G-Biosciences Protein A/G磁珠原料优势介绍及热门研究

Protein A/G磁珠通常用于将抗体与血清、细胞培养上清或腹水分离，以及利用免疫沉淀和共同免疫沉淀从细胞或组织提取物中分离抗原的蛋白质。Protein A/G 磁性珠含有重组蛋白 A/G，结合了蛋白质 A 和蛋白质 G 的 IgG 结合领域。使其成为研究和净化免疫球蛋白的更通用、更方便的工具。

艾美捷 G-Biosciences Protein A/G磁珠原料优势：

1.具有高效的蛋白结合能力。

2.超低非特异性吸附的性能。

3.配合磁力架操作省时、简便、温和。

4.稳定性高。

艾美捷 G-Biosciences  Protein A/G磁珠原料使用注意事项：

1.仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2.请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

3.IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到 IP Lysis/WashBuffer 的影响，因此，如使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。

4.磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。

艾美捷 G-Biosciences  Protein A/G磁珠原料相关热门研究：

个例展示：

1.KLH载体蛋白原料（含预活化）

GBS-786-088 钥孔血蓝蛋，KLH，免疫级 10mg

2.BSA载体蛋白原料（含预活化）

GBS-786-086 牛血清白蛋白，BSA，免疫级 10mg

3.即用型KLH和BSA偶联试剂盒

GBS-786-068 HOOK? Peptide Coupling Kit (Amine reactive) with OneQuant? BSA 5次反应 胺反应性

4.其它佐剂（明矾，CFA，IFA）

GBS-786-1215 明矾佐剂 50ml 无热原，无内毒素

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究，旨在提供试剂、特殊化学品、缓冲液、分析、应用试剂盒等各类研究工具。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/featured/KLH-BSA.shtml

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G-Biosciences G-Sep凝胶过滤树脂：一步快速脱盐！

艾美捷 G-Biosciences G-Sep™ 是一种凝胶过滤树脂，由超纯交联葡聚糖组成，用于工业应用中的脱盐和缓冲液交换。它具有高选择性、极好的分辨率、低非特异性吸附和稳定的化学稳定性。

艾美捷 G-Biosciences G-Sep树脂的特点：

——只需一步即可快速脱盐、去除污染物并转移到新的缓冲液中。

——出色的回收率和最小的样品稀释度

——提供预包装SpinOUT™ 脱盐柱用于快速方便的脱盐

使用 G-Sep™ 纯化的分子根据大小进行分离。较小的分子通过色谱柱的速度明显慢于较大的分子。

有两种不同的 G-Sep™ 树脂可供选择，G-Sep™ 25 和G-Sep™ 50. 它们的交联度不同，因此溶胀度和分子分级范围也不同。G-Sep™ 25 更适合小分子，G-Sep™ 50 更适合大分子。G-Sep™ 25 和 G-Sep™ 50 均提供 3 种不同的粒径（超细、细和中）。

G-Sep™ 25 的分子量截止值 (MWCO) 是蛋白质的 5 kD 和核酸的 10 个碱基。G-Sep™ 50 的分子量截止值 (MWCO) 是蛋白质的 25 kD 和核酸的 20 个碱基。

使用 G-Sep™ 处理时，缓冲液和 pH 值对分辨率的影响很小，纯化的生物分子不会被显着稀释（1.5 倍）。

G-Sep™ 可在 121°C、pH 7 条件下高压灭菌 30 分钟，并且在所有常用缓冲液中稳定，包括：0.2M NaOH；0.2M 盐酸；1M醋酸；8M尿素；6M 盐酸胍；1% SOS，24% 乙醇；30% 丙醇；和 30% 乙腈。

艾美捷 G-Biosciences G-Sep树脂的特征：

储存： 4 至 30°C，干燥树脂。在 20% 乙醇或 0.1 M NaOH 中使用 4 至 8 °C 的树脂

化学稳定性： 常用缓冲液、0.2 M NaOH、0.2 M HCl、1 M 乙酸、8 M 尿素、6 M HCl、1 % SDS、24 % 乙醇、30 % 丙醇、30 % 乙腈

