Worthington 细胞分离优化系统（含细胞分离指南）

Worthington 细胞分离优化系统（含细胞分离指南）

艾美捷 Worthington Biochemical Corporation 包含完整的方法开发套件，其中包含组织解离和细胞分离过程中最常用的各种酶。“细胞分离优化系统”包括酶法细胞分离方法的处理、使用和优化的说明、参考和策略，以实现活细胞的最大产量。

“系统”包含组织解离和细胞分离程序中常用的所有酶以及细胞分离指南，详细说明了常用的组织类型、各种酶的作用方式、组织培养技术和方案优化指南。此外，该指南列出了数百个细胞和组织特异性分离参考资料，用于开始进行酶促细胞分离。

浅谈艾美捷 Worthington细胞分离指南：

组织分离/原代细胞分离和细胞收获是主要的酶在组织培养研究和细胞生物学中的应用学习尽管酶在这些应用中被广泛使用多年来，它们在分离和收获中的作用机制没有被很好地理解。因此，选择一种技术另一个通常是武断的，更多地基于过去的经验，而不是了解该方法工作的原因以及可以进行哪些修改导致更好的结果。

细胞分离程序的目标是在功能上最大限度地提高产量有活力的游离细胞，有九个主要参数影响任何特定程序的结果： 

1、组织类型

2、原产地种类

3、动物年龄

4、使用的解离介质

5、使用的酶

6、使用的任何粗酶制剂中的杂质

7、使用的酶浓度

8、温度

9、孵化时间

Worthington 细胞分离优化系统套件内容：   

酶                  代码*           数量/小瓶

1型胶原酶       CLS1           500 毫克干重

2型胶原酶       CLS2           500 毫克干重

3型胶原酶       CLS3           500 毫克干重

4型胶原酶       CLS4           500 毫克干重

胰蛋白酶       TRL           500 毫克干重

透明质酸酶       HSE           50,000 个单位

弹性蛋白酶                      100 毫克磷

木瓜蛋白酶       PAPL           100 毫克磷

脱氧核糖核酸酶        IDP           25 毫克干重

胰蛋白酶抑制剂                      100 毫克干重

中性蛋白酶（分散酶      NPRO        10毫克干重

文献参考：

1.细胞和组织培养：实验室程序，Doyle, A., Grifiths, JB 和 Newell, DG, John Wiley & Sons Ltd., NY, 1995

2.Bloom, W. 和 Fawcett, DW： 组织学教科书，第 10 版。,, WB Saunders Co., 费城, PA, , 1975

3.Bonney, R.、Becker, J.、Walker, P. 和 Potter, V.： 适用于酶合成调控研究的成年大鼠肝实质细胞原代单层培养物 ， 体外9、399、1974

4.Bonney, R.,J., Walker, PR 和 Potter, VR: Biochem J 136 , 947, 1973

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington植物原生质体制备丨纤维素酶方案

纤维素酶背景：

纤维素酶是指一组共同作用水解纤维素的酶。

纤维素是由β-1,4键连接的葡萄糖残基的线性多糖。像甲壳素一样，它不是交联的。天然结晶纤维素是不溶的，并以 15 至 10,000 个葡萄糖单位的紧密堆积的氢键脱水葡萄糖链的纤维形式存在。它的密度和复杂性使其非常耐水解，而不会发生初步的化学或机械降解或膨胀。在自然界中，纤维素通常与其他多糖如木聚糖或木质素结合。它是植物细胞壁的骨骼基础。纤维素是食物、燃料和化学品中最丰富的有机来源（Spano等. 1975 年）。然而，其用途取决于其水解成葡萄糖。酸和高温降解不令人满意，因为所产生的糖被分解；酶促降解（纤维素酶）是将纤维素降解成有用成分的最有效手段。尽管纤维素酶分布在整个生物圈中，但它们在真菌和微生物来源中最为普遍。

