艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒参数说明

武汉艾美捷科技有限公司2022年11月8日 13:56 点击：712

Cell Biolabs BrdU细胞增殖ELISA试剂盒使用抗BrdU抗体检测在细胞增殖过程中掺入细胞DNA中的BrdU。

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒基本参数：

中文名称：

CytoSelect BrdU细胞增殖分析ELISA试剂盒

英文名字：

CytoSelect BrdU Cell Proliferation ELISA Kit

编号：

CBA-251

规格：

96assays

保存条件：

将1000X BrdU溶液和抗BrdU单克隆抗体储存在-20ºC。将所有其他部件储存在4ºC。

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒检测原理：

当将细胞在含有BrdU的培养基中孵育时，嘧啶类似物代替胸苷掺入新合成的增殖细胞DNA中。除去标记介质后，将细胞固定，并用固定/变性溶液一步一步将DNA变性（DNA变性对于改善掺入的BrdU的可及性是必需的，以进行检测）。然后加入抗BrdU小鼠单克隆抗体，然后加入HRP偶联的二抗以检测掺入的BrdU。显色颜色的吸光度与掺入细胞中的BrdU数量成正比，并且可以与细胞增殖直接相关。

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒试剂的制备：

•1X洗涤缓冲液：用去离子水将10X洗涤缓冲溶液稀释至1X。搅拌均匀。

•抗BrdU单克隆抗体和二级抗体，HRP结合物：之前使用抗体稀释液稀释抗BrdU单克隆抗体1:1000。立即使用前用抗体稀释剂稀释第二抗体，HRP缀合物1:1000。不要储存稀释溶液。

•10倍BrdU溶液：使用前，立即将1000倍BrdU1:100稀释至细胞生长

来源：https://www.amyjet.com/products/CBA-251.shtml

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艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒化验原理

细胞周期和DNA合成的研究对许多科学领域都至关重要。传统上，放射性标记的胸苷被用于追踪新的DNA合成和细胞激增尽管相当敏感，但使用放射性标记的胸苷有以下局限性：管理、处理和处置放射性同位素，通常需要昂贵的检测设备。最近，胸苷类似物5-溴-2'-脱氧尿苷（BrdU）被用来代替放射性标记的胸苷，并结合到新合成的活跃增殖的DNA链中细胞。在固定和部分变性细胞DNA后，可以检测到BrdU其允许分析活细胞新DNA合成。

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒化验原理：

细胞选择™ BrdU细胞增殖ELISA试剂盒检测掺入细胞DNA的BrdU在使用抗BrdU抗体的细胞增殖期间。当细胞在含有BrdU，嘧啶类似物取代胸苷被并入新合成的DNA中增殖细胞（下图）。一旦去除标记介质，细胞就被固定，DNA就被用固定/变性溶液一步变性（需要变性DNA以改善并入的BrdU用于检测的可接近性）。然后是抗BrdU小鼠单克隆抗体加入抗体，然后加入HRP缀合的二级抗体以检测掺入的BrdU。显影颜色的吸光度大小与BrdU的量成正比并可与细胞增殖直接相关。

图：细胞选择示意图™ BrdU增殖ELISA

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒相关研究：

1.CBA-240细胞选择™ 细胞活力和细胞毒性试验

2.CBA-081细胞选择™ 96井Anoikis分析

3.CBA-253细胞选择™ 细胞增殖测定试剂（比色法）

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒套件组件：

1.1000X BrdU溶液（零件号125101）：一个30µL小瓶10 mM BrdU。

2.抗BrdU单克隆抗体（零件号125102）：一瓶10µL小鼠抗BrdU抗体。

3.固定/变性溶液（零件号125103）：一瓶20 mL。

4.抗体稀释剂（零件号125104）：一瓶50 mL。

5.二级抗体，HRP缀合物（零件号230003）：一个20µL小瓶。

6.10X洗涤缓冲液（零件号310806）：一瓶100 mL。

7.基质溶液（零件号310807）：一个12 mL琥珀瓶。

8.停止溶液（零件号310808）：一瓶12 mL。

相关文献：

1.Dalle-Donne, I., Giustarini, D., Colombo, R., et al. Protein carbonylation in human diseases. Trends Mol. Med. 9(4), 169-176 (2003).

2.Stadtman, E.R. and Oliver, C.N. Metal-catalyzed oxidation of proteins. Physiological consequences. J. Biol. Chem. 266(40), 2005-2008 (1991).

3.Reznick, A.Z., Cross, C.E., Hu, M.-L., et al. Modification of plasma proteins by cigarette smoke as measured by protein carbonyl formation. Biochem. J. 286, 607-611 (1992).

4.Dalle-Donne, I., Rossi, R., Giustarini, D., et al. Protein carbonyl groups as

biomarkers of oxidative stress. Clin. Chim. Acta 329(1-2), 23-38 (2003).