艾美捷 G-Biosciences G-Sep树脂的应用：

1.样品中的蛋白质纯化和污染物去除

2.用于蛋白质和核酸溶液的脱盐和缓冲液交换

3.从肽中分离蛋白质

4.脱盐肽  

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究，旨在提供试剂、特殊化学品、缓冲液、分析、应用试剂盒等各类研究工具。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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G-Trap树脂，G-Biosciences G-Trap丁基琼脂糖6研究

艾美捷 G-Biosciences G-Trap™ Butyl Agarose 6 Fast Flow 预装柱，用于通过疏水相互作用色谱 (HIC) 分离生物分子。

生物分子在 HIC 柱上的分离基于连接到树脂上的配体的疏水性、待分离的蛋白质或酶上存在的表面暴露的疏水氨基酸的分布以及结合或起始缓冲液中使用的盐的浓度和类型. 在 HIC 中，通过在结合缓冲液或起始缓冲液中使用更高浓度的抗离液盐（例如硫酸铵、硫酸钠等）来促进生物分子与柱（配体）的结合。

直链烷基链配体（如丁基、辛基）表现出纯疏水特性，而芳基配体（如苯基）表现出混合模式行为，其中芳香族、疏水性以及缺乏电荷在蛋白质/生物分子吸附到柱子中起作用。

艾美捷 G-Biosciences 包含多种 G-Trap™ HIC 色谱柱，例如 G-Trap™ Butyl Agarose 6 Fast Flow、G-Trap™ 辛基琼脂糖,G-Trap™ 苯基琼脂糖 6 快速流动（高亚基）,G-Trap™ Phenyl Agarose 6 Fast Flow (Low Sub)以便选择适合分离目的蛋白的HIC柱。此外 G-Trap™ HIC 选择试剂盒可用于初始筛选合适的疏水柱和目标蛋白的纯化条件。

艾美捷 G-Biosciences G-Trap™ Butyl Agarose 6 Fast Flow树脂和色谱柱的特性如下所列：

G-Trap™ 丁基琼脂糖 6 快速流动树脂

平均粒径：  90 µm

珠粒结构： 高度交联的 6% 琼脂糖

配体：丁基

配体浓度： 约40μmol/ml

结合能力： 约 20mg HSA/ml 树脂

pH稳定性工作范围：  3-13

pH 稳定性 原位清洗 (CIP)：  2-14

最大压力（MPa）：  0.3

最大流速：  450cm/h

排除限（球状蛋白）：  4 x 10 6

物理稳定性： 由于 pH 值或离子强度的变化，体积变化可忽略不计

化学稳定性： 对所有常用的水性缓冲液稳定：1 M NaOH、8 M 尿素、8 M 盐酸胍、70% 乙醇

储存条件：4 至 30°C，20% 乙醇

G-Trap™ Butyl Agarose 6 Fast Flow 1 ml 色谱柱：

柱体积：1 ml

立柱尺寸：0.7 x 2.5 cm

色谱柱 Harware 压力限制：0.5 MPa

色谱柱硬件：聚丙烯（生物相容性）

G-Trap™ Butyl Agarose 6 Fast Flow ，5 ml 色谱柱

柱体积：5 ml

立柱尺寸：1.6 x 2.5 cm

Column Harware 压力限制：0.5 MPa

色谱柱硬件：聚丙烯（生物相容性）

应用程序：

G-Trap™ Butyl Agarose 6 Fast Flow 预装柱，用于通过疏水相互作用色谱 (HIC) 分离生物分子。

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究，旨在提供试剂、特殊化学品、缓冲液、分析、应用试剂盒等各类研究工具。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/featured/KLH-BSA.shtml