艾美捷Worthington纤维素酶分子特征：

里氏木霉基因组包含 9143 个基因，与其他木霉属物种相比，纤维素酶和半纤维素酶基因的数量非常少。 里氏木霉总共包含 200 个糖基水解酶 (GH) 编码基因，其中一些与细菌具有同源性，表明它们可能是通过水平基因转移获得的 (Kubicek 2013)。据报道，41% 的 GH 和其他碳水化合物活性基因出现在 25 个离散簇中（Martinez等人。2008）。其中一些簇还包含编码非核糖体肽和聚酮合酶的基因，这表明这些基因对于木霉在其自然环境中竞争的能力很重要（Kubicek 2013）。纤维素酶的产生是由纤维素、乳糖或槐糖的存在引起的；酶复合物不是组成型形成的。表达受多种阳性和阴性转录因子控制（Kubicek et al. 2009）。

艾美捷Worthington纤维素酶作品：

纤维二糖水解酶 I (Cel7A) 和纤维二糖水解酶 II (Cel6A) 是所有主要商业制剂中的主要纤维素酶蛋白。内切葡聚糖酶和半纤维素酶占细胞外提取物的不到 10% (Chundawat et al . 2011)。

来自里氏木霉的纤维素酶复合物含有内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡萄糖苷酶。有关这些单个酶的已知序列的信息已整理在下表中。每个单独的酶都作为单体发挥作用。

艾美捷Worthington纤维素酶的4个应用：

1.消化片

2.食品制备过程中纤维素的去除或软化（Toyama 1963）

3.从植物中制备原生质体（Cocking 1960）

4.各种制造工艺（White and White 1997）

相关文献：

1.纤维素酶及其应用，Adv. 化学。系列卷。95，R。古尔德，阿米尔。化学。社会党。出版社，华盛顿特区，1969 年

2.Adney, W.、Rivard, C.、Ming, S. 和 Himmel, M.： 木质纤维素生物质和废物的厌氧消化。纤维素酶和相关酶 ， Appl Biochem Biotechnol 30 , 165, 1991

3.Akiba, S., Kimura., Y., Yamamoto, K. 和 Kumagap, H.：黑曲霉抗蛋白酶纤维素酶的纯化和表征， J Ferment Bioeng 79 , 125, 1995

4.Almin, K. 和 Eriksson, K.： 羧甲基纤维素特性对绝对值纤维素酶活性测定的影响， Arch Biochem Biophys 124、129、1968

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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Worthington 胆碱酯酶，丁酰相关说明书

丁酰胆碱酯酶 (ButChE) 催化许多胆碱酯的水解：

这种酶存在于哺乳动物的血浆、肝脏、胰腺、肠黏膜和中枢神经系统的白质中。它有时被称为血清胆碱酯酶，而不是红细胞胆碱酯酶 (AChE)。它水解丁酰胆碱的速度比乙酰胆碱快 4 倍。ChE 不水解 D-β-甲基乙酰胆碱，而 AChE 可以。两者都被 10 -5 M 毒扁豆碱抑制。由于这种酶被用作杀虫剂和神经毒素的有机磷酸酯化合物显着抑制，因此它被广泛用于监测系统。Goodson等人已经描述了一种固定化胆碱酯酶检测装置。（1973 年）。

艾美捷Worthington马血清中丁酰胆碱酯酶的特性：

分子量：440,000 (Lee and Harpst 1973; 另见 Main et al . 1974)

组成：Lee 和 Harpst (1973) 指出 ButChE 是一种四聚体结构，具有相同大小的 110,000 道尔顿的亚基。它是一种糖蛋白。主要等人。(1974) 已经确定了氨基酸和碳水化合物的组成，基于 101,000 的颗粒重量。另见 Chiu等人。（1972 年）和帕夫利奇（1972 年）。

最佳 pH 值：6.0-8.0 (Augustinsson 1960)

消光系数：E 280 =13.6 (Main et al . 1974)

活化剂：Ca 2+和 Mg 2+ (Augustinsson 1960)

艾美捷Worthington胆碱酯酶，丁酰特异性：

该酶对丁酰胆碱和丙酰胆碱的活性高于乙酰胆碱。另见 Main等人。(1974) 用于一些比较活动。非胆碱酯（例如普鲁卡因、吗啡酯、阿托品和可卡因）对 ButChE 的作用敏感（Augustinsson 1960）。

