大鼠游离脂肪酸（FFA）ELISA试剂盒使用说明书

大鼠游离脂肪酸（FFA）ELISA试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中游离脂肪酸（FFA)的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠游离脂肪酸（FFA)水平。用纯化的游离脂肪酸（FFA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入游离脂肪酸（FFA)，再与HRP标记的游离脂肪酸（FFA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的游离脂肪酸（FFA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠游离脂肪酸（FFA)的含量。

试剂盒组成：

样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