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Abbkine EliKine人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒操作方法

甲胎蛋白（AFP）是原发性肝癌的高特异性和高灵敏度的肿瘤标志物。它的 Cutoff 值一般在20 μg/L，当大于500 ug/L或含量不断上升时，比较有确定的意义。

实验建议：

EliKine™ 人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒采用双抗体夹心法来定量样品中的人甲胎蛋白（AFP）。抗人甲胎蛋白（AFP）的特异性抗体包被于酶标板上，将样品或标准品加入酶标板的孔中，其中的人甲胎蛋白（AFP）会与包被在板上的固相抗体结合。未结合的成分被洗去，然后将HRP偶联的抗人甲胎蛋白（AFP）特异性抗体加入孔中。在洗涤去除未结合的HRP 偶联抗体后，加入显色底物（TMB），TMB 在 HRP 催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在 450 nm 波长处测OD 值，人甲胎蛋白（AFP）浓度与 OD450 值之间呈正比。

人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒组分：

• Human AFP Microplate

• Human AFP Standard (lyophilized)

• Sample Diluent (5×)

• Assay Buffer (5×)

• HRP-conjugated Human AFP Detect Antibody (100×)

• HRP Substrate（TMB）

• Stop Solution

• Wash Buffer (20×)

• Plate Covers

EliKine™ 人甲胎蛋白（AFP）ELISA定量试剂盒优势：

其检测具有高灵敏度和优良的特异性，未观察到和人甲胎蛋白（AFP）类似物之间的显着交叉反应或干扰。

使用中注意事项：

1. 如果 Sample Diluent (5×)和 Assay Buffer (5×)出现颜色变黄，少量沉淀等现象，是因为试剂中含有血清导致，离心去掉沉淀即可，不影响正常使用。

2. 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。

3. 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。

4. 为确保准确的结果，在孵育步骤中必须正确粘附板贴。

5. Stop Solution 有一定的腐蚀性，操作时请做好防护措施。

来源：https://www.abbkine.cn/product/ket6037/

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Abbkine AbFluor 488 细胞凋亡检测试剂盒特点及实验建议

细胞凋亡（apoptosis）是一种基本生物学现象，指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡，在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。在正常活细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）位于细胞膜的内侧，而在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。膜联蛋白V(Annexin V) 是一种分子量为35~36KDa的钙离子依赖型磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。通过荧光素或者生物素标记Annexin V即可简单快速地直接检测出细胞早期凋亡情况。 碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，而早期凋亡细胞的细胞膜是完好的，对PI有拒染性。但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能透过细胞膜而使细胞核染上。因此将Annexin V 与PI 匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。PI可以被488,532或546nm激光线激发，并发出红色荧光。

实验建议：

Abbkine Annexin V-AbFluor™ 488 细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光）含有Abbkine专有的AbFluor™ 488 绿色荧光染料标记的Annexin V，可通过流式细胞仪或荧光显微镜对凋亡细胞进行鉴定和定量。

AbFluor 488 细胞凋亡检测试剂盒组分：

• Annexin V 结合缓冲液(5x)

• Annexin V- AbFluor™ 488

• Propidium Iodide (PI)

AbFluor 488 细胞凋亡检测试剂盒优势：

• Abbkine AbFluor™ 488 是FITC的优质替代物，不仅荧光强度和光稳定性更好，而且不受pH的影响

• Annexin V- AbFluor™ 488: Ex/Em = 491/517 nm; PI: Ex/Em = 535/617 nm (DNA染料)

• 适用于流式细胞术和荧光显微镜

AbFluor 488 细胞凋亡检测试剂盒实例展示：

图：喜树碱诱导Hela细胞24小时，Annexin V-AbFluor染色™ 488细胞凋亡检测试剂盒。细胞是具有膜联蛋白V-AbFluor的晚期凋亡/坏死细胞™ 488和PI染色（绿色膜，红色碎片核）。