抑制剂：

许多有机磷酸酯、氨基甲酸酯衍生物和季铵盐（Augustinsson 1960）。另见 Kamaric (1975)、Koelle等人。（1974 年），米尔纳等人。(1974)，斯坦利等人。(1974), Ashani等人。（1972 年），邮政（1971 年）。

相关文献：

1.Aeinehband, S., Lindblom, R., Al Nimer, F., Vijayaraghavan, S., Sandholm, K., Khademi, M., Olsson, T., Nilsson, B., Ekdahl, K., Darreh-Shori, T. 和 Piehl, F.： 补体成分 C3 和丁酰胆碱酯酶活性与多发性硬化症的神经变性和临床残疾有关 ， PLoS ONE 10，e0122048，2015

2.Ambache, N.、Freeman, M. 和 Hobbiger, F.： 乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶在豚鼠肠肌间丛和纵向肌肉中的分布 ， Biochem Pharmacol 20 , 1123, 1971

3.Ashani, Y., Wins, P. 和 Wilson, I.： 磷酸二乙酯对胆碱酯酶的抑制作用 ， Biochim Biophys Acta 284 , 427, 1972

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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Worthington肽合成应用丨胰凝乳蛋白酶方案

胰凝乳蛋白酶背景：

胰凝乳蛋白酶是一种由胰腺腺泡细胞产生的丝氨酸内肽酶。在胰蛋白酶对糜蛋白酶原进行蛋白水解后，糜蛋白酶被激活。当胰蛋白酶在赖氨酸和精氨酸处水解时，胰凝乳蛋白酶选择性地切割由芳香残基（酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸）形成的肽键（Hedstrom等， 1992）。两种主要形式的胰凝乳蛋白酶 A 和 B 在牛胰腺中的含量相等。它们是非常相似的蛋白质（80% 相同），但具有显着不同的蛋白水解特性（Hartley 1964、Meloun等人1966、 Smillie 等人1968 和 Graf等人2004）。以下信息主要与 A 型糜蛋白酶原和糜蛋白酶有关。

艾美捷Worthington胰凝乳蛋白酶特异性：

胰蛋白酶通过裂解精氨酸和异亮氨酸（R15 和 I16）之间的键来激活胰凝乳蛋白酶，从而导致结构修饰和底物结合位点的形成（Sears 2010）。胰凝乳蛋白酶与胰蛋白酶的不同之处在于胰蛋白酶在精氨酸和赖氨酸残基处切割肽，而胰凝乳蛋白酶更喜欢大的疏水残基（Hedstrom等， 1992）。胰凝乳蛋白酶优先催化涉及酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的 L-异构体的肽键的水解。它也很容易作用于敏感氨基酸的酰胺和酯。胰凝乳蛋白酶对大疏水残基的特异性可以通过由残基 189 到 195、214 到 220 和 225 到 228 形成的疏水 S1 结合来解释（Cohen等人， 1981）。

尽管胰蛋白酶和糜蛋白酶的 S1 位点结构仅显示出一个差异（在 189 位），但胰蛋白酶和糜蛋白酶的定点诱变未能互换特异性，这表明胰蛋白酶和糜蛋白酶实现底物特异性催化的机制尚不完全清楚。 Steitz等人1969 年和 Graf等人1988 年）。

艾美捷Worthington胰凝乳蛋白酶分子特征：

糜蛋白酶 A 和 B 具有 80% 的序列同一性（Hartley 1964、Meloun等人1966、 Smillie 等人1968 和 Gráf等人2004）。催化三联体（H57、D102 和 S195）的氨基酸在 S1 家族的肽酶序列中高度保守（Gráf et al. 2004）。214 位的丝氨酸在家族中也是高度保守的，并且已被提议作为催化三联体的第四个成员（Ohara等人1989 和 McGrath等人1992）。

