1/瓶       12   密封袋                 1 个

 

标本要求

    1．标本采集后尽早进行实验。

    2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。

    3．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.  标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标

    准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二

    孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，

    混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔

    中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各

    取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混

    匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

    品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，

    浓度分别为（4.8μg/ ml，3.2μg/ ml    ，1.6μg/ ml，0.8μg/ ml，0.4μg/ ml）。

2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

    品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl （样

    品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

    匀。3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4.  配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用

5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此

    重复5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.  温育：操作同3。

8.  洗涤：操作同5。

9.  显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

    15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止

    液后15 分钟以内进行。

 

计算

    以标准物的浓度为横坐标，OD              值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，

即为样品的实际浓度。

注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

   用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好

   控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值

   大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计

   算时请最后乘以总稀释倍数（×n×1000）。

5．严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准

6．底物请避光保存。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10.  如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

检测范围：

  0.2μg/ ml -5μg/ ml

规格：

  96 人份/盒

（来源： 厦门慧嘉生物科技有限公司 ）