来源：https://www.abbkine.cn/product/kta0002/

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Worthington木瓜蛋白酶解离系统解决方案

艾美捷Worthington Papain Dissociation System 是一套试剂，旨在用于 Huettner 和 Baughman 的神经细胞分离方法 ( J. Neurosci., 6 , 3044, 1986)。这些材料是为了方便和简单而设计的，对偶尔使用的用户以及更有经验和经常使用的用户都很有用。每个批次都经过大鼠脊髓神经细胞分离性能测试，该试剂盒为每次解离提供新鲜制备的酶溶液。

稳定性/储存： 试剂在环境温度下在正常运输程序中预期的一段时间内是稳定的，但包装在到达时应冷藏。使用前，内容物可在 2-8°C 下保存 4-6 个月。储存在 2-8°C。

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶解离系统包装内容：

该包装包含足够的材料，可以分离五份最多 0.3-0.4 cm 3的单独组织等分试样。对于较大的组织样本，在每个步骤中按比例准备较大体积的试剂，并按照协议中所述的相同比例将它们组合起来。

• 小瓶1： 含有钙、镁、碳酸氢盐和酚红的无菌厄尔平衡盐溶液(EBSS)，每包一瓶，100 毫升。该小瓶的等分试样用于重构其他小瓶并制备稀释的抑制剂溶液。在使用之间冷藏并在每次使用前用无菌 O 2 :CO 2平衡。

• 小瓶2：含有L-半胱氨酸和EDTA 的木瓜蛋白酶，每包5 x 100 单位一次性小瓶。该材料经 0.22 微米膜过滤并在高压灭菌的小瓶中冻干。用 5ml EBSS（小瓶 1）重构的小瓶在 1mM L-半胱氨酸和 0.5mM EDTA 中产生每毫升 20 单位木瓜蛋白酶的溶液。需要在 37°C 下短暂孵育以确保完全溶解和活性。

• 小瓶3：脱氧核糖核酸酶I (DNase)，每包5 x 2000 单位一次性小瓶。

该材料经过 0.22 微米膜过滤并在高压灭菌小瓶中冻干。用 0.5ml EBSS（小瓶 1）复溶的小瓶产生每毫升 2000 单位脱氧核糖核酸酶的溶液。避免剧烈混合。

• 小瓶4：含有牛血清白蛋白的卵类粘蛋白蛋白酶抑制剂，每包一瓶，重构后32ml。

该材料经过 0.22 微米膜过滤并在高压灭菌小瓶中冻干。用 32ml EBSS（小瓶 1）复溶的小瓶产生的溶液的有效浓度为每毫升 10mg 的卵类粘蛋白抑制剂和 10mg 白蛋白。该小瓶的等分试样用于每次解离。在使用之间冷藏并在每次使用前用无菌 O 2 :CO 2平衡。在 2-8°C 储存时，重构后稳定。

还包括一张将颜色与 pH 值关联起来的卡片，用作 O 2 :CO 2平衡的指南。

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶解离系统相关研究：

胶原酶 (CLS1-4/CLSPA)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)

蛋白酶 K (PROK)

胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS /TRTPCK)

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)

细胞分离优化系统 (CIT)

肝细胞分离系统 (HIS)

新生儿心肌细胞分离系统 (NCIS)

相关参考文献：

1.Bader, C.、MacLeish, P. 和 Schwartz, E.： 对从 Tiger Salamander Retina 分离的孤立棒状感光器的光的反应 ， Proc Natl Acad Sci USA 75 , 3507, 1978

2.巴绍尔，马克 M： 卷。五十八 (I) ,, , 124, 1979

3.Dreyfus, Cheryl F. 和 Black, Ira B.: Methods Neurosci 2 , 10, 1990

4.Finkbeiner, S. 和 Stevens, CF： 定量测量在评估谷氨酸神经毒性中的应用 ， Proc Natl Acad Sci USA 85 , 4071, 1988