艾美捷Worthington胰凝乳蛋白酶的4个应用：

1.序列分析

2.肽合成

3.肽图

4.肽指纹图谱

相关研究：

羧肽酶 B (COBC/COBPMS)

羧肽酶 Y (COY)梭菌蛋白酶, Endo-Arg-C (CP)

胶原酶 (CLS1-4/CLSPA)

弹性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

中性蛋白酶 (Dispase, NPRO )

木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)

胃蛋白酶 (PM)

蛋白酶、金黄色葡萄球菌、Endo-Glu-C (STAP)

蛋白酶 K (PROK)

胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)

胰蛋白酶、SequENZ (TRSEQII/TRSEQZ )

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)

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细胞分离研究丨Worthington梭菌蛋白酶方案

梭菌蛋白酶（内蛋白酶-Arg-C）背景：

梭菌蛋白酶是一种半胱氨酸激活的蛋白酶，与胶原酶和其他蛋白酶一起存在于溶组织梭菌的培养滤液中。它对精氨酸的羧基肽键的特异性及其对硫醇和钙离子的依赖性是独特的。

艾美捷Worthington梭菌蛋白酶特异性：

梭菌蛋白酶以较低的速率选择性地水解精氨酰键和赖氨酰键。它还可以作为转肽酶，在 pH 7.6-9.0 时具有最大活性（Anderson 1985，以及 Fortier 和 MacKenzie 1986）。

艾美捷Worthington梭菌蛋白酶分子特征：

重链和轻链均由具有 1581 个核苷酸开放阅读框 (ORF) 的单个基因编码。基因表达后，整个 ORF（信号区、前区和 9 个氨基酸肽接头）被转录。翻译后加工产生异二聚体活性酶（Dargatz  et al.  1993）。  

活化剂：

巯基要求：二硫苏糖醇、半胱氨酸或其他还原剂

钙离子是bi不可少的

还原剂

抑制剂：

乙二胺四乙酸

氧化剂

巯基试剂（如 TLCK）（Porter et al. 1971）

Co 2+、Cu 2+、Cd 2+和重金属离子

柠檬酸盐、硼酸盐和 Tris 阴离子部分抑制

艾美捷Worthington梭菌蛋白酶的5个应用：

1.肽图

2.序列分析

3.细胞分离 (Wang et al. 2004)

4.酰胺键的水解/缩合

5.肽合成 (Meiwes et al. 1991)

相关文献：

1.Gilles, A.、Imhoff, J. 和 Keil, B.： 梭菌蛋白酶高活性形式的化学特性、活性和硫醇含量 ， J Biol Chem 254 , 1462, 1979

2.Gilles, A.、Lecroisey, A. 和 Keil, B.：α-梭菌蛋白酶轻链的初级结构 ， Eur J Biochem 145 , 469, 1984

3.Homandberg, G.、 Komoriya , A. 和 Chaiken, I.： 非结合肽片段的酶促缩合使用分子阱 ， 生物化学 3385、3385、1982

