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蛋白质、酶、生物标志物丨G-Biosciences Acriflavine抗性蛋B

武汉艾美捷科技有限公司2022年7月25日 3:15 点击:894

蛋白质、酶、生物标志物丨G-Biosciences Acriflavine抗性蛋B

 

艾美捷G-Biosciences 拥有全长、高度纯化的膜蛋白(GPCR、离子通道、转运蛋白、受体和病毒蛋白),用于抗体开发、疫苗配方和/或药物发现的研究。  

 

使用独特的天然分离工艺以最高纯度水平纯化这些完整的膜蛋白,同时保持其结构和功能完整性(无重折叠或诱变)。该过程保留了靶标/抗原的功能和结构完整性。这对蛋白质的质量以及蛋白质组学和药物发现应用的成功具有显着的有益影响。

 

艾美捷 G-Biosciences AcrBAcriflavine 抗性蛋白 B)是一种细菌多药输出者,是指示细菌抗性的良好目标。

艾美捷 G-Biosciences AcrBAcriflavine 抗性蛋白 B)特征

无需重新折叠

无诱变/截断/融合

惊人的稳定性改进

高纯度

保持功能和结构的完整性

 

蛋白质信息

类别:多药外排泵

亲和标签:His标签(C端)

来源:大肠杆菌(菌株 K12

理论。分子量:114.6 kDa

加入#:P31224(UniProt)

 

蛋白质生产

纯度:>95%

浓度:高达 5mg/ml

表达系统:大肠杆菌(BL21C43

纯化:固定化金属亲和层析

活性:通过配体结合确认

储存条件:储存于-80°C

 

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究,广泛应用于学术研究和工业制造领域,包括:蛋白质检测、样品制备、电泳、蛋白质印迹、质谱、测定开发、抗体生产和蛋白质纯化等。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/G-Biosciences.shtml

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蛋白质组学丨G-Biosciences人类多组织印迹方案

 

艾美捷G-Biosciences 人类多组织印迹背景:  

预制的印迹是用适当的基因裂解物将 50 μg 蛋白质与预染色的分子量标记一起加载到 4-20% 变性聚丙烯酰胺凝胶上。蛋白质分离后,它们被转移到 PVDF 膜上,使用高效的蛋白质转移缓冲液.

 

印迹已准备好用所选抗体封闭和探测。

 

注意:建议联系技术部门以获取有关印迹的最新信息,因为G-Biosciences 保留因 GenLysate 的可用性而更改印迹配置文件的权利。

 

多组织印迹允许研究人员可视化其蛋白质在特定物种中的组织分布。这些已成功用于分析多种蛋白质。例如,JNK 通路的支架蛋白 JIP3 具有特定的大脑位置,并被证实是一种神经元蛋白 (1);人类 Cds1 相关激酶具有睾丸定位,并显示为减数分裂检查点激酶 (2)TATA-box 结合蛋白相关因子存在于所有人体组织中 (3);仅在睾丸中发现的 Geminin 被证明定位于增殖细胞 (6)

 

艾美捷 G-Biosciences 多组织的一个例子;单一物种印迹如下所示。小鼠多组织印迹 (Cat. # TB38) 用针对小窝蛋白的抗体进行探测,人类多组织印迹 (Cat. # TB37-I) Cox-2 进行探测。

艾美捷 G-Biosciences 人类多组织印迹特征:

印迹通道顺序:

1.蛋白质标记

2.人类正常肝脏裂解物

3.人类正常脑裂解物

4.人类正常肺裂解物

5.人类正常肾脏裂解物

6.人正常脾裂解物

7.人类正常睾丸裂解物

8.人类正常卵巢裂解物

9.人类正常心脏裂解物

10.人类正常胰腺裂解物

 

艾美捷 G-Biosciences 人类多组织印迹引用文献:

1.Bannwarth, S. 等人 (2014) 大脑。doi: 10.1093/大脑/awu138

2.Gaut, JP 等人 (2014) 临床。化学。doi: 10.1373/clinchem.2013.212993

3.Hayashi, H. 等人 (2012) J Biol Chem 2012287:15054

4.Bakheet, SA 等人 (2007) Toxicol Sci 95:436

5.Lateza, OF 等人 (2006) 临床。化学。52:1713

6.Shibuya, T. 等人 (2006) 动脉硬化。血栓。瓦斯克。生物学。26:1051

 

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究,广泛应用于学术研究和工业制造领域,包括:蛋白质检测、样品制备、电泳、蛋白质印迹、质谱、测定开发、抗体生产和蛋白质纯化等。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/G-Biosciences.shtml

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SpinOUT 系列超滤管丨G-Biosciences SpinOUT™ 色谱柱

 

艾美捷G-Biosciences SpinOUT™ 色谱柱背景:  

SpinOUTGT-100GT-600 GT-1200 色谱柱是通用型旋转式色谱柱,用于对 5 µl 4 ml 样品体积的肽、蛋白质和核酸溶液进行脱盐和缓冲液交换。还提供 96 孔旋转板形式,可处理多达 96 个样品。

 

艾美捷 G-Biosciences SpinOUT™ 色谱柱包含三种 MWCO 尺寸,适用于 >700>6,000 >30,000 道尔顿的肽或蛋白质,适用于蛋白质含量低至 20µg/ml 的样品。

 

SpinOUT™ 色谱柱易于使用;只需使用蛋白质样品和离心机即可回收蛋白质和核酸,色谱柱可保留 95% 以上的盐和小分子(SpinOUTGT-100 <100DaSpinOUTGT-600 <1,000Da <1,500Da SpinOUTGT-1200)。

 

Spin-OUTGT-100 用于纯化 >700Da 的肽和蛋白质。

Spin-OUTGT-600 用于纯化 >6kDa 的蛋白质和大于 10bp 的核酸。

Spin-OUTGT-1200 用于纯化 >30kDa 的蛋白质和去除 >1,500Da 的分子。该色谱柱是从肽中分离蛋白质的理想选择。

 

SpinOUT 系列超滤管 每个 MWCO 有五种尺寸可供选择,并在下面突出显示:

cat#  描述 # 提供 树脂床体积 (mL) 上样量 (mL)

786-865  SpinOUTGT-1000.1ml   25   0.1 0.005-0.02

786-866  SpinOUTGT-1001ml  10   1    0.05-0.1

786-867  SpinOUTGT-1003ml  10  3  0.1-0.5

786-868  SpinOUTGT-1005ml  5  5   0.5-2

786-869  SpinOUTGT-10010ml  5  10   0.5-4

786-703  SpinOUTGT-6000.1ml  25  0.1  0.005-0.02

 

艾美捷G-Biosciences SpinOUT™ 色谱柱特征:

1.提供 3 MWCO 尺寸:>700Da>6kDa >30kDa 蛋白质

2.5 种尺寸可供选择,样品体积为 5µl 4ml

3.提供 96 孔板格式

4.易于使用的旋转式色谱柱,用于快速纯化

 

艾美捷G-Biosciences SpinOUT™ 色谱柱应用:

1.样品中的蛋白质纯化和污染物去除

2.用于蛋白质和核酸溶液的脱盐和缓冲液交换

3.从肽中分离蛋白质

4.脱盐肽

 

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究,广泛应用于学术研究和工业制造领域,包括:蛋白质检测、样品制备、电泳、蛋白质印迹、质谱、测定开发、抗体生产和蛋白质纯化等。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

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G-Biosciences HOOK系列HOOK™ 染料标记试剂盒

 

艾美G-Biosciences HOOK系列 HRP偶联标记用荧光染料标记蛋白质已成为许多领域的重要研究工具。提供多种荧光染料标记试剂盒,适用于多种波长。

艾美捷G-Biosciences HOOK系列 HRP偶联标记试剂盒背景:

FITC(异硫氰酸荧光素)是一种常用的蛋白质荧光标记,因为它含有与蛋白质的氨基、巯基、咪唑基、酪氨酰或羰基结合所需的基团。FITC的分子量为389,激发和发射波长分别为494nm520nm,因此发出绿色可见光。该套件采用SpinOUT™脱盐柱,用于快速去除未结合的染料。

 

FITC 标记试剂也以G-Biosciences一次性OneQuant™形式提供。

 

艾美捷G-Biosciences HOOK系列HOOK™ 染料标记试剂盒是对 Cat# 786-059的改进。因为它可以在更短的时间内提供更大的自由染料去除和完全偶联。

 

艾美捷G-Biosciences HOOK系列 HRP偶联标记特征:

别名: Fluorescein-5-Isothiocyanate

CAS 编号: 3326-32-7

线性分子式: C21H11NO5S

分子量: 389.4

染料预先称重并以一次性OneQuant ™ 小瓶提供(也可单独购买)。

适用于大多数蛋白质。

利用 SpinOUT™脱盐柱,用于快速去除未结合的染料

 

艾美捷G-Biosciences HOOK系列 HRP偶联标记应用:

1.将绿色荧光染料标记到蛋白质和肽上。

2.适用于抗体标记。

文献引用:

1.Baig, MMFA 等人 (2020) PA 受体介导的载有卡铂的聚阴离子 DNA 纳米线的内化可有效治疗耐药性肝癌 HepG-2 细胞。应用纳米科学。doi.org/10.1007/s13204-020-01293-2

2.Qiu, XQ et al (2020) Defend the home:微生物组分子为其脊椎动物宿主提供保护。未来微生物。doi.org/10.2217/fmb-2020-0008

3.Zheng, Y. 等人 (2017) rLj-RGD3 对大鼠正常组织的影响及其在 HeyA8 细胞中的位置的数据。数据简介。12:77

4.Afzal, A. 等人 (2013) BMC 植物生物学。13:43

 

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究,广泛应用于学术研究和工业制造领域,包括:蛋白质检测、样品制备、电泳、蛋白质印迹、质谱、测定开发、抗体生产和蛋白质纯化等。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

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G-Biosciences Tube-O-DIALYZER系列透析管方案

 

艾美G-Biosciences Tube-O-DIALYZER提供适用于 Tube-O-DIALYZER Micro Medi 尺寸的浮子。Micro 浮子有两种尺寸可供选择:786-141F 设计用于 Tube-O-Tanks 或烧杯中的透析,786-149 设计用于微透析杯中的透析。

艾美捷G-Biosciences Tube-O-DIALYZER系列透析管3种规格:

cat#    描述     规格

786-141F   Tube-O-DIALYZER™ 浮子(微型) 6

786-142F   Tube-O-DIALYZER™ 漂浮物 (Medi)  6

786-149  Tube-O-DIALYZER™ 浮子(用于透析杯的微型) 12

 

艾美捷G-Biosciences Tube-O-DIALYZER系列透析管相关技术文献:

植物蛋白质组学手册

蛋白质交联手册——蛋白质交联剂及其反应的详细指南。

蛋白质标记和结合

样品制备手册——用于裂解缓冲液、分馏、透析、蛋白质浓缩和富集。

 

其它相关热门研究:HOOK系列 HRP偶联标记,Pearl IgG纯化,Protein A/G磁珠原料,SpinOUT 系列超滤管,G-Sep/G-Trap Gel 树脂。

GBS-786-1215 明矾佐剂 50ml 无热原,无内毒素

GBS-786-1216 G-Alum? 佐剂试剂盒(明矾+沉淀剂) 1kit 比明矾效果更强

GBS-786-1682 弗氏完全佐剂(CFA 5x10ml 用于初次免疫

GBS-786-1684 弗氏不完全佐剂(IFA 5x10ml 用于加强免疫

 

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究,广泛应用于学术研究和工业制造领域,包括:蛋白质检测、样品制备、电泳、蛋白质印迹、质谱、测定开发、抗体生产和蛋白质纯化等。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