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington果胶酶的特性及测定方案

艾美捷Worthington 纯化果胶酶是一种多组分制剂，可高效解聚具有不同酯化程度的植物果胶。该产品含有大量的半纤维素酶、纤维素酶、果胶酯酶和木聚糖酶活性，与果胶裂解酶和多聚半乳糖醛酸酶协同作用消化植物细胞壁组织。当与 Worthington 纯化的纤维素酶一起使用时，已发现纯化的果胶酶在玉米、大豆、红甜菜、向日葵、番茄和柑橘等几种植物系统中非常成功地产生了高产量的活原生质体。一般来说，浓度范围为 0.1% 至 0.5% 的果胶酶（伴随着 0.5% 至 1.5% 的纤维素酶）在 24°C 至 37°C 下使用 1 至 16 小时会产生良好的效果。

主要的：  

果胶裂解酶 (4.2.2.10)

多聚半乳糖醛酸酶 (3.2.1.15)

半乳聚糖 1,4-α-半乳糖醛酸酶 (3.2.1.67)

次要的：

纤维素酶（内切纤维素酶（3.2.1.4）、外切纤维素酶（ 3.2.1.91） 、纤维二糖酶（3.2.1.21））

半纤维素酶 (3.1.1.73)

果胶酯酶 (3.1.1.11)

木聚糖酶 (3.2.1.8)

艾美捷Worthington 黑曲霉果胶酶的特性：

除了其高酶活性外，纯化的果胶酶还专门用于植物原生质体培养研究。使用定量测量D-半乳糖醛酸从多聚半乳糖醛酸中释放的方法测定酶。该方法基于使用盐酸新铜碱显色试剂测定法测定还原糖。当与 Worthington 纯化的纤维素酶一起使用时，已发现纯化的果胶酶可用于在几种植物系统（例如玉米、大豆、红甜菜、向日葵、番茄和柑橘）中产生良好产量的活原生质体。一般来说，浓度范围为 0.1% 至 0.5% 的果胶酶（伴随着 0.5% 至 1.5% 的纤维素酶）在 24°C 至 37°C 下使用 1 至 16 小时会产生良好的效果。

储存: 储存于 2-8°C。防潮。如果不一次使用整个瓶子，在到达时称重成一次性等分试样，并盖紧、干燥、冷藏保存。材料非常吸湿，如果暴露在湿气中会变得发粘且难以称重。

稳定性/储存： 防潮。如果不一次使用整个瓶子，在到达时称重成一次性等分试样，并在 2-8°C 下盖紧并干燥储存。材料非常吸湿，如果暴露在湿气中会变得发粘且难以称重。

单位定义：一个单位在 37°C、pH 5.0 下每分钟从聚半乳糖醛酸中释放 1µmole D-半乳糖醛酸。

技术说明：果胶酶具有极强的吸水性；储存干燥以防受潮。

艾美捷Worthington果胶酶的测定：

方法：在 37°C，pH 5.0 条件下，一个单位每分钟从聚半乳糖醛酸中释放 1 umole D-半乳糖醛酸。

试剂：

0.1 M 柠檬酸/磷酸盐缓冲液（测定缓冲液），pH 5.0

颜色试剂 A：将 40g 无水 Na 2 CO 3溶解 在 600 ml 试剂级 H 2 O 中。加入 16 g 甘氨酸并搅拌直至溶解。加入 0.450 gm CuSO 4 5H 2 O，搅拌至溶解。用试剂级 H 2 O 加至 1 升。

颜色试剂 B：将 1.2 g neocuprine - HCl 溶解在 1 升 H 2 O 级试剂中。在 4°C 下储存在棕色瓶中。

D-半乳糖醛酸标准品，1mg/ml

0.5% 聚半乳糖醛酸底物：

在热板上加热 500 ml 检测缓冲液。在加热和搅拌的同时，缓慢加入 2.5 gm 聚半乳糖醛酸。加热并搅拌直至溶解。它会有点粘稠和不透明。不要让溶液沸腾。如有必要，冷却并恢复音量。储存于 4°C。