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无动物型胶原酶丨Worthington的多种应用方案

艾美捷Worthington胶原酶：

• 纯化的胶原酶，代码：CLSPA/CLSPANK，含有最小的二次蛋白水解活性和高胶原酶活性。

• 1 型部分纯化的胶原酶具有胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。

• 2 型含有较高相对水平的蛋白酶活性，尤其是梭菌蛋白酶。

• 3 型含有最低水平的二级蛋白酶。

• 4 型被设计成胰蛋白酶活性特别低，以限制对膜蛋白和受体的损害。

• 5 型含有较高的胶原酶和酪蛋白酶值。

• 6 型含有高胶原酶活性，酪蛋白酶与胶原酶的比例约为 2:1。设计为相对于 I 型 ( col G)富含 II 型 ( col H) 胶原酶。

• 7型胶原酶和酪蛋白酶的活性比 1 型和 2 型胶原酶高四倍。

艾美捷Worthington 无动物型 AFA、AFB、AFC、STZ1 和 STZ2胶原酶：

来源于在完全不含动物成分的培养基中生长的培养物，设计用于引入

必须预防潜在的动物源性病原体。二级蛋白酶的水平与 1 型和 2 型胶原酶相似。

• CLSAFA是最初的 AF 等级，旨在具有类似于 1 型和 2 型胶原酶的胶原酶和二级蛋白酶。

• CLSAFB含有比 CLSAFA 更高的胶原酶和酪蛋白酶活性。

• CLSAFC具有特别低的胰蛋白酶活性，类似于 4 型胶原酶。

• STZ1 和 STZ2，0.22μ 过滤的 STEMxyme ® AF 胶原酶/中性蛋白酶 (Dispase ® ) 混合物，用于原代细胞和干细胞分离。

粗制品不仅含有几种胶原酶，还含有一种巯基蛋白酶、梭菌蛋白酶（Mitchell 1968）、一种胰蛋白酶样酶（Peterkofsky 和 Diegelmann 1971、Sparrow 和 McQuade 1973）和一种氨肽酶（Kessler 和 Yaron 1973）。Sugasawara 和 Harper (1984) 以及 Bond 和 Van Wart (1984) 报告了Cl. 胶原酶的纯化。溶组织菌。

艾美捷Worthington无动物型胶原酶的7个应用：

1.从肺、上皮和肾上腺组织中分离脂肪细胞、肝细胞和细胞

2.从骨骼、软骨、肌肉、甲状腺和内皮中分离心肌细胞和细胞

3.乳腺和其他各种软组织的隔离

4.人和猪胰岛细胞的分离（Kin 2007）

5.用含有蛋白水解活性混合物的粗胶原酶处理组织，可温和、选择性地消化细胞间基质，而6.对细胞的损伤很小或丧失活力

7.AFA 胶原酶适用于需要避免将动物源性病原体引入生物加工过程的应用

对于胶原蛋白结构和生物合成研究，研究人员通常使用不含其他蛋白水解活性的更高度纯化的胶原酶制剂。

对于组织解离，大多数研究人员使用粗胶原酶制剂，例如 CLS1、CLS2、CLS3 和 CLSAFA，并结合其他酶，例如弹性蛋白酶、胰蛋白酶和/或木瓜蛋白酶。

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Worthington脱氧核糖核酸及相关研究工具

脱氧核糖核酸 (DNA) 是一种双链螺旋核酸分子，由核苷酸单体组成，每个核苷酸单体由一个脱氧核糖、一个磷酸基团和四种含氮碱基之一组成：腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤和胸腺嘧啶。

DNA结构和功能：

每条染色体包含一个长的 DNA 分子，沿其长度排列着数百或数千个基因。DNA分子是一个双螺旋结构，外侧有糖-磷酸键，内侧有碱基对。碱基配对如下：腺嘌呤 (A) 与胸腺嘧啶 (T)，鸟嘌呤 (G) 与胞嘧啶 (C)。DNA 半保留复制，需要 RNA 引物。当亲本链分离时，每条链都用作制造新的互补链的模板。大肠杆菌DNA 复制是半不连续的；一条链连续复制，另一条不连续复制。这种不连续的复制形成了冈崎片段。大肠杆菌校对由 DNA 聚合酶 III 进行，它只使用碱基配对的核苷酸作为引物，如果存在错误掺入，则会停止 DNA 复制。在此阶段，DNA 聚合酶 III 全酶的 3' 到 5' 外切酶可以去除错误掺入的碱基。哺乳动物细胞有五种聚合酶：α、β、δ、ε和γ。alpha 和 delta 参与两条 DNA 链的复制，而 beta 和 epsilon 在 DNA 修复中发挥作用。伽马被认为可以复制线粒体 DNA (Weaver 2008)。

艾美捷 Worthington 脱氧核糖核酸拥有多种 DNA，包括：

1.来自小牛胸腺的 DNA 采用 Worthington 开发的方法制备和纯化，与大多数其他商业制剂相比，蛋白质和 RNA 污染更低。这种高度聚合的 DNA 是脱氧核糖核酸酶的极好底物。钠盐，必须转化为镁形式才能对 DNase 敏感。