5.Lenz, A-G., Jorens, P.G., Meyer, B., et al. Oxidatively modified proteins in bronchoalveolar lavage fluid of patients with ARDS and patients at-risk for ARDS. Eur. Respir. J. 13(1), 169-174 (1999).

6.Levine, R.L., Williams, J.A., Stadtman, E.R., et al. Carbonyl assays for determination of oxidatively modified proteins. Methods Enzymol. 233, 346-357 (1994).

7.Reznick, A.Z. and Packer, L. Oxidative damage to proteins: Spectrophotometric

method for carbonyl assay. Methods Enzymol. 233, 357-363 (1994).

来源：https://www.amyjet.com/products/10005020-96.shtml

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艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）分析原理

艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）提供了快速，便捷的方法来筛选一般的DNA损伤，而不论损伤的来源或性质如何。套件包括Comet Slides，试剂和荧光染料，可在落射荧光显微镜下观察细胞。

艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）基本参数：

中文名称：

OxiSelect 彗星分析试剂盒（3孔载玻片）艾美捷现货

英文名字：

OxiSelect Comet Assay Kit (3-Well Slides)

编号：

STA-351

规格：

75assays

保存建议：

储存在-20ºC。在室温下储存所有其他套件组件。

艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）套件组：

1.OxiSelect™ 3孔彗星载玻片（零件号STA-353）：25张载玻片。

2.OxiSelect™ 彗星琼脂糖（零件号235002）：一个15 mL无菌瓶。

3.Vista Green DNA染料，10000X（零件号235003）：一个5µL小瓶。

4.EDTA溶液，500 mM（零件号235102）：一瓶250 mL。

5.10X裂解液（零件号235103）：一瓶100 mL。

艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）彗星分析原理：

来源：https://www.amyjet.com/products/STA-351.shtml

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艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）化验原理及研究

由于环境因素和细胞内的正常代谢过程，DNA损伤发生在每天每细胞1000至1000000个分子损伤的发生率。虽然这只占人类基因组约60亿碱基（30亿碱基对），未修复的损伤基因会阻碍细胞执行其功能的能力，并显著增加巨蟹座彗星试验或单细胞凝胶电泳试验（SCGE）是一种常见的检测测量单个细胞中的DNA损伤。在电泳场下，受损的细胞DNA（包含片段和链断裂）从完整的DNA中分离出来，产生一颗经典的“彗星”显微镜下的“尾巴”形状。DNA损伤的程度通常通过彗星尾部进行目视评估测量然而，图像分析软件也可用于测量各种参数。

艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）是一种快速灵敏的试剂盒，用于测量细胞DNA损伤。每个试剂盒提供足够的试剂进行多达75次的分析。

艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）化验原理：

首先，将单个细胞与熔融琼脂糖混合OxiSelect的应用程序™ 彗星幻灯片。

然后用裂解缓冲液处理这些嵌入的细胞以及使DNA松弛和变性的碱性溶液。

最后，对样品进行电泳以将完整的DNA与受损的片段分离。电泳后，将样品干燥，用DNA染料染色，并通过荧光显微镜观察。

在这些条件下，受损的DNA（包括切割和链断裂）将比完整的DNA并产生“彗尾”形状（见下图）。每个试剂盒提供足够的试剂进行多达75次分析。

艾美捷彗星检测试剂盒（单细胞凝胶电泳）相关研究：

1. STA-320: OxiSelect™ Oxidative DNA Damage ELISA Kit (8-OHdG Quantitation)

2. STA-321: OxiSelect™ DNA Double-Strand Break (DSB) Staining Kit

3. STA-324: OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP sites)

4. STA-325: OxiSelect™ Oxidative RNA Damage ELISA Kit (8-OHG Quantitation)

5. STA-350: OxiSelect™ Comet Assay Kit (3-Well Slides), 15 Assays

6. STA-352: OxiSelect™ Comet Assay Slides (3-Well), 5 Slides

7. STA-353: OxiSelect™ Comet Assay Slides (3-Well), 25 Slides

8. STA-355: OxiSelect™ 96-Well Comet Assay Kit

9. STA-356: OxiSelect™ 96-Well Comet Assay Slide

来源：https://www.amyjet.com/products/STA-351.shtml

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艾美捷T7 RNA聚合酶化学性质&文献参考

噬菌体T7 RNA聚合酶是一种DNA依赖性RNA多聚酶（99kDa），对含有T7噬菌体启动子的DNA序列的体外RNA合成进行催化。高浓缩版T7 RNA聚合酶HC非常适合建立和优化高产量的体外转录反应。所提供的T7 IVT设置缓冲液、MgCl2和DTT溶液能够测试不同的反应条件，例如核苷酸/MgCl2浓度。

