岛津LC2010A/C型高效液相色谱仪操作规程（sop）

1 仪器组成与开机
1．1本仪器由Class-VP工作站、在线脱线机、输液泵、自动进样器、柱温箱和检测器等部件组成。各部分的操作均可由工作站或液晶面板控制完成。
1．2分别打计算机、LC-2010A/C高效液相色谱仪的电源开关。
1．3仪器约需3min时间完成自检过程，此时双击【Class-VP】快捷方式图标后，双击【Instrument l】可进入联机状态；双击【Offline Processing】可进入脱机状态（联机状态下可实现计算机对仪器的操纵控制以及在线据的采集和分析；脱机状态下可实现已采集数据的处理和再分析）。
1．4在联机状态下，计算机屏幕显示Class-VP 6.12工作站画面,此时得用工具栏上的【Auto Purge】按钮对仪器管路进行彻底的冲洗并排除可能存在的气泡, 【Auto Purge】功能将按照操作者的设置自动进行和停止(本机为四元低压梯度系统,分为A、B、C、D、R五个流路并配有五路在线脱气机。其中R流路为自动进样器的清洗流路。在进行Purge时，可以只选择所需要的流路进行Purge，但第R路是必选项)。
2 分析方法的建立、存储和调用
2．1分析方法的建立
2 .1．1 单击菜单栏中的【File→Method→New】以便建立一种新方法。
2．1．2 此时【LC Setup Assistant-System】对话框吵将显示当前的分析方法名为Untitled.met,单击【Simple Setting】可进行常规分析条件的设定；单击【Method→Instrument Setup】可进行复杂分析条件的设定。
2．1. 3利用【Simple Setting】进行常规分析条件的设定在Mode中选择Low Prerrure Gradient;在Pump框中设定流速、各流路(通道)的比例、最大最小大力限;在【Oven】框中设定柱温;确保【Detector A】复选项被选中后，在其中设定所需的检测波长；在【Time Program】中设定液相停止时间以及采集停止时间（一般情况下二者一致。可选择【LC Stop】时间后，单击【Apply to All Aequisition Time】按钮使二者一致）。单击【Download】按钮，使所设定的分析条件成为当前分析方法（每当完成一种新的设定后，一般均应执行此步骤，后不赘述）。此时，若仪器的系统控制器没有打开，可单击工具栏上的【Instrument On/Off】按钮，仪器将按照所设定的条件开始进行。
2．1．4 利用【Method】→【Instrument Setup】进行复杂分析条件的设定该部分中可对泵、柱温、检测器、系统控制器、时间程序等组件或程序进行更进一步的设定和控制。如：设定检测器的灵敏度、D2灯的开关、梯度洗脱程序的设定等。
2．1．5 峰/组表（Peak/Group Tables）的设定
2．1．5．1 打开校准用标准物质的色谱文件，点击积分事件工具栏中的【Define Peaks】按钮，按状态栏的提示进行操作，将要校准的峰（此处即为校准用标准物质峰）的保留时间及保留时间窗口添加到峰表中。
2．1．5．2 选择【Method】→【Peak/Group Tables】打开峰表。在峰表中输入要校准的峰的相关信息，其中【ID】、【Ret Time】Window，已自动添加，其他需要输入的内容为：【Name】（组）分峰的名称）、【ISTD ID#】（内标峰的ID号）、【Units】（报告结果的浓度单位）、【Analysis Channel】（选择所用的检测通道）、【Fit Type】（选择标准曲线的类型，如点到点、线性、二次曲线等方式）、【Zero】（选择后强制校准曲线通过零点）、【Calib Flag】（选择Weight Average）、【Level 1~10】（输入各组分中每份校准用标准用标准物质的量及其内标物质的量），等。
2．2 分析方法的存储分析方法建立后应及时利用菜单栏中的【File→Method→Save(Save As)】或单击常用工具栏中的保存按钮进行存储。分析方法一般建议存储在C:\Class-VP\Methods中或其他个人文件夹中（无论新建还是调用一种方法，在对方法本身做了任何的设定或改动后均应随时点击常用工具栏中的保存按钮，以防信息丢失！后不赘述）。
2．3 分析方法的调用如果想调用一种已存的分析方法，单击菜单栏中的【File→Method→Open】后，选中所需的分析方法并单击“打开”。此时，【LC Setup Assistant-System】对话框中将显示所打开的分析方法名，其中操作同2.1.
3 供试品分析
3.1 建立或调用一种分析方法(详见2). 单击菜单栏中【File→Method→Open】,选中所需要的分析方法并单击“打开”, 单击【Download】按钮,若仪器的系统控制器没有打开,可单击工具栏上的【Instrument ON/OFF】按钮，此时仪器将按照所选定的分析方法条件开始运行。进样采集前可以按动工具栏上的【Zero Detector】按钮将检测器的基线手动回零（本机具有采集时自动回零功能，此项亦可不做）。
3．2 单次进样采集分析当色谱柱和检测器已充分平衡和稳定后，单击【Single Run】按钮，在出现的对话框中规定方法文件名（该名称应与您所建立或调用的方法文件名一致）、数据文件存储路径（建议存储在C:\Class-VP\Data\hplc中或其他个人文件夹中）、数据文件名、自动进样器的瓶号（样品架位号）（如果采用的是140位的样品架，则样品架位号为：10001~10070，为左位样品架1L；20001~20070，为右位样品架2R、进样体积(μL)。单击【Start】,仪器开始单次进样采集分析，此时出现采集画面，采集完毕可以进行色谱峰的自动或手动分析。重复上述步骤进行下一次单次进样采集分析。
3．3 序列（多次）进样采集分析
3．3．1序列（Sequence）的建立、存储和调用
3．3．1．1 序列（Sequence）的建立单击菜单栏中的【File】→【Sequence】→【New】,出现【New Sequence】对话框，在此规定方法文件名、数据文件存储路径、数据文件名、自动进样器的瓶号范围（开始瓶号和结束瓶号）、进样体积、重复进样次数等信息（原则同3.2）。单击【OK】后，出现序列（Sequence）列表，在此可以进行更为详尽的Sequence编辑。如：【Run Type】（将校准用标准物质的首次运行设定为【Begin Calibration】和【Clear All Calibration】；将校准用标准运行类型均设为【End Calibration】，则中间的运行自动变为【Calibration】，供试品的运行类型均设为【Unknown】、【Level】（标准物质的Level值应与峰表中的Level值相对应，依次输入1~10的水平代码；供试品的Level值均为0）、【Sample Amount】（校准用标准物质的量均输入1；供试品的量输入相应的具体数值）、【ISTD Amount】（标准物质的内标特量均输入【1】；供试品的内标物质的量输入相应的具体数值）。更为详尽的参数输入参见使用说明书。3．3．1．2 序列（Sequence）的存储利用菜单栏中的【File】→【Sequence】→【Save(SaveAs)】或单击常用工具栏中的【保存】按钮可对当前的序列（Sequence）进行存储。建议存储在C:\Class-VP\ Sequence中或其他个人文件夹中。
3．3．1．3 序列（Sequence）的调用单击菜单栏中的【File→Sequence→Open】，选择所需要的Sequence，单击“打开”。
3．3．2 序列（多次）进样采集分析首先要建立或调用一个Sequence并单击菜单栏中的【File】→【Sequence】→【Open】，将所需要的Sequence打开后，单击【Sequence Run】按钮，在【Run Range】中选择“全部”或“部分”的序列范围，单击【Start】，仪器将开始序列（多次）进样采集分析。
4 分析数据的处理和分析报告的打印
4．1 分析数据的处理和查看
4．1．1 分析数据的处理主要看是积分参数的设定。在不设定任何积分参数的情况下，仪器将按照缺省参数值进行积分处理（仪器的缺省积分参数值为：Width=0.2；Threshold=50）；如果对按照仪器的缺省积分参数值进行的数据处理结果不满意，可单击菜单栏中的【Method→Integration Events】,进行丰富多彩的积分事件的设置和规定，设置后单击常用工具栏中的【Analyze】按钮，仪器将按照要求对数据文件进行再积分（再处理）。
4．1．2 分析数据的查看单击常用工具栏中的【Report→View→Area%Det(A)】按钮，可随时查看数据文件的百分面积报告结果。
4．2 分析报告的打印
4．2．1 数据文件的打开单击菜单栏中【File→Data→Open】,选择所需要的数据文件，单击【打开】。
4．2．2 分析报告的打印单击常用工具栏中的【Report→Print→Area%Det(A)】按钮，可随时打印数据文件的百分面积报告结果。还可以利用菜单栏中的【Method→Custom→Report】来编辑和打印内容更为丰富的用户报告。
4．3 分析数据的存储（另存）仪器所采集的数据文件是自动存储的，包括对有关数据进行的再积分或再处理。但如果希望原有的数据文件不至于被处理后的文件所覆盖，单击菜单栏中【File→Data→Save As】或单击常用工具栏中的【保存】按钮即可完成相应的工作。
5 色谱柱的冲洗
5．1 分析工作结束后，必须对色谱柱进行充分的冲洗。对于常用的反相色谱柱，一般分别以纯水和纯甲醇（或乙腈）代替原流动相中的水相（如缓冲溶液）和有机相，按原流动相比例，在1 mL/min的流速下，冲洗60min；再以甲醇为流动相冲洗30min。
5．2 在对色谱柱进行冲洗的过和程中，为延长D2灯的使用寿命，可将其关闭。方法为
：单击菜单栏中的【File→Method→Instrument Setup→Detector→Lamp→Off】。
5．3 利用Sequence Run的运行，可实现色谱柱的自动冲洗。方法是在Sequence中的最后一行加入一个事先编好的冲柱方法文件，或利用“Shut Down”的方法将一个事先编好的冲柱方法作为Shut Down文件。
6 关机
6．1 手动关机分析工作结束，并且色谱柱已充分冲洗完毕后，依次单击工具栏中的【Turn Pumps On/Off】、【Instrument On/Off】按钮，依次关闭画面中的各个Windows界面并退出Class-VP工作站软件；依次关闭仪器、计算机的电源开关。
6．2 自动关机本机可以实现无人自动关机。点击【Shut Down】按钮后出现Shut Down条件对话框，在其中选择Shut Down文件（应选择色谱柱冲洗文件作为Shut Down文件），在【Cool Down Time】中规定一个时间，该时间应与冲柱文件的时间相一致，然后分别规定所要关闭的组件名称，单击【Run】按钮即可。
7 注意事项
7．1 2010 A和2010 C两种型号的惟一区别在于2010 C的自动进样器样品架带有制冷功能，冷却温度的设定在【File→Autosampler→Configuration】中，最低温度为4℃。
7．2 可利用【File→Method→Print】打印出已打开的方法文件，但其中并不包括2010 C自动进样器的温度，可以在【Method→Properties】中进行标明。
7．3 本机及其使用的工作站软件具有丰富的功能，例如：右键菜单、鼠标的单双击等不同操作方式会产生不同的功能和效应，具体可参阅有关使用说明书。