艾美捷测序级 II，纯化胰蛋白酶用途和相关研究方案

艾美捷测序级 II，纯化胰蛋白酶用途和相关研究方案

测序级 II，纯化胰蛋白酶背景：

胰蛋白酶是一种胰丝氨酸蛋白酶，基于带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链，具有底物特异性。它来源于34kDa的无活性前体酶原胰蛋白酶原，在酶促去除N-末端6-氨基酸前导序列后产生23.8kDa胰蛋白酶分子。最适pH为8.0。胰蛋白酶被有机磷化合物如二异丙基氟磷酸盐和来自胰腺的天然抑制剂抑制。大豆、利马豆和蛋清也是天然抑制剂的来源。胰蛋白酶裂解精氨酸和赖氨酸的酰胺和酯键。沃辛顿测序级胰蛋白酶已被进一步纯化，以去除可能干扰胰蛋白酶消化实验的微量污染蛋白酶和自溶产物，并在PAGE上显示出单一条带。

艾美捷测序级 II，纯化胰蛋白酶用途：

在组织培养工作中，许多研究人员使用了沃辛顿胰蛋白酶，TRSEQZ、TRSEQII和TRTPCK通常用于蛋白质测序、定位和结构研究。沃辛顿改良测序级胰蛋白酶，SequeENZ™,TRSEQZ经过广泛纯化以去除可能影响消化过程特异性的污染蛋白酶和胰蛋白酶自溶副产物。随后，对酶进行化学修饰以最小化自溶过程并增加稳定性。进一步处理改性的胰蛋白酶以去除残留的自降解产物。化学修饰后，常规检查酶的特异性。

稳定性/储存：大多数等级的沃辛顿胰蛋白酶在2-8°C下储存时可稳定2-3年。防止受潮。

注：1mg胰蛋白酶≥180个TAME单位，10350个BAEE单位，3450个USP/NF单位。

TAME单元：一个单元在25°C，pH 8.2，10mM钙存在下，每分钟水解1µmol对甲苯磺酰基-L-精-氨-酸甲酯（TAME）。

技术说明：病毒和支原体游离胰蛋白酶（TRTVMF）已通过0.22微米孔径的膜过滤，冻干，接受γ射线照射，并测试病毒和支菌体。

艾美捷测序级 II，纯化胰蛋白酶相关研究：

糜蛋白酶（CDAG/CDS/CDI）

胶原酶（CLS1-4/CLSPA）

脱氧核糖核酸酶I（DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF）

透明质酸酶（HSE/HSEP）

中性蛋白酶（Dispase，NPRO）

蛋白酶K（PROK）

胰蛋白酶抑制剂（LBI/OI/SI/SIC）

细胞分离优化系统（CIT）

肝细胞分离系统（HIS）

新生儿心肌细胞隔离系统（NCIS）

木瓜蛋白酶解离系统（PDS/PDS2）

来源：https://www.amyjet.com/products/WBC-LS02115.shtml

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艾美捷测序级 II，纯化胰蛋白酶化验程序&文献参考

胰蛋白酶是一种基于带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链的底物特异性胰丝氨酸蛋白酶（Brown and Wold 1973）。这种酶由胰腺排出，参与食物蛋白质的消化和其他生物过程。胰蛋白酶是一种中等大小的球状蛋白，作为一种无活性的胰蛋白酶原产生（Chen等人，2009）。

艾美捷测序级 II，纯化胰蛋白酶特异性：

胰蛋白酶在赖氨酸和精氨酸氨基酸残基的C端侧切割肽。如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧，则不会发生切割。如果酸性残基位于裂解位点的任一侧，则水解速率已显示较慢。

艾美捷测序级 II，纯化胰蛋白酶化验程序：

将分光光度计设置在247 nm和25°C。

按如下方式将移液管移到每个反应杯中：

0.046万Tris⋅盐酸缓冲液，pH 8.1 2.6 ml

0.01 M TAME 0.3毫升

在25°C的分光光度计中孵育3-4分钟，以达到温度平衡，并建立空白率（如有）。添加0.1 ml稀释酶并记录A247 3-4分钟。根据曲线的初始线性部分确定ΔA247。反应保持线性至A247为约0.320。反应应线性至少三分钟。如果不是这样，重复使用较少的酶。

计算：其中540是对甲-苯-磺-酰基-L-精-氨-酸在247nm处的消光系数

艾美捷测序级 II，纯化胰蛋白酶相关文献：

Arakawa, T. , Hung, L. , McGinley, M. , Rohde, M. and Narhi, L.