2.DNA、纤维素

3.DNA，鲑鱼睾丸

4.DNA，大肠杆菌

5.DNA，λ，大肠杆菌W8850（λ C1857-57）

6.DNA、λ、BstEII 片段

7.DNA、λ、EcoRI 片段

8.DNA、λ、HindIII 片段

技术说明：一对碱基约为680 道尔顿。一个 A 260单位相当于 50 µg DNA 产物。

艾美捷Worthington脱氧核糖核酸相关研究工具：

白蛋白，无核酸酶 (BSAF)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

脱氧核糖核酸酶 II (HDA/HDAC/HDACS)

E•RASE RNase A/T1 混合物 (RCT)

组蛋白 (H, NHL)

溶菌酶 (LY/LYSF)

核酸酶，微球菌 (NFCP)

核酸酶，S1 (SINUC/SINUCL)

磷酸酶，碱性 (CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC)

磷酸二酯酶 I (VPH)

磷酸二酯酶 II (SPH)

蛋白酶 K (PROK/PROKS)

逆转录酶，重组 HIV (RTHIV)

核糖核酸酶 A (R/RAF/RASE/RS/RPDF)

核糖核酸酶 T1，无动物源 (RT1S)

艾美捷Worthington脱氧核糖核酸相关文献：

1.Aktipis, S.：DNA - 复制过程和修复， 教科书 Biochem。与克林。相关性，第 3 版,, , 767, 1992

2.Albertini, J. 和 Garnier-Suillerot, A.： 铁-博来霉素-脱氧核糖核酸系统。脱氧核糖核酸与 β-氨基丙氨酸部分的 α-氨基相互作用的证据 , Biochemistry 23 , 47, 1984

3.Alberts, B.： 原核 DNA 复制机制 ， Phil Trans R Soc Lond 317 , 395, 1987

4.Alberts, B. 和 Herrick, G.： 酶学方法卷。21 岁，S。Colowick 和 N. Kaplan，学术出版社，纽约，198 年，1971 年

5.Antonarakis, S.： 重组 DNA 技术在人类遗传疾病诊断中的作用 ， Clin Chem 35， B4，1989

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心肌黄酶丨Worthington克氏梭菌心肌黄酶的特性

心肌黄酶背景：

心肌黄酶是一类普遍存在的黄素结合酶，其催化从还原形式的二和三磷酸吡啶核苷酸即NADH、NADPH中充当氢受体的各种染料的还原。第一种被纯化的酶是来自心肌的酶（Straub 1939）。近二十年后，心脏心肌黄酶被证明与硫辛酰脱氢酶相同（Massey 1958, 1963）。其他心肌黄酶已被描述并从各种细菌、植物和哺乳动物器官中纯化。部分纯化的克氏梭菌提取物的心肌黄酶活性细胞，最初被描述为 NADH 和 NADPH 氧化酶的来源（Ciotti 和 Kaplan 1957），在该实验室中进行了观察，并将其用于脱氢酶和乙醇的耦合比色测定。（泰勒 1958 年）。这些基于 2,6-二氯苯酚吲哚酚脱色的方法通过使用还原后显色的四唑鎓染料进行了改进。（Brower 和 Woodbridge 1970；Nachlas 等人 1960）。

来自Cl 的酶。kluyveri 已被 Kaplan、Setlow 和 Kaplan (1969) 纯化和表征，他们使用与目前的 Worthington 产品等效的起始材料。

