百萤课堂：CCK-8试剂盒相关问题与解答

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是百萤生物生产的一种基于 SST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。WST-8在电子耦合载体1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色甲臜产物（formazan），颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

1.CCK-8试剂盒和MTT试剂盒有什么区别？

答：CCK-8试剂盒和MTT试剂盒都是用于测量细胞活力的方法，但CCK-8试剂盒有以下优势：

（1）CCK-8试剂盒使用的WST-8比MTT更易被细胞还原，因此灵敏度更高，检测时间更短；

（2）CCK-8试剂盒生成的甲臜产物是水溶性的，不需要添加有机溶剂或者洗涤细胞，操作更简单方便；

（3）CCK-8试剂盒对细胞毒性更小，不会影响细胞的正常生长和功能。

2.CCK-8的工作原理是什么？

答：CCK-8试剂盒中的WST-8可以被活细胞中的代谢产物还原为可溶性的形式。还原后的WST-8在存在电子耦合剂的条件下形成一种有色产物，其吸光度与细胞数量和代谢活性相关。通过测量吸光度的变化，可以间接评估细胞的增殖能力或毒性。

3. CCK的保存和稳定性如何？

答：CCK稳定性高，避光条件-20℃有效期2年，4℃有效期1年。经常使用建议4℃保存，避免反复冻融。CCK正常颜色为粉红色，若颜色发生明显偏差，质量可能有发生变化。

4.CCK的细胞毒性如何？

答：CCK毒性非常低，因此CCK检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法，中性红染色法或DNA荧光染色法。

5.CCK会对活细胞进行染色吗？

答：不会，首先WST-8不会进入细胞染色，整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外WST和WST-8甲臜都属于高度水溶性组分，反应结束更换新的培养液，即可外源组分。

6.做细胞活性检测时，每孔应该接种多少个细胞？

答：当使用标准96孔板时，贴壁细胞的小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。

7.若是使用6孔或者24孔板进行试验，CCK试剂使用量怎么样呢？

答：如果要使用6孔板或24孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

8.能否用384孔板进行细胞增殖与活性检测的实验呢？

答：可以，CCK-8产品的使用量为每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍，然后加入培养基总体积的20%即可，这样可减少误差。

9.培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢？

答：不会的，培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光值而消去，因此不会对检测造成影响。

10.在加入CCK-8时可否不更换培养基？

答：一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其它培养基。

11.只可以在450 nm波长处测OD值吗？

答：可以在450 nm波长处测OD值，但是若无此波长的滤光片，可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度高。

12.若是暂不检测OD值，该如何处理？

答：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化

13.在实验中OD值太高，怎么解决？

答：可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。此外，可适当减少细胞的数量。

14.如果OD值太低，怎么解决？

答：可以采取2个办法：1、适当增加细胞数量  2、延长加入CCK-8试剂后的反应时间。

15.应该每次做标准曲线吗？

答：建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。

16.在cck-8显色过程中，如何终止反应

答:有以下几种方法（96孔板）：

(1) 在显色反应后，将培养板放置4°冰箱内；

(2) 每孔加入10ul 0.1M HCL溶液。

(3) 每孔加入10ul 1%（w/v）的SDS溶液。注：反应停止后，应在24h内测定

17.如何减少由于CCK-8试剂在孔壁上的残留所带来的误差

答：可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样

18.好用的 CCK-8 试剂盒推荐？

答：百萤生物生产的 Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞活力检测试剂盒已广泛用于生物活性因子的活性检测，抗肿瘤药物的筛选，细胞增殖的测定，细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验

19.如何使用CCK-8进行细胞增殖实验？

答：通常，使用CCK-8进行细胞增殖实验的步骤如下：

（1）将需要测定增殖能力的细胞均匀悬浮在培养基中，并将其分配到孔板或培养皿中。

（2）在每个孔中加入CCK-8试剂，并确保试剂均匀分布。

（3）将孔板或培养皿放回培养箱中，进行一定时间的培养，使细胞与试剂发生反应。

（4）反应结束后，使用吸光度计测量吸光度，并根据标准曲线或控制组进行数据分析，得出细胞增殖能力的相对值。

20.CCK-8试剂盒的优点是什么？

答：（1）高灵敏度：CCK-8试剂可以对低细胞数进行检测，因此对于罕见细胞或稀释的细胞样品非常有用。

（2）快速操作：CCK-8试剂盒提供了一种快速而简便的方法来评估细胞的增殖情况，通常只需几个小时即可得到结果。

（3）可行性高：CCK-8试剂盒对各种细胞类型都具有较好的适用性，可应用于多种细胞培养条件和实验设计。

21.有没有CCK-8及与其他细胞增殖检测试剂的特性对比？

答：图中提供了多种用于检测细胞增殖的方法、对比，供参考

22.CCK-8试剂盒是否有副作用？

答：CCK-8试剂盒是一种常用的细胞增殖检测试剂，通常在细胞培养实验中使用，并且已被广泛验证和接受。一般情况下，正确使用CCK-8试剂盒不会对细胞产生明显的副作用。CCK-8试剂本身对细胞具有较低的毒性。它是一种水溶性试剂，主要由WST-8（水溶性四氧化三氮唑盐）和电子媒介体1-Methoxy PMS（促进电子传递）组成。

在CCK-8试剂中，WST-8可被细胞内的代谢活性还原为橙色的水溶性产物，该产物在细胞外可通过光学密度测量进行定量检测。1-Methoxy PMS作为电子媒介体，促进WST-8的还原反应。

当CCK-8试剂与细胞接触时，其影响对细胞的影响主要来自WST-8的还原产物。在适当的浓度下，CCK-8试剂对细胞的生长和代谢活性影响较小，并不会对细胞造成明显的毒性。

然而，值得注意的是，对于特定的细胞类型或实验条件，可能需要根据实际情况进行优化和验证。此外，在使用CCK-8试剂时，建议遵循相关的操作规程和安全指南，确保安全操作和正确解读实验结果。

23.CCK-8在实验时，每孔应该接种多少细胞？

答：针对标准96孔板，贴壁细胞的最小接种量为1000个/孔 (100μl培养基)。若为白细胞，接种量不低于2500个/孔 (100μl培养基)。如若使用24孔板或6孔板，应预先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

以上是百萤整理的CCK-8试剂盒的问题以及解答，大家可以做为参考。