酶：

每天化妆新鲜。将溶液放在冰上直至使用。在检测缓冲液中连续稀释至 0.01 mg/ml。

程序：

准备三个试管，每个试管含有 1 ml 缓冲液和 6 ml 底物（试剂空白）。准备三个试管，每个试管含有 6 ml 底物和 1 ml 0.1 mg/ml 的酶样品（测试）。准备三个试管，每个试管含有 6 ml 缓冲液和 1 ml 浓度为 0.1 mg/ml 的酶样品（样品空白）。

将试管在 37°C 水浴中孵育 60 分钟 ± 1 分钟。使用 10 μg 至 125 μg 的 D-半乳糖醛酸标准品将标准曲线管分装，一式三份。

试管孵育 60 分钟后，立即将支架放入冰水中以停止反应。从每管 100 μl 中分装到另一组管中（也在冰上）。向每个反应管和标准管中加入 2 ml Color Reagent A 和 2 ml Color Reagent B。倒置充分混合。将机架放入沸水浴中 13 分钟 ±1 分钟。冷却试管，然后加入 2ml H 2 O。倒置充分混合。使用一次性比色皿读取 A 450与水空白的吸光度。不要使用流通池；橙色附着在玻璃上。计算每组一式三份的平均吸光度。

计算：

绘制标准曲线：

计算变化率。曲线应该是线性的，直到 100 ug D-半乳糖醛酸，如果不是，用新鲜试剂重复曲线。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington果胶酶的特性及测定方案

艾美捷Worthington 胃蛋白酶是一种酸性蛋白酶。它的无活性酶原前体胃蛋白酶原在胃粘膜中产生。有几种胃蛋白酶被命名为 A、B、C 和 D。胃蛋白酶 A 是主要成分，其分子量为 35,000 道尔顿，如果底物是天然蛋白质，则底物如酪蛋白或血红蛋白的最适 pH 约为 1.0。胃蛋白酶优先在芳香族氨基酸（如苯丙氨酸和酪氨酸）的羧基处切割蛋白质。它不会在含有缬氨酸、丙氨酸或甘氨酸的键处断裂。基于 Anson J. Gen. Physiol., 22 , 79 (1938) 的方法使用血红蛋白作为底物测定胃蛋白酶。胃蛋白酶在 pH 值高于 6 时不稳定。

稳定性/储存： 胃蛋白酶在 2-8°C 下保存 1-2 年。

单位定义：一个单位在 37°C 下每分钟从变性血红蛋白中释放 0.001 A280 作为 TCA 可溶性水解产物。一个 FIP 单位，以 25°C 下每分钟释放的酪氨酸当量微摩尔数表示，可按如下方式计算：1 沃辛顿单位 x 0.0071 = FIP 单位。

艾美捷Worthington胃蛋白酶的应用：

抗体的消化

用于药妆目的的胶原蛋白的制备

食品化学中蛋白质消化率的评估

活的乳腺上皮细胞的继代培养 (Riser 1983)

艾美捷Worthington胃蛋白酶相关研究：

胶原酶 (CLS1-4/CLSPA)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

血红蛋白 (HB)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)

蛋白酶 K (PROK)

相关文献：

1.Absolon, K.： 使用白蛋白 I 131 (RIHSA) 测定蛋白水解和抗蛋白水解活性 ， Surg 论坛 5 , 543, 1954

2.Al -Janabi, J.、Hartsuck, J. 和 Tang, J.： 胃蛋白酶原活化的动力学和机制 ， J Biol Chem 247 , 4628, 1972