Induced Resistance of Trypsin to Sodium Dodecylsulfate upon Complex Formation with Trypsin Inhibitor , J Protein Chem 11 , 171 , 1992

Arentoft, A. , Frokiaer, H. , Michaelsen, S. , Sorensen, H. and Sorensen, S.

High-performance Capillary Electrophoresis for the Determination of Trypsin and Chymotrypsin Inhibitors and Their Association with Trypsin, Chymotrypsin and Monoclonal Antibodies , J Chromatogr A 652 , 189 , 1993

相关研究：

SequENZ® Trypsin, Modified, Sequencing Grade  LS02120

SequENZ® Trypsin, Modified, Sequencing Grade, Solution  LS02150

Trypsin, Purified, Sequencing Grade II  LS02115

Trypsin, TPCK Treated  LS003740

Trypsin   LS003708

来源：https://www.amyjet.com/products/WBC-LS02115.shtml

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高纯度高活性艾美捷人重组MEGACD40L蛋白（可溶性）

艾美捷人重组MEGACD40L蛋白（可溶性）：高活性、高纯度CD40L蛋白，用于免疫应答的共刺激激活。

艾美捷人重组MEGACD40L蛋白（可溶性）特点：

1、高活性MEGACD40L®低聚物模拟体内膜辅助CD40L聚集和刺激，无需增强剂

2、高纯度，低内毒素水平

3、经验丰富的制造可实现一致可靠的批量性能

4、优化配方，提高稳定性和活性

艾美捷人重组MEGACD40L蛋白（可溶性）化学性质：

来源：CHO细胞产生。人CD40L（CD154）（aa 116-261）的胞外结构域在N端与小鼠ACRP30无头（aa 18-111）和FLAG®标签融合。

UniProt ID:P29965（人CD40L），Q60994（小鼠脂联素）

浓度：重构后0.1mg/ml。

配方：冻干。包含PBS。

纯度：≥90%（SDS-PAGE）

纯度细节：通过多步色谱纯化。

内毒素含量：≤0.01EU/µg纯化蛋白（LAL试验；Cape Cod Associates）。

生物活性：与人CD40结合。诱导B细胞活化（如CD86的剂量依赖性上调所示）。

应用说明：可用于介导免疫和炎症反应，作为免疫治疗临床前研究的蛋白质工具，用于监测化疗患者并模拟体内自身免疫表型。

重组：用100µl无菌水重组。应使用含有5%胎牛血清的培养基进一步稀释。

运输：蓝冰运输

长期储存：-20°C

使用/稳定性：在-20°C下储存，至少稳定6个月。

处理：避免冷冻/解冻循环。重构后，制备等分试样并在-20°C下储存。

RUO-仅供研究使用

图：PBMC（外周血单核细胞）在37°C、5%CO2条件下，在48孔板（每孔1 x 106个细胞）中孵育48小时，48孔板含有200µl无血清测试培养基和连续稀释的MEGACD40L®（产品编号ALX-522-110）、CD40L（编号ALX-522-015）或CD40L+2µg/ml增强剂（产品编号：ALX-804-034）。处理后，用PBS+1%BSA洗涤细胞3次。用小鼠抗人CD19（PE偶联物）和小鼠抗人CD 86（APC偶联物）在4℃下对细胞进行双重染色2小时。用PBS+1%BSA洗涤细胞2次，然后重新悬浮在PBS中。在BD Facs Calibur流式细胞仪上分析样品。数据以每种浓度下CD86阳性细胞/CD19阳性B细胞的百分比表示。

来源：https://www.amyjet.com/products/ALX-522-110-C010.shtml

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艾美捷人重组MEGACD40L蛋白（可溶性）实例展示

艾美捷人重组MEGACD40L蛋白（可溶性）是一种高活性蛋白质，其中两个三聚体CD40配体分子通过脂联素/ACRP30/AdipoQ的胶原结构域人工连接。这种蛋白质非常有效地模拟体内CD40L的自然膜辅助聚集。