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G-Biosciences -Pearl IgG纯化丨PearlIgG 纯化试剂盒

 

艾美G-Biosciences PearlIgG 纯化试剂盒设计用于从血清中一步纯化 IgG(免疫球蛋白 G)抗体。提供的PearlIgG 纯化树脂结合高丰度的非 IgG 蛋白(即白蛋白)并允许 IgG 分子在生理缓冲液中通过。纯化的 IgG 分子可以储存或用于进一步的下游应用,无需进一步清理,例如硫酸铵沉淀。

 

艾美捷G-Biosciences PearlIgG 纯化试剂盒可在 <15 分钟内纯化 IgG,比常用的更快蛋白A和蛋白G树脂。PearlIgG 纯化树脂的性能与蛋白 A 和蛋白 G 树脂相当或更好。

 

艾美捷G-Biosciences PearlIgG 纯化试剂盒有两种形式

1.cat# 786-798 是一种离心形式,非常适合快速、小规模纯化 IgG。该试剂盒随附 3ml PearlIgG 纯化树脂、IgG 分离缓冲液和 20 个离心柱。适用于纯化高达 25mg IgG

 

2.cat# 786-799 随附 25ml PearlIgG 纯化树脂和 IgG 分离缓冲液,适用于从 ~100ml 血清(~200mg IgG)中分离 IgG

 

也可以使用G-Biosciences Pearl™ 单克隆 IgG 纯化试剂盒,从腹水和细胞培养上清液中纯化单克隆抗体。

 

艾美捷G-Biosciences PearlIgG 纯化试剂盒特征:

1.简单的 1 步纯化,消除蛋白质 A G 结合和洗脱步骤

2.高回收率 (>90%) 和纯度 (>80%)

3.从与蛋白 A G 不兼容的来源中纯化 IgG

 

艾美捷G-Biosciences PearlIgG 纯化试剂盒应用:

IgG(免疫球蛋白 G)分子的纯化

 

G-Biosciences专注于蛋白质组学研究,广泛应用于学术研究和工业制造领域,包括:蛋白质检测、样品制备、电泳、蛋白质印迹、质谱、测定开发、抗体生产和蛋白质纯化等。艾美捷科技是G-Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/G-Biosciences.shtml

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Worthington产气荚膜梭菌神经氨酸酶的特征及测定

 

神经氨酸酶(唾液酸酶)从多种糖蛋白中分离出 N-乙酰神经氨酸(唾液酸)。神经氨酸酶是在蛋白质化学和细胞生物学中研究糖蛋白的重要工具(Hatton等, 1973)。

 

艾美捷 Worthington 神经氨酸酶来源于产气荚膜梭菌。在 Cassidy等人的工作的基础上,该实验室开发了色谱纯化方法。(1965 年)。Wooley Gommi (1966) 描述了这种神经氨酸酶在测量血清素受体的方法中的用途。它还用于确定组织中结合的 N-乙酰神经氨酸。

  

艾美捷Worthington产气荚膜梭菌神经氨酸酶的特征

最佳 pH 值:5.0-5.1 (Burton 1963)。在 pH 4.0 或高于 pH 8.0 时几乎没有活性或没有活性。

等电点:5.1Groome Belyaven 1958)。

活化剂:无,与来自弧菌的神经氨酸酶相反,后者需要二价金属。

抑制剂:使用神经氨酸酶抑制剂作为可能的抗病毒和抗菌剂已显示出相当大的兴趣。(Khorlin等人1970Haskell等人1970;和 Tute 1970)。

稳定剂:血清白蛋白,0.3 mg/ml (Cassidy et al . 1965)

稳定性:纯化后的制剂在 4°C 下至少可以稳定保存两年(Cassidy et al . 1965)。

 

艾美捷Worthington神经氨酸酶的测定:

Method : 该测定基于牛颌下粘蛋白 (Worthington Code: MU) 释放的唾液酸 (NANA) 的测量。在特定条件下,在 37°C pH 5.0 条件下,一个单位每分钟会从牛颌下粘蛋白中释放 1 微摩尔唾液酸。ZieglerHutchinson (1972)描述了用于确定神经氨酸酶的偶联酶测定。

 

试剂:

9 M 磷酸中的 0.2 M 偏高碘酸钠

0.5 M 硫酸钠

0.755 M 亚砷酸钠溶于 0.5 M 硫酸钠和 0.1 N H2SO4。通过将 25 gm 亚砷酸钠(分子量 129.91)溶解在 250 ml 0.5 M 硫酸钠中并加入 5 ml 5 N H2SO4 来制备。为了产生溶液,可能需要稍微加热。

2.5 N 盐酸

2.5 N HCl 中的 5% 磷钨酸

0.6% 两次结晶的硫代巴比妥酸在 0.5 M 硫酸钠中。通过将 4.5 2x 结晶硫代巴比妥酸溶解在 750 ml 0.5 M 硫酸钠中来制备。加热以产生溶液并使其冷却。将形成结晶沉淀。仅使用上清液进行检测。

0.1 M 乙酸,pH 5.0

1% 粘蛋白,pH 5.0。通过将 100 mgs Worthington 颌下粘蛋白(代码:MU)溶解在 9 ml 试剂级水中进行制备,用乙酸将 pH 值调节至 5.0,并稀释至最终体积为 10 ml。溶液在 pH 5.0 时会显得浑浊。

环己酮。注意:阅读产品标签以获取处理说明。

 

酶:

将酶以 1 mg/ml 溶解在试剂级水中。在使用前立即准备四种稀释液,范围从 0.1 mg/ml 0.005 mg/ml

 

程序:

准备一个 37°C 的水浴。将分光光度计调整到 549 nm。进入编号管移液器如下:

粘蛋白 0.4 毫升

0.1 M 乙酸 0.5 毫升

 

每隔一段时间,加入 0.1 ml 的相应酶稀释液。包括 0.1 ml 水的空白代替酶。在 37°C 水浴中孵育 30 分钟。通过向每个试管中加入 1 ml 5% 磷钨酸,定时停止反应。离心 10 分钟。取出每个上清液的 0.5 ml 等分试样以干洗试管。向每个中加入 0.1 ml 0.2 M 偏高碘酸钠。在室温下静置 20 分钟,加入 1.0 ml 0.755 M 亚砷酸钠。摇动试管直到棕色消失,然后加入 3.0 ml 0.6% 硫代巴比妥酸。在沸水浴中加热 15 分钟,在冰浴中冷却 5 分钟,然后在每管中加入 4.6 ml 环己酮。通过涡旋提取环己酮层中的颜色。高速离心15分钟。549的有色环己酮层与试剂级水空白。

 

注意:样品的最终 A 549不应超过 0.5 个吸收单位。

 

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington产气荚膜梭菌神经氨酸酶的特征及测定

 

艾美捷Worthington中性蛋白酶(分散酶)背景:

中性蛋白酶 (Dispase®) 是一种非哺乳动物来源的无 (AOF) 金属中性蛋白酶,通过 Worthington 开发的方法纯化。其温和的蛋白水解作用使该酶特别适用于制备原代细胞和二次(传代)细胞培养,因为它对细胞膜温和。该蛋白酶还用作细胞分离和组织解离应用中的辅助酶,通常与胶原酶一起使用。

  

艾美捷Worthington多粘芽孢杆菌中性蛋白酶 (Dispase®) 的特性:

分子量:  36 kda

最佳 pH: 在很宽的 pH 范围内稳定:4.0-9.0,最佳 pH 5.9-7.0

稳定性/储存: 在 2-8°C 下稳定 12 个月。用水或常用的平衡盐溶液或培养基复溶后,分装并储存在 -20°C

单位定义:在 37°CpH 7.5 条件下,以酪蛋白为底物,一个单位释放 1 微摩尔 Folin 阳性氨基酸(以酪氨酸计)。

特异性:含有亮氨酸和苯丙氨酸的肽键的非特异性切割。

活化剂:二价阳离子,包括Ca 2+Mg 2+Mn 2+Fe 2+

抑制剂:EDTA (1mM)EGTA1-10-菲咯啉和重金属

应用:通常用于分离皮肤表皮和真皮,留下完整的上皮层和干细胞、肝细胞和其他细胞分离应用。然而,由于所涉及变量的多样性,应根据每个细胞/组织应用的经验确定确切的分离条件。

 

Worthington中性蛋白酶(分散酶)相关研究:

胶原酶 (CLS1-4/CLSS1-4/CLSPA)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

弹性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)

透明质酸酶 (HSE/HSEP)

木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)

蛋白酶K (PROK)

胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)

胰蛋白酶抑制剂 (LBI/OI/SI/SIC)

细胞分离优化系统 (CIT)

肝细胞分离系统 (HIS)

新生儿心肌细胞分离系统 (NCIS)

木瓜蛋白酶解离系统 (PDS/PDS2)

 

相关文献:

1.角质形成细胞培养, 基本细胞培养方案,(Pollard, J. Walker, J., Eds.),Humana Press1171997

2.Akimoto, Y.Obinata, A.Endo, H. Hirano, H.: 通过使用培养的鸡胚皮肤的表皮-真皮重组实验进行基底膜重建的免疫组织化学研究:肌腱蛋白的诱导 , J Histochem Cytochem 40 , 1129 , 1992

3.Alvarez, V.von der Weid, I.Seldin, L. Santos, A.: 生长条件对Paenibacillus peoriae NRRL BD-62 Paenibac illus polymyxa SCE2 细胞外蛋白水解酶产生的影响。 , Lett Appl 微生物 43 , 625-30, 2006

 

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington核酸酶、微球菌相关研究及测定方案

 

艾美捷Worthington核酸酶、微球菌背景:

微球菌核酸酶催化 DNA RNA 的切割以产生 3'-核苷酸。它具有外切和内切 5'-磷酸二酯酶活性。该酶在富含腺苷酸或尿苷酸和脱氧腺苷酸或胸苷酸的位点催化 RNA DNA 的优先内切水解。该酶的分子量为 16,807 道尔顿,并且依赖于钙。最佳 pH 值为 9.2,但会根据存在的离子钙浓度而变化。

 

单位定义:一个单位对应于在 37°CpH 8.0260 nm 处光密度变化 1.0,使用 DNA 作为底物。

 

艾美捷Worthington核酸酶、微球菌相关研究

白蛋白,无核酸酶 (BSANF)

脱氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)

ERASE RNase A/T1 Blend (RCT)

组蛋白 (H, NHL)

溶菌酶 (LY/LYSF)

核酸酶,S1 ( SINUC/SINUCL)

核酸、DNA、大肠杆菌、λ/片段、RNA

磷酸酶、碱性 (CAP/BAPF/BAPC/BAPSF/PC)

磷酸二酯酶 I (VPH)

磷酸二酯酶 II (SPH)

蛋白酶 K (PROK/PROKS)

反向转录酶,重组 HIV (RTHIV)

核糖核酸酶 A (R/RAF/RASE/RS/RPDF)

核糖核酸酶 T1,无动物源 (RT1S)

 

艾美捷Worthington核酸酶、微球菌测定:

方法:基本上是 Heins等人所描述的。(1966) 基于核酸酶消化 DNA 后酸溶性寡核苷酸的释放。一个单位对应于在 37°C pH 8.0 在指定条件下在 260 nm 处的 1.0 光密度变化。

 

试剂:

0.1 M 硼酸钠,pH 8.8

0.01 M 氯化钙

DNA2.5 mg/ml:将 25 mg Worthington 小牛胸腺 DNA 溶解在 10 ml 0.01 M NaCl 中制备。在室温下静置过夜,然后缓慢搅拌以产生溶液。

