人纤溶酶原(Pg)ELISA试剂盒使用说明书

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人纤溶酶原(Pg)ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：人纤溶酶原(Pg)酶联免疫分析试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它组织液中纤溶酶原(Pg)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人纤溶酶原(Pg)水平。用纯化的抗-纤溶酶原(Pg)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入纤溶酶原(Pg)，再与HRP标记的纤溶酶原(Pg)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的纤溶酶原(Pg)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人纤溶酶原(Pg)浓度。

试剂盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行实验。

2．待检血清1：20稀释：具体为190μl样品稀释液中加10μl待检血清，混匀即可

3．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

4．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1.         标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为（2400μg/ L，1600μg/ L ，800μg/ L， 400μg/ L， 200μg/ L）。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加1：20稀释的待测样品10μl（样品最终稀释度为100倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.