艾美捷人重组MEGACD40L蛋白（可溶性）特点：

1、高活性MEGACD40L®低聚物模拟体内膜辅助CD40L聚集和刺激，无需增强剂

2、高纯度，低内毒素水平

3、经验丰富的制造可实现一致可靠的批量性能

4、优化配方，提高稳定性和活性

图2：使用1000ng/mL的B细胞活化试验对连续7个生产批次的MEGACD40L®进行测试。图1：通过MEGACD40L®（ALX-522-110）激活B细胞淋巴细胞。方法：将外周血单核细胞（PBMC）在37°C、5%CO2下在48孔板（1 x 106个细胞/孔）中孵育48小时。每个孔含有200µl无血清测试培养基和连续稀释的MEGACD40L®。处理后，清洗细胞，用小鼠抗人CD19–PE和小鼠抗人CD 86–APC双重染色，并通过流式细胞术进行分析。数据以每种MEGACD40L®浓度下共染色为CD86阳性的CD19阳性B细胞的百分比表示。

艾美捷人重组MEGACD40L蛋白（可溶性）参考文献：

An optimized measles virus glycoprotein-pseudotyped lentiviral vector production system to promote efficient transduction of human primary B cells: E. Vamva, et al.; STAR Protoc. 3, 101228 (2022), Abstract;

In vitro 2D and 3D cancer models to evaluate compounds that modulate macrophage polarization: N.H. Madsen, et al.; Cell. Immunol. 378, 104574 (2022), Abstract;

Inverse Regulation of Confluence-Dependent ADAMTS13 and von Willebrand Factor Expression in Human Endothelial Cells: M. Popa, et al.; Thromb. Haemost. (2021), Abstract;

Quantitative assessment of NFκB transcription factor activity: T.J. Hunter, et al.; J. Immunol. Methods 2021, 112954 (2021), Abstract;

T and B cell abnormalities, pneumocystis pneumonia, and chronic lymphocytic leukemia associated with an AIOLOS defect in patients: H.S. Kuehn, et al.; J. Exp. Med. 218, e20211118 (2021), Abstract;

来源：https://www.amyjet.com/products/ALX-522-110-C010.shtml

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艾美捷C1q天然蛋白化学性质和相关研究方案

艾美捷C1q天然蛋白背景：

C1q是补体系统C1的第一组成成份。它是一个巨分子量 (460kD) 糖蛋白。一个C1q分子由18条多肤链组成,含A、B、C 3条不同链。补体系统通过经典途径、旁路途经和甘露糖结合凝集素途径激活，而C1q是补体经典途径重要的启动分子，通过识别IgG或IgM免疫复合物中抗体Fc段的补体结合部位启动并激活补体的级联反应，清除抗原抗体复合物。

人补体蛋白C1q与C1r和C1s一起形成C1大分子，这是经典补体途径的第一个组成部分。免疫复合物与C1q的相互作用诱导C1复合物内的构象变化，这导致经典途径的激活。C1q通过结合IgG或IgM的重链（Fcγ。此外，C1q可以与凋亡泡结合，在那里它激活经典补体途径并介导吞噬作用。因此，C1q促进凋亡细胞的清除和随后自身抗原的暴露，从而防止免疫系统的刺激。

C1q主要由巨噬细胞产生，但也由滤泡树突状细胞、交叉指状细胞和单核细胞-巨噬细胞谱系的细胞产生。C1q缺乏对宿主防御和清除免疫复合物有深远影响。C1q的缺失可能通过损害凋亡细胞的清除而引起自身免疫。遗传性C1q缺乏也与系统性红斑狼疮（SLE）的发生有关。

艾美捷C1q天然蛋白化学性质:

规格：1 mg

类型：蛋白质

物种：人类

配方：从健康献血者分离的约1mg/ml纯化天然人C1q制剂，溶于10mM HEPES、300mM NaCl、pH 7.2中。对献血者进行了各种病毒检测，结果呈阴性。功能活动在标签上标明。