艾美捷T7 RNA聚合酶化学性质：

仅供体外使用！

运输：凝胶包装运输

储存条件：-20°C储存

避免冻融循环

保质期：12个月

纯度：≥ 95%（SDS-PAGE）

形式：液体

浓度：2.0–2.2μg/μl（T7 RNA聚合酶HC储存缓冲液中的A280，ɛ=140 l mmol-1 cm-1[1]）

极小优化的分析设置建议：HighYield T7 RNA合成试剂盒（#RNT-101）。

活性：1μl T7 RNA聚合酶HC在37°下10分钟内产生>/=30μg RNA。这相当于1000 U NEB的T7 RNA聚合酶（高浓度），#M0460T（活性测定条件：1x T7 IVT建立缓冲液，补充10 mM DTT、12 mM MgCl2、3 mM NTPs、1μl T7 RNA聚合酶HC和1μg DNA模板（1.4 kpb RNA转录物），20μl。用荧光微板测定法测定RNA产量。）

艾美捷T7 RNA聚合酶包含：

T7 RNA Polymerase HC

1x 50 μl (2 μg/μl)

50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 0.1 % Triton-X-100, 50 % Glycerol (v/v), pH 8.0

T7 IVT Set-up Buffer

1x 200 μl (10x)

400 mM Tris-HCl (pH 8.0), 20 mM Spermidin

DTT

1x 100 μl (100 mM)

MgCl2

1x 200 μl (200 mM)

艾美捷T7 RNA聚合酶相关研究：

HighYield T7 RNA Synthesis Kit, #RNT-101

RNAse Inhibitor - recombinant, #PCR-392

NTP bundle, #NU-1014

文献参考：

[1] King et al. (1986) Transcription by T7 RNA Polymerase Is Not Zinc-Dependent and Is Abolished on Amidomethylation of Cysteine-347. Biochemistry25(1):37.

来源：https://www.amyjet.com/brand/Enzo-Life-Sciences.shtml

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中英文说明书丨艾美捷T7 RNA聚合酶介绍

艾美捷T7 RNA聚合酶英文说明：

Activity: 1 μl T7 RNA Polymerase HC generates >/= 30 μg RNA in 10 min at 37°. This is comparable to 1000 U of NEB’s T7 RNA Polymerase (High Concentration), #M0460T (activity assay conditions: 1x T7 IVT Set-up Buffer supplemented with 10 mM DTT, 12 mM MgCl2, 3 mM NTPs, 1 μl T7 RNA Polymerase HC and 1 μg DNA template (1.4 kpb RNA transcript) in 20 μl. RNA yield was determined with a fluorescence microplate assay.)

Cat. No.：RNT-008

Amount：50 μl (2 μg/μl)

Shipping: shipped on gel packs

Storage Conditions: store at -20 °C

avoid freeze/thaw cycles

Shelf Life: 12 months

Purity: ≥ 95 % (SDS-PAGE)

Form: liquid

Concentration: 2.0 – 2.2 μg/μl (A280, ɛ = 140 L mmol-1 cm-1 [1] in T7 RNA Polymerase HC Storage Buffer)

Description:

Bacteriophage T7 RNA Polymerase is a DNA-dependent RNA polymerase (99 kDa) that catalyzes in vitro RNA synthesis from a DNA sequence containing a T7 phage promoter.

The highly concentrated version T7 RNA Polymerase HC is ideally suited for set-up and optimization of high yield in vitro transcription reactions. The provided T7 IVT Set-up Buffer, MgCl2 and DTT solutions enable testing of different reaction conditions such as nucleotide/ MgCl2 concentrations.

Recommendation for assay set-up with minimal optimization: HighYield T7 RNA Synthesis Kit (#RNT-101).

艾美捷T7 RNA聚合酶中文说明：

1μl T7 RNA聚合酶HC在37°下10分钟内产生>/=30μg RNA。这相当于1000 U NEB的T7 RNA聚合酶（高浓度），#M0460T（活性测定条件：1x T7 IVT建立缓冲液，补充10 mM DTT、12 mM MgCl2、3 mM NTPs、1μl T7 RNA聚合酶HC和1μg DNA模板（1.4 kpb RNA转录物），20μl。用荧光微板测定法测定RNA产量。）

艾美捷T7 RNA聚合酶内容：

T7 RNA聚合酶HC

1x 50μl（2μg/μl）

50 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、100 mM NaCl、5 mM DTT、0.1%Triton-X-100、50%甘油（v/v），pH 8.0

T7 IVT设置缓冲区

1x 200μl（10倍）

400 mM Tris-HCl（pH 8.0），20 mM精蛋白

DTT

1x 100μl（100 mM）

氯化镁

1x 200μl（200 mM）

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