艾美捷Worthington克氏梭菌心肌黄酶的特性：

克氏梭菌心肌黄酶的特性：

除非另有说明，以下数据来自 Kaplan等人。（1969 年）。

分子量：24,000

蛋白质登录号：Q97E86（丙酮丁醇梭菌）

组成：该酶每分子含有一分子黄素单核苷酸。氨基酸组成已确定。

最佳 pH 值：8.5。在 pH 7.4 和 9.4 时，活性降低了 50%。NADH 和 NADPH 都共享这个最优值。

常数：据报道，NADH 的 Km 为 9 X 10 -5，而 NADPH 则低得多。

抑制剂：N-乙基马来酰亚胺在浓度低于 5 mM 时使心肌黄酶失活。

活化剂：我们发现过量的黄素单核苷酸 (FMN) 似乎会轻微刺激与二氯苯酚-吲哚酚的反应。

特异性：NADH 或 NADPH 均可用作还原剂。然而，辅酶之间没有催化氢交换。氧和细胞色素 C 都不会被Cl 还原。克鲁维心肌黄酶。

稳定剂：NADH、NADPH 和 FMN 保护酶免受尿素和胍的变性。

稳定性：虽然具有合理的稳定性，但如果长时间保存，干酶应储存在冰箱中。尤其是溶液，应始终远离强光。

艾美捷Worthington 克氏梭菌心肌黄酶相关文献：

1.Ballou, D. 和 Williams, C.：Vincent Massey， 传记回忆录，美国国家科学院，2013 年

2.Blaedel, W. 和 Hicks, G.： 反应速率连续测量的分析应用：血清中 的乳酸 ， Anal Biochem 4，476，1962

3.Boethling, R., Weaver, T.： 基于噻唑蓝还原的试剂配方中心肌黄酶活性的新测定 ， Clin Chem 25，2040，1979

4.Brower, M. 和 Woodbridge, J.：血液中乙醇的快速比色法测定， AACC Natl Mtg，AACC，1970

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弹性蛋白酶丨Worthington 核心酶详细参考资料

弹性蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，也可水解酰胺和酯。它在胰腺中作为无活性的酶原产生，并在十二指肠中被胰蛋白酶激活。以下信息适用于猪弹性蛋白酶。

弹性蛋白酶背景：

Eijkman 被认为是第一个将弹性蛋白酶作为细菌产物进行研究的人（Eijkman 1904）。然而，直到 1949 年 Baló 和 Banga 发表之前，它并没有显示出与胰腺的其他蛋白水解成分（例如胰蛋白酶和糜蛋白酶）不同。

1968年，Shotton和Hartley率先获得结晶猪弹性蛋白酶。在 1960 年代后期和 1970 年代初期，研究了弹性蛋白酶在肺气肿、动脉粥样硬化和急性出血性胰腺炎中的作用（Janoff 和 Sherer 1968、Janoff 和 Basch 1971、 Talamo等人1971、Kaplan等人1973 和 Bieth等人. 1974)。1974 年，Ardelt 发现了第二种弹性蛋白酶，将其命名为胰腺“弹性蛋白酶 II”和最初的“弹性蛋白酶 I”。

在 1980 年代，研究了弹性蛋白酶的催化特性 (Ascenzi et al . 1983)，并鉴定了抑制剂 (Largman et al . 1980, Lestienne et al . 1981, Kettner and Shenvi 1984, Poncz et al . 1984, and Imperiali and阿贝尔斯 1986 年）。弹性蛋白酶 I 和 II 的遗传信息被研究到 1990 年代（Ornitz等人1985、Stevenson等人1986、Swift等人1984、Tani等人1987 和 Gestin等人1997）。

弹性蛋白酶最近被用于研究细胞外基质分解中的机械力和酶活性（Jesudason et al . 2010）。还研究了它在人工器官发育中的用途（Tedder等人2010），并将其用作研究丝氨酸蛋白酶催化活性的模型（Tamada等人2009）。

艾美捷Worthington弹性蛋白酶分子特征：

猪胰弹性蛋白酶由 240 个氨基酸的单肽链组成，并含有 4 个二硫键 (Sawyer et al . 1973)。它与来自其他物种的胰腺弹性蛋白酶具有高度的序列同一性，例如与其共享 86% 同一性的大鼠（MacDonald等人，1982）。弹性蛋白酶 I 和 II 基因具有序列相似性，特别是在 5' 近端侧翼区域，包括 TATA 盒和假定的组织特异性增强子序列（Ornitz等人1985、Stevenson等人1986、Swift等人1984， Tani等人1987 和 Gestin等人1997）。