用途：对于功能性研究，体外稀释必须在用户的实验环境中进行优化。

应用：功能研究

应用说明：C1q的生物活性定义为产生50%致敏红细胞（EA）裂解所需的C1q量。

储存和稳定性：在-70°C下储存。反复的冷冻和解冻循环将导致活性丧失。标签上标明了确切的有效期。解冻后24小时内使用C1q蛋白，并放在冰上。剩余金额应等分并立即重新冻结以备将来使用。等分试样不得多次解冻。在推荐的储存条件下，至少稳定一年。

仅供研究使用。不用于人体或动物或诊断。

艾美捷C1q天然蛋白相关研究：

C1q, Mouse, ELISA kit

C1q, Mouse, mAb 7H8

C1q, Mouse, mAb JL-1

C1q, Human, ELISA kit

C1q, Mouse, mAb 7H8

C1q, Mouse, mAb JL-1, biotinylated

C1q, Mouse, mAb JL-1, FITC

C1q, Rat, pAb

来源：https://www.amyjet.com/products/HC2123.shtml

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艾美捷C1q天然蛋白中英文说明书

Human complement protein C1q forms together with C1r and C1s the C1 macromolecule, the first component of the classical complement pathway. Interaction of immune complexes with C1q induces a conformational change within the C1 complex, which results in activation of the classical pathway. C1q functions as recognition unit by binding to the heavy chain of IgG or IgM (Fc gamma and Fc micro) provided that the immunoglobulins are bound to their antigen. Furthermore, C1q can bind to apoptotic blebs, where it activates the classical complement pathway and mediates phagocytosis. As such, C1q promotes the clearance of apoptotic cells and subsequent exposure of auto antigens, thereby preventing stimulation of the immune system.

C1q is predominantly produced by macrophages but also by follicular dendritic cells, interdigitating cells and cells of the monocyte-macrophage lineage. C1q deficiency has a profound effect on host defence and clearance of immune complexes. Absence of C1q may cause autoimmunity by impairment of the clearance of apoptotic cells. Inherited C1q deficiency is also associated with the development of systemic lupus erythematosus (SLE).

C1q蛋白家族由众多含C1q结构域的蛋白组成, 从细菌到高等哺乳动物中都有分布。这类蛋白由一条信号肽、胶原样区(Collage-like region, CLR)和C1q球状结构域(Globular C1q domain, gC1q)组成。C1q蛋白家族根据其结构特点, 可分为三大类分子：C1q、C1q-like和ghC1q。C1q是补体经典途径的起始分子, 能够识别免疫复合物, 启动补体系统经典途径; 此外, 作为一种模式识别受体分子(Pattern recognition receptor, PRR), 它可以结合种类繁多的配体。

人补体蛋白C1q与C1r和C1s一起形成C1大分子，这是经典补体途径的第一个组成部分。免疫复合物与C1q的相互作用诱导C1复合物内的构象变化，这导致经典途径的激活。C1q通过结合IgG或IgM的重链（Fcγ。此外，C1q可以与凋亡泡结合，在那里它激活经典补体途径并介导吞噬作用。因此，C1q促进凋亡细胞的清除和随后自身抗原的暴露，从而防止免疫系统的刺激。

艾美捷C1q天然蛋白化学性质:

中文名称：C1q，人类，天然，1毫克

英文名字：C1q, Human, Natural, 1 mg

编号：HC2123

规格：1mg

用途：对于功能性研究，体外稀释必须在用户的实验环境中进行优化。

应用说明：C1q的生物活性定义为产生50%致敏红细胞（EA）裂解所需的C1q量。

储存和稳定性：在-70°C下储存。反复的冷冻和解冻循环将导致活性丧失。标签上标明了确切的有效期。解冻后24小时内使用C1q蛋白，并放在冰上。剩余金额应等分并立即重新冻结以备将来使用。等分试样不得多次解冻。在推荐的储存条件下，至少稳定一年。