3.Anderson, W. 和 Harthill, J.： 胃蛋白酶原激活肽中的胃蛋白酶抑制活性 ， Nature 243 , 417, 1973

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington过氧化物酶活性的6种测定方法

过氧化物酶 (HRP) 是一种血红蛋白，可催化过氧化氢氧化多种底物，例如抗坏血酸盐、亚铁氰化物、细胞色素 c 和许多染料的无色形式。HRP 的分子量为 40 kDa，最适 pH 值为 7.0。稳定性：HPOFF 在 2-8°C 下可稳定 9-12 个月。HPOD 在 2-8°C 下可稳定 2 至 3 年。

单位定义：一个 Worthington 单位在 25°C、pH 7.0 下使用氨基安替比林和苯酚每分钟分解 1µmole H 2 O 2 。

技术说明：RZ (Reinheitzahl) 是吸光度比率，A 403 /A 275，已被用作纯度的指示。然而，Shannon et al., JBC, 241 , 266 (1966) 报道了同工酶的这个比率在 2.50 到 4.19 之间变化。这一点，连同缓冲液和 pH 值的影响，似乎使这个比率作为纯度标准的准确性受到质疑。

许多不同的方法用于过氧化物酶活性的测定。下面列出了由艾美捷Worthington确定的一些近似转换。

• 1 个 Worthington 单位 = 4.6 个 Worthington 以前使用的邻联苯胺单位

• 1 个 Worthington 单位 = 0.62 个 ABTS 单位（每分钟氧化的微摩尔染料，pH 6.0，25°C，1.7 mM 染料）

• 1 个 Worthington 单位 = 2 个 ABST 单位（ µmole 每分钟氧化的染料，pH 5.0，25°C，8.7 mM 染料）

• 1 Worthington 单位 = 0.5 愈创木酚单位（每分钟氧化愈创木酚的 µmole，pH 7.0，25°C）

• 1 Worthington 单位 = 0.5 连苯三酚到 purpogallin单位（mg 产品每 20 秒，pH 6.0，20°C）

• 1 Worthington 单位 = 5 连苯三酚到 purpogallin 单位（在 pH 6.0，30°C 下每分钟微摩尔产品）

艾美捷Worthington过氧化物酶的测定：

方法：传统上，过氧化物酶活性以连苯三酚的氧化速率为单位表示，这是 Willstalter 和 Stoll 在 1917 年引入的一种方法，最近的研究表明这种方法有些不足。（Maehly 和 Chance 1954。）在过氧化物酶测定系统中已经使用了多种氢供体，包括可能致癌的化合物，例如邻联茴香胺。采用 4-氨基安替比林作为氢供体的改进测定法已被采用（Trinder 1966）。反应速率通过测量过氧化氢分解引起的 510 nm 处吸光度的增加来确定。在指定条件下，在 25°C 和 pH 7.0 条件下，一个单位会导致每分钟分解 1 微摩尔过氧化氢。

试剂：

0.2 M 磷酸钾缓冲液 pH 7.0

0.0017 M 过氧化氢。用试剂级水将 1 ml 30% 过氧化氢（Merck Superoxol 或等效物）稀释至 100 ml。用 0.2 M 磷酸钾缓冲液 pH 7.0 将 1 ml 该溶液进一步稀释至 50 ml。每天准备新鲜。

0.0025 M 4-氨基安替比林和 0.17 M 苯酚：通过将 810 mg 苯酚溶解在 40 ml 试剂级水中进行制备。加入 25 mg 4-氨基安替比林并用试剂级水稀释至终体积为 50 ml。

酶：

以 1 mg/ml 溶解在试剂级水中。临用前，进一步稀释以获得 0.02-0.04 ΔA/min 的速率。

程序：

将分光光度计调整到 510 nm 和 25°C。

将移液器移入每个比色皿，如下所示：

苯酚/氨基安替比林溶液 1.4 毫升

0.0017 M过氧化氢 1.5 毫升

在分光光度计中于 25°C 孵育 3-4 分钟以达到温度平衡并确定空白率（如果有）。加入 0.1 ml 稀释酶并记录 A 510的增加4-5 分钟。从曲线的线性部分计算ΔA 510 /分钟。