7% 高氯酸

0.1% 牛血清白蛋白

 

酶:

1 mg/ml 溶解在试剂级水中。在 0.1% 白蛋白中稀释至 0.001-0.002 mg/ml 用于测定。

方程

程序:

如下移液器进入 5 个编号的试管中的每一个:

0.1 M 硼酸钠,pH 8.8 0.1 毫升

0.01 M CaCl 2 0.05 毫升

0.25% DNA 0.1 毫升

 

37°C 水浴中孵育 6-7 分钟以达到温度平衡。在 0.001-0.0002 mg/ml 范围内制备至少四种不同的酶稀释液。每隔一段时间,将 0.1 ml 适当稀释液移入相应的试管中,并在水浴中更换。向作为空白的第五个添加 0.1 ml 0.1% 白蛋白。孵育 30 分钟。通过添加 0.5 ml 7% 高氯酸以定时间隔停止反应。将试管置于冰浴中 10 分钟,然后加入 2.7 ml 试剂级水。在临床离心机上以最高速度离心 15 分钟。抽出上清液并读取 A 260与空白对照。

 

注意:为获得最佳结果,应稀释样品以使最终 A 260介于 0.2-0.9 之间。

 

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

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Worthington木瓜蛋白酶从纯化的蛋白聚糖生产糖肽附文献

 

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶背景:

木瓜蛋白酶是一种半胱氨酸水解酶,在广泛的条件下稳定且具有活性。即使在高温下它也非常稳定(Cohen et al. 1986)。Carica papaya的乳胶富含四种半胱氨酸内肽酶,包括木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、甘氨酰内肽酶和 caricain。这些蛋白质被合成为无活性的前体,在植物受伤并排出乳胶后两分钟内变得活跃。木瓜蛋白酶是一种次要成分,但因其更容易纯化而得到更广泛的研究(Azarkan 2003)。

 

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶特异性

木瓜蛋白酶具有相当广泛的特异性;它具有内肽酶、酰胺酶和酯酶活性。活性位点由七个亚位点(S 1 -S 4S 1' -S 3')组成,每个亚位点可以容纳底物的一个氨基酸残基(P 1 -P 4P 1' -P 3')(Schechter和伯杰 1967)。特异性由 S 2亚位点控制,S 2 亚位点是一个容纳底物 P 2侧链的疏水袋。木瓜蛋白酶表现出特定的底物偏好,主要是对该子位点的大量疏水或芳香残基(Kimmel Smith 1954)。在 S 2之外子位点偏好,活性位点内缺乏明确定义的残基选择性。

 

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶应用:

1.比其他蛋白酶更温和的细胞分离(即:皮质神经元、视网膜和平滑肌)

2.蛋白质结构研究、肽图分析

3.用于抗体筛选或鉴定的红细胞表面修饰

4.IgG IgM 抗体制备 Fab

5.整合膜蛋白的溶解

6.从纯化的蛋白聚糖生产糖肽

7.酶促伤口清创

 

艾美捷Worthington木瓜蛋白酶相关文献:

1.Akahane, K. Umeyama, H.: 木瓜蛋白酶和组织蛋白酶 B 的结合特异性 , 酶361411986

2.Alecio, M.Dann, M. Lowe, G.: 木瓜蛋白酶 S1 亚位点的特异性 , Biochem J 141 , 495, 1974

3.Allen, G. Lowe, G.: 用荧光探针研究木瓜蛋白酶的活性位点, Biochem J 1336791973

4.Allison, W. Swain, L.Phenyldiimide 对木瓜蛋白酶和 Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase 的灭活 , Arch Biochem Biophys 155 , 405, 1973

 

Worthington主要研究覆盖生物技术和生命科学研究,诊断,生物制药和生物加工应用的高质量纯化酶,蛋白质,核酸和试剂盒。艾美捷科技是Worthington的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。

来源:https://www.amyjet.com/brand/Worthington.shtml

 

 

 


(来源: 武汉艾美捷科技有限公司


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