仅供研究使用。不用于人体或动物或诊断。

艾美捷C1q天然蛋白相关研究：

C1q，小鼠，ELISA试剂盒

C1q，小鼠，单抗7H8

C1q，小鼠，单抗JL-1

C1q，人，ELISA试剂盒

C1q，小鼠，单抗7H8

C1q，小鼠，单抗JL-1，生物素化

C1q，小鼠，单抗JL-1，FITC

C1q，大鼠，pAb

来源：https://www.amyjet.com/products/HC2123.shtml

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胆固醇方案丨艾美捷Cholesterol胆固醇相关研究

胆固醇主要来自人体自身的合成，食物中的胆固醇是次要补充。它是一种环戊烷多氢菲的衍生物。化学式为C27H46O。为白色或淡黄色结晶，是哺乳动物中主要的甾体类化合物，在基本的细胞生命活动中起到重要作用。

胆固醇的化学性质：

一般，脂类物质主要分为两大类。脂肪（主要是甘油三酯）是人体内含量最多的脂类，是体内的一种主要能量来源；另一类叫类脂，是生物膜的基本成分，约占体重的5%，除包括磷脂、糖脂外，还有很重要的一种叫胆固醇(cholesterol)。

胆固醇在血液中存在于脂蛋白中，其存在形式包括高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇几种。在血中存在的胆固醇绝大多数都是和脂肪酸结合的胆固醇酯，仅有10%不到的胆固醇是以游离态存在的。高密度脂蛋白有助于清除细胞中的胆固醇，而低密度脂蛋白超标一般被认为是心血管疾病的前兆。血液中胆固醇含量每单位在140~199毫克之间，是比较正常的胆固醇水平。

胆固醇是由甾体部分和一条长的侧链组成。人体中胆固醇的总量大约占体重的0.2%，每100克组织中，骨质约含10毫克，骨骼肌约含100毫克，内脏多在150~250毫克之间，肝脏和皮肤含量稍高，约为300毫克。脑和神经组织中含量最高，每100克组织约含2克，其总量约占全身总量的1/4。

艾美捷Cholesterol胆固醇是哺乳动物细胞中产生的一种主要甾醇，是细胞存活和增殖所必需的。它是哺乳动物细胞膜的一种成分，与膜磷脂、鞘脂和蛋白质相互作用，影响它们的行为。它也是各种基于脂质的药物递送（LBDD）系统的组成部分，包括脂质体和脂质纳米粒子（LNP），在膜稳定性方面发挥作用。

艾美捷Cholesterol胆固醇是类固醇激素、胆汁酸和维生素D活性形式的前体。胆固醇稳态受损与各种疾病的发展有关，包括脂肪肝、糖尿病、胆结石、血脂异常、动脉粥样硬化、心脏病和中风。{此品不供人类或兽医使用。}

艾美捷Cholesterol胆固醇技术参数：

正式名称：（3β）-胆甾-5-烯-3-醇

CAS号：57-88-5

同义词：维生素原D

分子式：C27H46O

纯度：≥95%

配方：A固体

溶解度：氯-仿：30 mg/ml

存储：-20°C

稳定性：≥ 4年

来源：https://www.amyjet.com/products/9003100-100.shtml

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高纯度艾美捷Cholesterol胆固醇参数介绍

Cholesterol胆固醇是哺乳动物中主要的甾体类化合物,在基本的细胞生命活动中起到重要作用。

艾美捷Cholesterol胆固醇基本参数：

中文名称：胆固醇

英文名字：Cholesterol

编号：9003100-100

规格：100g

CAS号：57-88-5

正式名称：（3β）-胆甾-5-烯-3-醇同义词：NSC 8798，Provitamin D MF:C27H46O

纯度：≥95%

供应形式：A固体

储存：-20°C

稳定性：≥4年

艾美捷Cholesterol胆固醇以固体形式提供。可以通过将胆固醇溶解在所选择的溶剂中来制备储备溶液，该溶剂应使用惰性气体吹扫。胆固醇以约30mg/ml的浓度溶于有机溶剂氯-仿中。

艾美捷Cholesterol胆固醇相关研究：

27058  Squalene

11097  25-hydroxy Cholesterol

11636  Amphotericin B

89355  22(R)-hydroxy Cholesterol

9003101  Cholestanol

90210  α-Linolenic Acid

34337  ALC-0315

34364  DLin-MC3-DMA

33945  DMG-PEG(2000)

27058角鲨烯

11097 25羟基胆固醇

11636两性霉素B

89355 22（R）-羟基胆固醇

9003101胆甾醇

90210α-亚麻酸

来源：https://www.amyjet.com/products/9003100-100.shtml

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艾美捷NCTC-135培养基改良版（粉末）相关研究和类别