计算：

注：虽然用苯酚安替比林法得到的反应速率比以前的方法低 4.5-4.7 倍，但过氧化物酶制剂是相同的。

RZ (Reinheitzahl) 是吸光度比，A 403 /A 275 (RZ) 已被用作纯度的指示。然而，香农等人。(1966) 报告说，同工酶的这个比率从 2.50 变化到 4.19。这一点，连同缓冲液和 pH 值的影响，似乎使这个比率作为纯度标准的准确性受到质疑。

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington酸性磷酸酶的特征和测定（附文献）

艾美捷 Worthington小麦胚芽酸性磷酸酶背景：

酸性磷酸酶在自然界中无处不在，也许最集中的来源之一是人类前列腺，临床化学家利用这一事实测量血清酶水平作为前列腺癌的指标。它还与戈谢病有关，患者在其电泳血清中表现出独特的峰（Goldberg等人1966）。酸性磷酸酶已由 Hollander (1971) 进行了综述，但不包括小麦胚芽酶。

Teller 于 1954 年在 Singer 于 1948 年描述的小麦胚芽脂肪酶制剂中观察到酸性磷酸酶活性。随后的工作证实，小麦胚芽制剂的非特异性酯酶活性可以用脂肪酶（作为底物的示踪素）和磷酸酶来测量.

该酶已被至少三个不同的实验室纯化并描述了其特性。Joyce 和 Grisolia (1960) 将其纯化了大约 3000 倍，并测量了它对各种磷酸酯的活性。Brouillard 和 Ouellet (1965) 通过离子交换获得了四种不同形式的酶，并提供了分子中存在三价铁的证据。Verjee (1969) 获得了三个活性峰，并表明它们具有各自的特性。

艾美捷 Worthington小麦胚芽酸性磷酸酶的特性：

分子量：55,000 ± 5,000 (Verjee 1969)。

组成： Verjee (1969) 报道了三种分子量非常相似的同工酶：EI、EII 和 EIII。另见 Brouillard 和 Ouellet (1965)。

最佳 pH 值：EI - 5.5、EII - 4.5 和 EIII - 4.0。（维吉 1969 年）。

特异性：该酶具有广泛的酯酶活性。参见乔伊斯和格里索利亚 (1960)。它显示出对焦磷酸的最高活性。

抑制剂：氟化物、钼酸盐和正磷酸盐（Verjee 1969）。

艾美捷 Worthington小麦胚芽酸性磷酸酶的测定：

方法：基于 Brandenberger 和 Hanson (1953) 和 Hofstee (1954) 的工作。磷酸邻羧基苯酯的初始水解速率是根据水杨酸释放引起的 300 nm 处吸光度的增加来确定的。在指定条件下，一个单元在 25°C、pH 5.0 下每分钟水解 1 微摩尔邻羧基苯基磷酸酯。（在上述条件下使用对硝基苯基磷酸酯底物获得了等效的比活性）。

试剂：

0.15 M 醋酸钠缓冲液，pH 5.0

3.65 mM 邻羧基苯基磷酸酯

酶：

以 1.0 mg/ml 的浓度溶解在试剂级水中。

程序：

将分光光度计调整到 300 nm 和 25°C。

将移液器移入每个比色皿，如下所示：

0.15 M 醋酸盐缓冲液，pH 5.0 2.0毫升

3.65 mM 邻羧基苯基磷酸酯 0.5 毫升

在分光光度计中孵育 3-4 分钟以达到温度平衡并确定空白率（如果有）。添加 0.5 ml 酶并在 A 300中记录增加 4-5 分钟。从曲线的初始线性部分计算 ΔA 300 /分钟。

计算：

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究，诊断，生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶，蛋白质，核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源：https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml