VitroCol，人去端胶原溶液：优质胶原溶液的应用探索

VitroCol，人去端胶原溶液：优质胶原溶液的应用探索

VitroCol是一种优质的人去端胶原溶液，被广泛应用于细胞培养实验中的涂层技术。其独特的特性使其成为研究人员在体外细胞实验中的首选之一。本文将探讨VitroCol的特点以及其在细胞培养中的重要应用。

VitroCol是一种来源于人体的去端胶原溶液，具有优异的生物相容性和生物活性。在细胞培养实验中，通过将细胞培养皿或培养器皿涂覆VitroCol溶液，可以为细胞提供一个天然、生物相似的基质环境，促进细胞黏附、增殖和分化。

VitroCol的涂层技术在细胞培养研究中具有重要意义。通过控制VitroCol的浓度和涂覆条件，研究人员可以调节细胞与基质之间的相互作用，模拟体内环境，从而更好地理解细胞生物学行为和疾病机制。

此外，VitroCol涂层还可用于特定细胞类型的培养和研究。例如，在肿瘤细胞的体外培养中，使用VitroCol涂层可以模拟肿瘤微环境，有助于研究肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移机制。

艾美捷VitroCol，人去端胶原溶液（ABM-5007-20ML）涂层程序说明：请将以下建议作为指导，以确定您培养系统的合适涂层条件。

1. 从瓶中取出所需量的胶原蛋白，放入稀释容器中。

2. 将VitroCol®稀释至约50至100 µg/ml（约1:30）的水中。也可以使用0.01N盐酸溶液。

3. 轻轻搅拌混合物，直到完全混合。

4. 向培养表面添加适量稀释后的VitroCol®材料，确保整个表面都被涂层。

5. 在室温下盖好，孵育1-2小时。吸去任何剩余材料。或者，保持在室温下，直到表面干燥。

6. 孵育后，吸去任何剩余材料。

7. 用无菌培养基或PBS仔细冲洗涂层表面，避免划伤表面。

8. 涂层表面已经可以使用。如果保持无菌状态，也可以在2-8°C潮湿或风干保存。

储存/稳定性：

存放在2-10摄氏度，并在冷冻胶冻包装中发货。不要冷冻。产品标签和每个特定批次的分析证书上列有过期日期。当产品按照指示进行处理和存储时，过期日期有效。注意事项和免责声明本品仅供研发使用，不适用于人类或其他用途。请查阅有关危害和安全操作规程的材料安全数据表。

VitroCol，人去端胶原溶液作为一种优质的人去端胶原溶液，在细胞培养领域具有广泛的应用前景。通过合理使用VitroCol涂层技术，研究人员可以更深入地探究细胞生物学、疾病机制等领域，为医学研究和生物技术发展提供重要支持。

https://www.amyjet.com/products/ABM-5007-20ML.shtml

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Advanced BioMatrix丨HyStem巯基改性透明质酸使用说明

HyStem巯基改性透明质酸基于交联巯基修饰透明质酸技术。透明质酸是存在于结缔组织、上皮组织和神经组织的胞外基质中的天然成分。通过HyStem®，研究人员可以创建可定制的3D水凝胶，用于培养细胞，其自然环境富含透明质酸。HyStem®水凝胶套装包括：- Glycosil®（巯基修饰透明质酸）- Extralink®-Lite（PEGDA，聚乙二醇丙烯酸二丙烯酯）- 重组缓冲液（PBS）HyStem®套装组分混合后形成透明水凝胶。除了重组缓冲液外，其余组分均以冻干固体包装，被氮气包裹并在轻微真空下长期储存。

艾美捷HyStem巯基改性透明质酸（ABM-GS310F）细胞附着：

HyStem®水凝胶系统提供了一种可变刚度的粘弹性基质，支持干细胞的扩张（迄今已测试了人类胚胎干细胞、CD34+和肝细胞前体细胞）。HyStem®水凝胶不支持表面细胞附着。细胞必须被封装在水凝胶内。细胞外基质（ECM）蛋白或肽可以与Glycosil在交联之前混合，以提供附着信号，并允许细胞附着在水凝胶表面。然而，添加的ECM蛋白类型取决于细胞类型和期望的结果（扩张而无分化或伴随分化）。Hystem®-C和Hystem®-HP套装支持细胞附着，可在AdvancedBioMatrix.com上找到。

储存Glycosil：储存在-20°C，可保存一年。重组溶液必须在同一天使用，不能重新冷冻。Extralink-Lite：储存在-20°C，可保存一年。重组溶液可在-20°C保存一个月。重组缓冲液：储存在4°C或室温，可保存一年。

HyStem巯基改性透明质酸使用说明：

Glycosil和Extralink-Lite溶液通过用重组缓冲液溶解冻干固体来准备。重组后，Glycosil和Extralink-Lite将在pH约为7.4的1X磷酸盐缓冲液（PBS）中。按照说明重组后，套装将能够产生2.5、7.5或12.5毫升的材料以形成3D水凝胶。1）让套装组分室温恢复1小时。2）使用注射器和针头用重组缓冲液重组套装组分。如果在重组过程中移除瓶塞，请尽量减少暴露在氧气中，以避免潜在的自交联。3）在加入重组缓冲液后，立即将每个小瓶涡旋几秒钟。将小瓶水平放置在摇床或摇床上。每隔15分钟快速涡旋样品。有些组分可能需要>2小时才能完全溶解。加热至37°C并轻轻涡旋将加速溶解。组分将变清澈且略带黏稠。4）将Extralink-Lite以1:4的体积比例加入到Glycosil中形成3D水凝胶。1. - 对于2.5毫升和7.5毫升套装：0.25毫升Extralink-Lite到1.0毫升Glycosil，对于2.5毫升和7.5毫升套装- 对于12.5毫升套装：2.5毫升Extralink-Lite到10.0毫升Glycosil2. 用移液器混合。3. 如果封装细胞，请在加入Extralink-Lite之前将细胞沉淀重悬于Glycosil溶液中。来回移液以混合。4. 将所有组分混合后，等待5分钟，然后再次用移液器混合以确保细胞均匀分布。5）将HyStem注入所需的培养皿。凝胶化将在约15分钟内开始，完全凝胶化将在约90分钟内发生。

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Advanced BioMatrix丨CDH13，人，重组使用指南

CDH13基因编码了cadherin超家族的一员。编码的蛋白质定位于细胞膜表面，并由GPI基团锚定，而不是通过跨膜结构域。该蛋白缺乏其他cadherins特有的细胞质域，因此不被认为是细胞间粘附糖蛋白。这种蛋白在神经分化过程中作为轴突生长的负调节因子。它还保护血管内皮细胞免受由氧化应激引起的凋亡，并与对动脉粥样硬化的抵抗力相关联。该基因在许多类型的癌症中存在高甲基化。人类CDH13基因的全长细胞外结构域（139-693个氨基酸）带有31个N末端T7/His标记，在大肠杆菌中表达为包涵体。最终产物通过我们独特的“温度转移包涵体重折叠”技术重新折叠，并经过色谱纯化。

艾美捷CDH13，人，重组，0.5 mg/ml，0.1 mg（ABM-5125-0.1MG）使用说明：

请按以下建议作为指南，确定您的培养系统的合适涂层条件。

1. 解冻CDH13并使用无血清培养基或PBS稀释至所需浓度。最终溶液应稀释足够，使添加的体积均匀覆盖表面。

2. 向培养表面添加适量稀释后的物质。

3. 在室温孵育约1-2小时。

4. 吸去剩余物质。

5. 小心用去离子水冲洗培养皿-避免刮伤底部表面。

6. 培养皿已经可以使用。如果保持无菌状态，它们也可以在2-8°C潮湿或风干保存。

本产品仅供研发使用，不适用于人类或其他用途。请查阅材料安全数据表以获取有关危害和安全操作规范的信息。

注意：在神经元特异培养基中以1-10微克/孔（6孔培养皿）涂覆这种重组蛋白，可用于1）人类神经元细胞和血管内皮细胞/受体相互作用研究，或2）用于体外人类神经元和血管内皮细胞/受体相互作用。

CDH13，人，重组文献参考：

(1) Ivanov, D., et al. Cell adhesion molecule Tcadherin regulates vascular cell adhesion, phenotypeand motility Exp. Cell Res. 293 (2), 207-218 (2004).

(2) Andreeva, A.V., et al. T-cadherin modulatesendothelial barrier function. J. Cell. Physiol. 223 (1),94-102 (2010).

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CD274，人，重组：细胞膜蛋白的功能研究

人类CD274（程序性细胞死亡1配体1）是一种参与共刺激信号的细胞膜蛋白，对T细胞增殖和IFNG产生至关重要，并且以一种与PDCD1无关的方式发挥作用。与PDCD1的相互作用通过阻断细胞周期进展和细胞因子产生来抑制T细胞增殖。最近的数据表明，表达PDL1的癌细胞通过抑制表达PD1的免疫效应细胞促进肿瘤进展。此外，PDL1在传染病环境中调节细胞介导的免疫应答。重组人类CD274细胞外结构域cDNA（19-238个氨基酸，源自BC074984）经过密码子优化构建，并在其N末端与一个小T7-His-TEV裂解位点标签（29个氨基酸）融合表达为包涵体。最终产物通过我们独特的“温度转移包涵体重折叠”技术重新折叠，并经过色谱纯化。

艾美捷CD274，人，重组，0.5 mg/ml，0.1 mg（ABM-5126-0.1MG）使用说明：

请按以下建议作为指南，确定您的培养系统的最佳涂层条件。

1. 解冻CD274并使用无血清培养基或PBS稀释至所需浓度。最终溶液应稀释足够，使添加的体积均匀覆盖表面。

2. 向培养表面添加适量稀释后的物质。

3. 在室温孵育约1-2小时。

4. 吸去剩余物质。

5. 小心用去离子水冲洗培养皿-避免刮伤底部表面。

6. 培养皿已经可以使用。如果保持无菌状态，它们也可以在2-8°C潮湿或风干保存。

应用说明：本产品仅供研发使用，不适用于人类或其他用途。请查阅材料安全数据表以获取有关危害和安全操作规范的信息。

注意：在特定培养基中以每孔5-10微克（6孔培养皿）涂覆这种重组蛋白，可用于1）人类T和B细胞的激活/分化研究，或2）作为体外感染性疾病的潜在生物标志蛋白，或3）用于自身免疫疾病诊断开发。

CD274，人，重组文献参考：

(1) Shoba Amarnath et al., The PDL1-PD1 AxisConverts Human Th1 Cells into Regulatory T Cells. SciTransl Med 3, 111ra120 (2011)

(2) Yang, J., et al., The novel costimulatoryprogrammed death ligand 1/B7.1 pathway is functionalin inhibiting alloimmune responses in vivo. J. Immunol.187 (3), 1113-1119 (2011)

(3) Cao,Y., et al,. Immunoregulatory molecule B7-H1(CD274) contributes to skin carcinogenesis. CancerRes. 71 (14), 4737-4741 (2011)

(4) Trabattoni,D., et al., B7-H1 is up-regulated inHIV infection and is a novel surrogate marker ofdisease progression. Blood 101 (7), 2514-2520(2003)

https://www.amyjet.com/products/ABM-5126-0.1MG.shtml

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CD270，人，重组在细胞培养涂层中的应用研究

人类肿瘤坏死因子受体超家族成员14（TNFRSF14，CD270）基因编码的蛋白是TNF受体超家族的成员之一。该受体被确定为单纯疱疹病毒（HSV）进入细胞的细胞介质。已经证明HSV病毒包膜糖蛋白D（gD）与该受体蛋白的结合是病毒进入机制的一部分。发现该受体的细胞质区域能够结合几种TRAF家族成员，这可能介导激活免疫应答的信号转导途径。重组人类CD270细胞外结构域cDNA（39-202个氨基酸）经过密码子优化构建，带有一个小的T7-His-TEV裂解位点标记（29个氨基酸）融合在其N端，并在大肠杆菌中表达为包涵体。最终产品通过我们独特的“温度转移包涵体重折叠”技术进行重折叠并经过层析纯化。

艾美捷CD270，人，重组，0.5 mg/ml，0.1 mg（ABM-5127-0.1MG）使用说明：

请按照以下建议作为指导，确定适合您培养系统的最佳涂层条件。

1. 解冻CD270 并使用无血清培养基或PBS 将其稀释至所需浓度。最终溶液应稀释足够，以便涂覆表面均匀。

2. 将适量稀释后的物质加入培养表面。

3. 在室温孵育约1-2小时。

4. 吸去剩余物质。

5. 用蒸馏水小心冲洗培养皿，避免刮伤底部表面。

6. 培养皿已准备就绪。如果保持无菌状态，也可以在2-8°C处湿存或风干存放。

应用说明：本产品仅供研究与开发使用，不适用于人类或其他用途。请参阅材料安全数据表以获取有关危害和安全操作规范的信息。

注意：在6孔板中每孔涂覆5-10微克的重组蛋白（特定培养基）可能用作人类T或B细胞功能和分化调控的涂层基质蛋白，在体外用作传染病和自身免疫疾病诊断发展的潜在生物标志蛋白，或作为特定抗体生产的抗原。

CD270，人，重组文献参考：

(1) Montgomery, R.I., Herpes simplex virus-1 entry intocells mediated by a novel member of the TNF/NGFreceptor family. Cell 87 (3), 427-436 (1996)

(2) Kwon,B.S., et al., A newly identified member of thetumor necrosis factor receptor superfamily with a widetissue distribution and involvement in lymphocyte activation.J. Biol. Chem. 272 (22), 14272-14276 (1997)

(3) Schaer,C., et al,. HVEM signaling promotes colitis.PLoS ONE 6 (4), E18495 (2011)

https://www.amyjet.com/products/ABM-5127-0.1MG.shtml

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FibriCol，牛去端肽胶原溶液在细胞培养中的应用探究

FibriCol 胶原蛋白因其纯度（>99% 胶原蛋白含量）、功能性和最接近天然的胶原蛋白而被誉为所有胶原蛋白的标准。 FibriCol 是从牛皮中分离出来的，这些牛皮来自美国唯1受控的封闭牛群。 Advanced BioMatrix 的制造工艺符合严格的质量标准，经证明可以产生无与伦比的批次间一致性。 FibriCol 胶原蛋白大约 97% 为 I 型胶原蛋白，其余为 III 型胶原蛋白。通过凝胶渗透色谱法测得，它含有高单体含量。 FibriCol 胶原蛋白的浓度约为 10 mg/mL。 FibriCol 是可溶于 0.01 N HCl 的去端肽胶原蛋白，因此 pH 值约为 2.0。 FibriCol 胶原蛋白非常适合需要高浓度胶原蛋白的应用。 FibriCol 经过无菌过滤并作为即用型溶液提供。

艾美捷FibriCol，牛去端肽胶原溶液，10 mg/ml，20 mL（ABM-5133-20ML）3D凝胶制备程序：

1. 缓慢地将冷却的10倍浓缩PBS或10倍培养基的1份与冷却的胶原溶液的8份轻轻混合/旋转。

2. 使用无菌0.1M氢氧化钠将混合物的pH值调整至7.0-7.5。仔细监测pH值调整（pH计、酚红或pH试纸）。

3. 用无菌水将最终体积调整为总量的10份。

4. 为防止凝胶化，保持混合物的温度在2-10摄氏度。

5. 要形成凝胶，将温度升至37摄氏度。凝胶形成需要大约40分钟。

储存/稳定性：该产品存放在2-10摄氏度，并在冷冻冰袋上发货。请勿冷冻。产品标签和每个特定批次的分析证书上列有有效期限。只有在按照指示处理和储存产品时，有效期限才适用。

注意事项和免责声明：本产品仅供研究与开发使用，不适用于人类或其他用途。请参阅材料安全数据表以获取有关危害和安全操作规范的信息。

FibriCol，牛去端肽胶原溶液文献参考：

1. Tanzer, M. L., Cross-linking of collagen. Science,180(86), 561-566 (1973).

2. Bornstein, P., and Sage, H., Structurally distinct collagen types. Ann. Rev. Biochem., 49, 957-1003(1980).

3. Tomasek, J.J., and Hay, E.D., Analysis of the role of microfilaments in acquisition and bipolarity and elongation of fibroblasts in hydrated collagen gels. J. Cell Biol., 99, 536-549 (1984).

4. Roeder, B.A., et al., Tensile mechanical properties of three-dimensional type I collagen extracellular matrices with varied microstructure. J. Biomech. Eng., 124, 214-222 (2002).

5. Sato, M., et al., 3-D Structure of extracellular matrix regulates gene expression in cultured hepatic stellate cells to induce process elongation. Comp Hepatol., Jan 14;3 Suppl 1:S4 (2004).

6. Li, G.N., et al., Genomic and morphological changes in neuroblastoma cells in response to three-dimensional matrices. Tissue Eng., 13, 1035-1047 (2007).

7. Wozniak, M.A., and Keely, P.J., Use of three-dimensional collagen gels to study mechanotransduction in T47D breast epithelial cells. Biol. Proced. Online, 7,144-161 (2005).

8. Karamichos, D., et al., Regulation of corneal fibroblast morphology and collagen reorganization by extracellular matrix mechanical properties. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 48, 5030-5037 (2007).

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SpongeCol，胶原蛋白海绵，柱状孔结构的制备和使用

SpongeCol®是一种具有交织的柱状多孔结构的胶原海绵。SpongeCol®包含一种独特的柱状多孔网络，使细胞和营养物质能够完全流过交织的孔隙，为细胞的附着、生长和迁移提供了增加的表面积。SpongeCol®由高度纯化的I型胶原组成，最能够支持细胞的附着、增殖和功能。这种胶原海绵经轻度交联，具有增加的机械强度和耐久性，适用于短期和长期组织培养，但在较长时间内仍然可生物降解。孔的直径范围从100到400微米，平均直径约为200微米。胶原圆盘直径约为4毫米，厚度为1.5毫米。海绵圆盘适合放入96孔培养板或卫生卢尔连接器进行流动灌注。每包含二十五个胶原海绵圆盘。该产品经过终端灭菌处理，可立即使用。

艾美捷SpongeCol，胶原蛋白海绵，柱状孔结构，直径 4 毫米圆盘（ABM-5135-25EA）特性描述：

孔径尺寸：约为200微米孔径，范围在100至400微米之间。

尺寸：SpongeCol®为圆盘形状，直径约为4毫米，厚度为1.5毫米。

pH值：在PBS或组织培养培养基中悬浮时，约为7.0至7.4。

内毒素：用于生产该产品的胶原的内毒素水平为<1.0 EU/ml。

无菌性：SpongeCol®经过辐照处理并通过了无菌性测试。

存储/稳定性：室温存放 - 不建议加热超过40ºC。存放在阴凉干燥的地方。该产品的稳定性正在评估中。

本产品仅用于研发目的，不适用于人类或其他用途。请参阅材料安全数据表以获取有关危害和安全操作规程的信息。

SpongeCol，胶原蛋白海绵，柱状孔结构，直径 4 毫米圆盘的制备和使用：

A. 制备和接种：

注意：细胞附着到海绵上通常是组织培养中最关键的一步。温度、pH值、气体交换和细胞浓度会影响附着的速率和效率。最佳接种速率取决于被培养的细胞类型。

1. 在无菌层流工作台中从包装中无菌取出海绵圆盘。

2. 使用无菌器械小心地将海绵放入96孔组织培养板的孔中。在转移海绵时小心不要损坏海绵。建议使用未经处理的组织培养塑料器皿。

注意：涂有组织的塑料器皿可能需要用琼脂糖涂层，以防止细胞附着在塑料而不是海绵上。

3. 将细胞悬浮在所需浓度（1x104 –1x105 cells/mL）并将足够体积的细胞溶液分配到放置在孔中的海绵顶部。

注意：另一种方法是将细胞悬浮在中和的胶原溶液中（如PureCol® I型胶原目录号5005-100ML或PureCol® EZ凝胶目录号5074-35ML）。将胶原/细胞溶液分配到放置在孔中的海绵顶部。

4. 转移到37ºC孵育箱中约1 - 2小时，以便细胞初始附着。

注意：如果使用胶原悬浮法，胶原将在37ºC聚合并将您的细胞封装在胶原基质和海绵中。

5. 经过1 - 2小时后，从孵育箱中取出板，并检查细胞附着情况。可能需要进行额外的测试以优化细胞附着到海绵上所需的时间。检查细胞的形态。细胞的附着和扩展将决定附着所需的时间。

6. 一旦细胞充分附着到海绵上，增加每个孔中的最终体积，以完全覆盖并为培养系统提供足够的培养基。

B. 更换培养基：

1. 在初始接种后的12至24小时更换培养基。更换频率将由细胞类型、细胞附着效率、pH值（保持在pH 7.0至7.4）、培养中可用的培养基营养物质决定。与2D培养系统相比，可能需要更频繁地更换培养基。

C. 细胞收获：

注意：蛋白酶消化是从海绵释放细胞的标准方法。细胞与胶原海绵的附着强度将因细胞系而异。酶浓度和消化时间将取决于酶的活性和细胞的浓度。胶原酶和/或胰蛋白酶可能是首选方法。

1. 使用EDTA-PBS洗涤海绵可能有助于蛋白酶消化。添加足够的体积以覆盖海绵。

2. 从孔中抽吸EDTA-PBS溶液。

3. 向孔中加入足够的解离溶液，完全覆盖海绵。

4. 转移到37ºC孵育箱中。定期检查细胞的脱离情况。

5. 一旦细胞完全脱离，将细胞取出并分配到离心管中。

6. 根据需要离心细胞。

https://www.amyjet.com/products/ABM-5135-25EA.shtml

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聚-L-鸟氨酸，非无菌粉末的使用说明和相关Q&A

聚-L-鸟氨酸配有 100 毫克非无菌粉末。聚-L-鸟氨酸是一种带正电荷的合成氨基酸链，广泛用作涂层，以增强细胞对塑料器皿和玻璃表面的附着和粘附。聚-L-鸟氨酸的分子量差异很大，较低分子量 (30,000 Da) 的粘度较低，较高分子量 (>300,000 Da) 每个分子具有更多的结合位点。该产品的分子量范围为 70,000 至 150,000 Da。聚-L-鸟氨酸装在 50 毫升琥珀色瓶中。该产品在适当添加细胞培养水并无菌过滤后即可使用。

艾美捷聚-L-鸟氨酸，非无菌粉末，100 毫克（ABM-5172-100MG）使用说明：

使用这些建议作为指南，以达到确定培养系统的最佳包被条件。为保持无菌，请在层流罩中执行所有操作。

典型的工作浓度为0.1 mg/ml。如果需要不同的浓度，将所需体积的溶液从瓶子转移到稀释容器中。使用组织培养级水或PBS稀释至所需浓度。

通过 0.22 微米过滤器进行无菌过滤器。

向培养表面加入适量稀释的物质。通常，每25cm2使用1ml。轻轻摇晃，以确保培养表面均匀涂覆。

选项 A：

在室温下孵育 60 分钟，抽吸除去多余的溶液。

用组织培养级水彻底冲洗表面并吸出冲洗水。

孵育并在室温或 37°C 下干燥，盖上盖子，至少 2 小时。包衣培养器皿可储存长达 1 周。转到步骤 9

选项B：

允许在室温下孵育过夜，通过抽吸除去多余的溶液。

用组织培养级水彻底冲洗表面并吸出冲洗水。

孵育并在室温或 37°C 下干燥，盖上盖子，至少 2 小时。包衣培养器皿可储存长达 1 周。

将培养基和细胞引入培养物表面。

将剩余的聚-L-鸟氨酸溶液储存在 -10 至 30°C

产品Q&A：

这些粘附肽产品的同一生产区域是否使用了任何动物源性材料？

本产品仅由合成材料制成，不含任何原料或动物源性物质。

聚-L-鸟氨酸，非无菌粉末参考资料：

Chen, Eric YT, et al. "Activated charcoal composite biomaterial promotes human embryonic stem cell differentiation toward neuronal lineage." Journal of Biomedical Materials Research Part A 100.8 (2012): 2006-2017.

Boularaoui, Selwa Mokhtar, et al. "Efficient transdifferentiation of human dermal fibroblasts into skeletal muscle." Journal of tissue engineering and regenerative medicine 12.2 (2018): e918-e936.

Ergin, Ekin, et al. "Time-resolved fluorescence resonance energy transfer [TR-FRET] assays for biochemical processes." Current pharmaceutical biotechnology 17.14 (2016): 1222-1230.

https://www.amyjet.com/products/ABM-5172-100MG.shtml