细胞培养基是生物制药生产的最关键原材料之一，是人工模拟细胞在休内生长的营养环境，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养基主要也括有血清培养基、无血清细胞培养基、化学限定培养基。

无血清细胞培养基的发明是培养基发展史的一个里程碑。无血清培养基是向基础培养基中添加血清替代物，既满足动物细胞的营养需求，又能有效避免使用血清而引发的一系列问题，为无血清培养技术的发展奠定了基础。

尽管牛血清( FBS) 作为细胞培养基的必需添加因子而广泛使用，它提供细胞在体外培养贴附生长和增殖所必需的营养因子，但近几年来对血清的生产使用存在道德和科学上的诸多争议，并且牛血清的使用存在诸多缺点和风险。经过研究者们的不懈努力，后来摸索出了一些降低或替代血清的策略，研发出了一系列低血清和无血清培养基供动物细胞和组织培养使用，尽可能避免血清的缺点和风险。

Vander等用激素替代牛血清刺激特定细胞分化生长的工作，开辟了化学界定无血清培养基的发展开端。无血清化学限定培养基的设计和优化是Vero细胞无血清培养技术的关键。

艾美捷NCTC-135培养基改良版（粉末）相关研究：

品名：NCTC 135培养基，改良，培养基

不适用于诊断程序。

酸碱度：5.5 ± 1.0

准备和储存：RT/4℃

其他注意事项：在装运和储存过程中，少量NCTC 135培养基、改良培养基小瓶偶尔会被产品小瓶的密封圈夹住。如有必要，在台式离心机上短暂离心小瓶，以清除容器盖中的任何液体。

艾美捷NCTC-135培养基改良版（粉末），由马里兰州贝塞斯达国家癌症研究所（NCI）生物学实验室组织培养科开发，用于建立和维持L929小鼠细胞株。

艾美捷NCTC-135培养基改良版（粉末）类别：Culture Media; Media-Cell Culture

相关研究：

SYNGR1抗体

RPL22-L1（RPL22L1）抗体

胍基乙酸N-甲基转移酶（GAMT）抗体

ACY1重组蛋白

CHRNA2抗体

来源：https://www.amyjet.com/products/MBS652786.shtml

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艾美捷Cas9核酸酶参数说明和应用

CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。CRISPR/Cas9系统通过将入侵噬菌体和质粒DNA的片段整合到CRISPR序列中，并利用相应的CRISPR RNAs （crRNAs）来指导Cas9蛋白对同源序列的降解，从而提供免疫性。人工改造过的Cas9/sgRNA系统通过sgRNA（short guide RNA）引导Cas9蛋白识别并剪切带有sgRNA靶点的双链DNA，可用于基因敲除和精确编辑DNA等操作。

艾美捷Cas9核酸酶：在大肠杆菌中表达的重组化脓链球菌Cas9（wt）蛋白。

艾美捷Cas9核酸酶化学性质：

形式：液体

制备方法：E。大肠杆菌表达系统

纯度：≥ SDS-PAGE检测95%

活性：20 nM CRISPR/Cas9-C-NLS核酸酶在37℃下孵育1小时，通过琼脂糖凝胶电泳测定，底物DNA的消化率为90%。

推荐用法：CRISPR基因组编辑

最佳工作稀释度应由最终用户确定。

储存缓冲液：10 mM Tris、300 mM NaCl、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、50%甘油PH 7.4

储存说明：储存于-20°C。

等分试样以避免反复冷冻和解冻。

艾美捷Cas9核酸酶应用：

1、CRISPR Genomic

2、EditingElectrophoresis

图：用Cas9核酸酶进行电泳DNA切割试验。输入DNA是EcoRV线性化的pUC57质粒DNA。（1） DNA+gRNA（2）DNA+gRNA+10 ng Cas9（3）DNA+gRNA+25 ng Cas9

来源：https://www.amyjet.com/products/P7051.shtml