艾美捷Worthington 弹性蛋白酶化学性质：

蛋白质登录号：  P00772

分子量：26.0 kDa (比思 2004)

最佳pH值：8.5

等电点：9.5（比思 2004）

消光系数：

54,870 cm-1 M-1（理论值）

E1%, 280 = 21.18 (理论)

活性位点残基：

组氨酸 (H71)

天冬氨酸 (D119)

丝氨酸 (S214)

抑制剂：

被丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的二肽衍生物竞争性抑制

天然来源的抑制剂（例如丝氨酸蛋白酶抑制剂）（Tsunemi等人1996、Matern等人2003 和 Dementiev等人2006）

改性天然抑制剂（Ay等人2003 和 Hilpert等人2003）

硫酸盐修饰的脂质 (Ito et al . 1998)

艾美捷Worthington 弹性蛋白酶相关文献：

1.组织解离：因为弹性蛋白在结缔组织的弹性纤维中的浓度最高，所以经常使用弹性蛋白酶解离含有广泛细胞间纤维网络的组织。为此，它通常与其他酶一起使用，例如胶原酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。

2.膜蛋白溶解

3.蛋白质序列研究

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington真菌分泌酶研究 丨半乳糖氧化酶方案

半乳糖氧化酶 (GAO) 是一种真菌分泌酶，可催化一系列伯醇氧化为相应的醛，同时将分子氧还原为过氧化氢。

艾美捷Worthington半乳糖氧化酶特异性：

GAO 具有广泛的底物特异性，但具有显着的立体特异性，仅氧化底物的 D-异构体 (McPherson et al . 1992)。GAO 将氧化游离和聚合形式的半乳糖和一些半乳糖衍生物。氧化发生在 C6 位置。

艾美捷Worthington 半乳糖氧化酶化学性质：

分子量：68.5 kDa（根据翻译的 DNA 序列和 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳计算，McPherson et al. 1992）

68.0 ± 3.0 kDa（由物理测量确定，Cooper等人1959）

最佳pH值：7.0（库珀等人，1959 年）  

等电点：7.75（理论）

消光系数：

122,480 cm -1 M -1（理论值）

E 1%, 280 = 17.87 (理论)

抑制剂：

氰化物

二乙基二硫代氨基甲酸酯

叠丨氮化物

羟胺

乙二胺四乙酸

应用

血液和其他生物体液中半乳糖的定量测定（Frings 和 Pardue 1964、Hankin 1966 和 Roth等人1965）

组织化学定位半乳糖 (Roberts and Gupta 1965)

检测和区分糖蛋白 (Itaya et al . 1975)

艾美捷Worthington 半乳糖氧化酶测定：

Method : 在过氧化物酶/邻联甲苯胺偶联系统中测量反应速度，作为由半乳糖氧化引起的A 425的增加。在 25°C 和规定条件下的 pH 值 6.0 下，一个单位导致 A 425的变化为每分钟 1.0。

试剂：

0.1 M 磷酸钾缓冲液，pH 6.0

0.5% 邻甲苯胺。注意：据报道邻甲苯胺具有致癌性。小心轻放。

过氧化物酶。将 Worthington 过氧化物酶（代码：HPOD）以大约 60 u/ml 的浓度溶解在试剂级水中。

10% 半乳糖。静置过夜以达到突变平衡。

酶：

以 1 mg/ml 的浓度溶解在试剂级水中。进一步稀释至浓度为 0.2 - 0.5 单位/ml。

程序：

将分光光度计调整到 425 nm 和 25°C。

通过将 0.1 ml tolidine 添加到 12 ml 0.1 M 磷酸钾缓冲液 pH 6.0 中来制备 tolidine-缓冲混合物。

将移液器移入每个比色皿，如下所示：

联苯胺缓冲液 1.7 毫升

10% 半乳糖 1.5 毫升

过氧化物酶 0.1 毫升

在分光光度计中于 25°C 孵育 3-4 分钟以达到温度平衡并确定空白率（如果有）。加入 0.1 ml 适当稀释的酶并记录 A 425 /min 的增加。从曲线的初始线性部分。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml