艾美捷双链RNA定量试剂盒组分及原理分析

艾美捷双链RNA定量试剂盒组分及原理分析

双链RNA (dsRNA) 抗体及ELISA试剂盒常被应用于mRNA产品的质控环节。dsRNA抗体包括J2单克隆抗体(Anti-dsRNA mAb J2)，J5单克隆抗体(Anti-dsRNA mAb J5)，K1单克隆抗体(Anti-dsRNA mAb K1)和K2单克隆抗体(Anti-dsRNA mAb K2)，其中J2抗体是dsRNA检测的金标准。J2抗dsRNA IgG2a单克隆抗体已成为dsRNA检测的J标准。

艾美捷双链RNA定量试剂盒使用的两种dsRNA抗体如下：

雌性DBA/2小鼠腹腔注射50ug L-dsRNA

和75ug甲基化牛血清白蛋白的混合物，在完全弗氏佐剂中乳化。

在几次增强后，将脾细胞与Sp2/0-Agl4骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤克隆J2和K2。

艾美捷双链RNA定量试剂盒包含以下试剂，用于200次测试（2x96孔）：

试剂01：1小瓶包衣抗体（储存于-20℃

试剂A：1小瓶142 bp dsRNA作为阳性对照（储存于-20℃）

试剂B：1小瓶dsRNA特异性检测抗体（在RPMI+5%FBS中，储存在+4℃或最好是-20℃）

试剂C：1小瓶HRP缀合的F（ab’）2山羊抗小鼠二级抗体片段（储存于+4℃或-20℃）

试剂D：1小瓶TMB底物溶液（储存于+4℃，避光

艾美捷双链RNA定量试剂盒原理：

基于使用两种双链 RNA (dsRNA) 特异性单克隆抗体，dsRNA 检测试剂盒可以灵敏和选择性地检测 dsRNA 分子（大于 30-40 bp），而不受其核苷酸组成和序列的影响。检测具有高度特异性：在存在 1.000-10.000 倍过量其他核酸的情况下，可以检测核酸提取物中的dsRNA。该测定基于双抗夹心ELISA原理，使用 J2 (IgG2a) 小鼠单克隆抗体作为捕获抗体，单克隆抗体 K2 (IgM) 用作检测抗体。

艾美捷双链RNA定量试剂盒原理：

基于使用两种双链 RNA (dsRNA) 特异性单克隆抗体，dsRNA 检测试剂盒可以灵敏和选择性地检测 dsRNA 分子（大于 30-40 bp），而不受其核苷酸组成和序列的影响。检测具有高度特异性：在存在 1.000-10.000 倍过量其他核酸的情况下，可以检测核酸提取物中的dsRNA。该测定基于双抗夹心ELISA原理，使用 J2 (IgG2a) 小鼠单克隆抗体作为捕获抗体，单克隆抗体 K2 (IgM) 用作检测抗体。

来源：https://www.amyjet.com/brand/double-stranded-dsrna.shtml

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中英文说明书丨艾美捷双链RNA定量试剂盒

艾美捷双链RNA定量试剂盒英文说明：

Product Name

Double-stranded RNA (dsRNA), ELISA Kit

Full Product Name

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (J2 based)

Product Synonym Names

dsRNA ELISA kit

Research Use Only

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

Clonality

Monoclonal

Isotype

Mouse IgG2a kappa/IgM kappa

Clone Number

J2/K2

Species Reactivity

General

Source

The two dsRNA antibodies used in this kit were produced as follows: Female DBA/2 mice were injected intraperitonially with a mixture of 50ug L-dsRNA and 75ug methylated bovine serum albumin, emulsified in complete Freund's adjuvant. After several boosts spleen cells were fused with Sp2/0-Agl4 myeloma cells to generate the hybridoma clones J2 and K2.

Product

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit containing the following reagents for 200 tests (2x96 wells):

Reagent 01: 1 vial of coating antibody (store at -20 degree C

Reagent A: 1 vial of 142 bp dsRNA as positive control (store at -20 degree C)

Reagent B: 1 vial of dsRNA-specific detecting antibody (in RPMI + 5% FBS, store at +4 degree C or, preferably, at -20 degree C)

Reagent C: 1 vial of HRP-conjugated F(ab')2 Fragment of goat-anti mouse secondary antibody (store at +4 degree C or at -20 degree C)

Reagent D: 1 vial of TMB substrate solution (store at +4 degree C, keep in dark

艾美捷双链RNA定量试剂盒中文说明：

艾美捷双链RNA定量试剂盒，利用双抗夹心ELISA原理，检测核酸提取物中的病毒dsRNA或非病毒来源的天然或合成的dsRNA，以及检测人工合成(m)RNA制剂中的dsRNA杂质。

艾美捷双链RNA定量试剂盒基本参数：

品名：双链RNA（dsRNA），ELISA试剂盒

同义词名称：dsRNA ELISA试剂盒

仅供研究使用。不适用于诊断程序。

克隆性：单克隆

同位素：小鼠IgG2a-kappa/IgM-kappa

克隆编号：J2/K2

物种反应性：全体的

相关研究：

MBS574013   Mouse anti double-stranded RNA (J2)   0.2mg

MBS574015   Mouse anti double-stranded RNA (K1)   0.2mg

MBS574017   Mouse anti double-stranded RNA (K2)   5ml

MBS574019   Mouse anti double-stranded RNA (J5)   0.2mg

MBS574021   Mouse anti double-stranded RNA (J2, J5 and K1) Comparison Kit   3x0.1mg

来源：https://www.amyjet.com/brand/double-stranded-dsrna.shtml

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艾美捷支原体检测试剂盒基本参数和样本数据分析

艾美捷支原体检测试剂盒基本参数：

中文名称：支原体检测试剂盒

英文名字：Mycoplasma Detection Kit

编号：13100-01

规格：50Reactions

保存建议：-20℃可保存15个月，冻干粉重悬后需置于-20℃以下保存，避免反复冻融，如果每次进行检测的样本较少，请将三种试剂分装保存

艾美捷支原体检测试剂盒特点：

1、该试剂盒结合了聚合酶链反应（PCR）来扩增支原体内保守的16S核糖体RNA编码区基因组，从而提供了一种广泛、高灵敏度和高效的检测方法。

2、仔细确定的引物序列三个属的支原体（支原体、无支原体和脲原体），使该试剂盒能够检测95%以上的潜在细胞培养物感染。

3、支原体检测试剂盒中的PCR技术快速（结果通常在不到3小时内获得）且易于使用。

4、工具包也高度敏感，可在100µL测试样品上清液中检测到低至2-5毫微克的支原体DNA。

5、真核生物的并且来自细胞培养上清液的细菌DNA不被试剂盒扩增。

6、提供内部控制以消除与PCR抑制剂相关的潜在假阴性。

艾美捷支原体检测试剂盒样本数据：

相关文献：

1. Lamb SA, Rahman MM, McFadden G. Recombinant myxoma virus lacking all poxvirus ankyrin-repeat proteins stimulates multiple cellular anti-viral pathways and exhibits a severe

decrease in virulence. Virology. 2014;464-5:134-45.

2. Frampton GM, Ali SM, Rosenzweig M, Chmielecki J, Lu X, Bauer TM, et al. Activation of MET via diverse exon 14 splicing alterations occurs in multiple tumor types and confers clinical

sensitivity to MET inhibitors. Cancer Discov. 2015;5:850-9.

3. Modur V, Joshi P, Nie D, Robbins KT, Khan AU, Rao K. CD24 expression may play a role as a predictive indicator and a modulator of cisplatin treatment response in head and neck

squamous cellular carcinoma. PLoS One. 2016;11(6):e0156651.

来源：https://www.amyjet.com/products/13100-01.shtml

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中英文说明书丨艾美捷支原体检测试剂盒

艾美捷支原体检测试剂盒英文说明：

The SouthernBiotech Mycoplasma Detection Kit is designed to specifically detect potential ycoplasma contamination in cell cultures.The kit incorporates polymerase chain reaction (PCR) to amplify the conserved 16S ribosomal RNA coding region within the Mycoplasmagenome, thereby providing an extensive, highly sensitive, and efficient detection method. Carefully determined primer sequences cover three genera of Mycoplasmatales (Mycoplasma, Acholeplasma, and Ureaplasma) which allows the kit to detect over 95% of potential cell culture infections.

The PCR technology in the Mycoplasma Detection Kit is fast (results are typically obtained in less than 3 hours) and easy to use. The kit is also highly sensitive and can detect as little as 2-5 femtograms of Mycoplasma DNA in 100 µL of test sample supernatant. Eukaryotic and bacterial DNA from cell  ulture supernatant is not amplified by the kit.

A sample cell line infected with Mycoplasma will generate a PCR product between ~448 bp to ~611 bp on an agarose gel, depending on the type of Mycoplasma present. A positive control (M. orale, 503 bp) is included to validate that the PCR amplification process has occurred as well as to confirm the size of the PCR product obtained in test samples. An internal control is also provided to eliminate

potential false negatives associated with PCR inhibitors.

Kit Components：

• User guide

• Primer set and nucleotides (lyophilized) - Blue Cap

o Primer/dNTP mix (deoxynucleotide triphosphates including dATP, dCTP, dGTP, and dUTP)

• Sterile PCR 10X reaction buffer (500 μL) - White Cap

o 100 mM Tris-HCl, pH 8.5

o 750 mM KCl

o 30 mM MgCl2

• Positive Control DNA (lyophilized) - Yellow Cap

o Non-infectious PCR product from M. orale

o Yields a 503 bp band

• Internal Control DNA (lyophilized) - Green Cap

o Non-infectious plasmid DNA including Mycoplasma-specific primer sequences

o Yields a 270 bp band

艾美捷支原体检测试剂盒中文说明：

组成：操作手册，设计引物/核苷酸Mix（dATP、dCTP、dGTP、dTTP），冻干粉，蓝盖装； 无菌PCR反应缓冲液10X，500uL，白盖装；阳性对照DNA（非传染性），冻干粉，黄盖装；内控对照质粒DNA（非传染性），冻干粉，绿盖装；试剂盒不含PCR仪，DNATag酶，PCR反应管，无DNA水

艾美捷支原体检测试剂盒特点：

1、试剂盒通过扩增支原体基因组中高度保守的16SrRNA编码区序列，实现培养细胞是否有支原体污染的检测

2、设计引物中含有支原体、无胆甾原体、尿素原体，能检测出95%以上的感染细胞；试剂盒操作简便，3小时内可出实验结果，灵敏性高，可以检测100uL样品上清液中2。5毫微微克级的DNA，对于真核和细菌DNA不产生扩增效应

3、试剂盒提供的阳性对照在DNA电泳上会显示503bp的条带，提供的内控对照在DNA电泳上会显示270bp的条带（内控对照是PCR反应成功的标志）

相关文献：

1. Crittenden MR, Zebertavage L, Kramer G, Bambina S, Friedman D, Troesch V, et al. Tumor cure by radiation therapy and checkpoint inhibitors depends on pre-existing immunity. Sci

Rep. 2018;8:7012.

2. Razidlo GL, Burton KM, McNiven MA. Interleukin-6 promotes pancreatic cancer cell migration by rapidly activating the small GTPase CDC42. J Biol Chem. 2018;293:11143-53.

3. Pishas KI, Drenberg CD, Taslim C, Theisen ER, Johnson KM, Saund RS, et al. Therapeutic targeting of KDM1A/LSD1 in Ewing sarcoma with SP-2509 engages the endoplasmic

reticulum stress response. Mol Cancer Ther. 2018;17:1902-16.

4. Bryant JD, Sweeney SR, Sentandreu E, Shin M, Ipas H, Xhemalce B, et al. Deletion of the neural tube defect-associated gene Mthfd1l disrupts one-carbon and central energy

metabolism in mouse embryos. J Biol Chem. 2018;293:5821-33.

来源：https://www.amyjet.com/products/13100-01.shtml

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艾美捷内毒素检测试剂盒基本参数和原理介绍

艾美捷内毒素检测试剂盒基本参数：

中文名称：

EndoAlert™ 内毒素检测试剂盒

英文名字：

EndoAlert™ Endotoxin Plate Kit - KMA-0100

编号：

KMA-0100

规格：

1Kit

检测范围：

0.01-10内毒素单位（EU/mL）。孵育60分钟。

将所有试剂盒试剂储存在2-8°C的黑暗中。避免在室温下长时间（超过24小时）存放试剂盒。

纯度和特异性：

该试剂盒包括：96孔板、内毒素标准品、显色裂解液（~60个反应）、LAL试剂水。

艾美捷内毒素检测试剂盒原理：

该试剂盒是一种动力学比色测定法，用于定量测定水溶液中的细菌内毒素。内毒素是一种细菌脂多糖，是主要细胞之一大多数革兰氏阴性细菌的壁成分。该试剂盒检测低水平的内毒素，因此是评估生物和环境样品完整性的有用工具。检测范围为0.01-10内毒素单位（EU/mL）。

艾美捷内毒素检测试剂盒是定量的Levin和Bang于1968年首次描述的反应版本。该测试基于酶促反应内毒素激活鲎血细胞裂解液（LAL）中的因子C，进而激活因子B。因子B激活Proclotting酶，然后激活凝血酶。无色合成物肽底物被凝块酶水解生成黄色，可以通过分光光度计，波长405nm。反应产生的颜色程度与测试样品中的内毒素，可使用标准曲线进行计算。

图：内毒素检测试剂盒-平均时间（秒）与浓度（EU/mL）样品标准曲线。

标准：浓度与平均时间：对数-对数拟合：对数（y）=A+B*对数（x）：其中A（2.86）B（-0.239）R^2（0.999）。

本品仅供研究使用，不适用于治疗或诊断应用。

来源：https://www.amyjet.com/products/KMA-0100.shtml

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中英文说明书丨艾美捷内毒素检测试剂盒

艾美捷内毒素检测试剂盒英文说明：

Background: The EndoAlert™ Endotoxin Plate Kit is a kinetic, colorimetric assay for the quantitative determination of bacterial Endotoxin in aqueous solutions. Endotoxin, a bacterial lipopolysaccharide, is one of the major cell wall components of most gram-negative bacteria. The EndoAlert™ Endotoxin Plate Kit detects low levels of Endotoxin and is therefore a useful tool to assess the integrity of biological and environmental samples. The detection ranges from 0.01 - 10 Endotoxin units (EU/mL). The EndoAlert™ Endotoxin Plate Kit is a quantitative version of the reaction first described by Levin and Bang in 1968. The test is based upon an enzymatic cascade where Endotoxin activates Factor C in Limulus Amebocyte Lysate (LAL) which in turn activates Factor B. Factor B activates Proclotting Enzyme which then activates Clotting Enzyme. A colorless synthetic peptide substrate is hydrolyzed by Clotting Enzyme to generate a yellow color which can be measured by a spectrophotometer at 405 nm. The degree of color resulting from the reaction is proportional to the amount of Endotoxin in the test sample and can be calculated using a standard curve.

Label: Unconjugated

Expiration: See kit insert for complete instructions

Storage Condition:Store all kit reagents at 2-8 °C in the dark. Avoid storing kits for extended periods (more than 24 hours) at room temperature. See kit protocol for complete details.

Synonyms: Endotoxin Test Kit, Endotoxin level, Endotoxin Detection, bacterial Endotoxin, Limulus Amebocyte Lysate (LAL)

Assay Dilutions: All assays should be optimized by the user. Recommended dilutions (if any) may be listed below

艾美捷内毒素检测试剂盒中文说明：

艾美捷内毒素检测试剂盒是一种用于定量测定水溶液中细菌内毒素的动力学比色测定法。内毒素是一种细菌脂多糖，是大多数革兰氏阴性细菌的主要细胞壁成分之一。该检测低水平的内毒素，因此是评估生物和环境样品完整性的有用工具。检测范围为0.01-10内毒素单位（EU/mL）。

艾美捷内毒素检测试剂盒基本参数：

中文名称：EndoAlert™ 内毒素检测试剂盒

英文名字：EndoAlert™ Endotoxin Plate Kit - KMA-0100

编号：KMA-0100

规格：1Kit

检测范围：0.01-10内毒素单位（EU/mL）。孵育60分钟。

将所有试剂盒试剂储存在2-8°C的黑暗中。避免在室温下长时间（超过24小时）存放试剂盒。

艾美捷内毒素检测试剂盒原理：

该是Levin和Bang于1968年shou次描述的反应的定量版本。该测试基于酶级联反应，其中内毒素激活鲎血细胞裂解物（LAL）中的因子C，进而激活因子B。因子B激活Proclotting酶，然后激活凝血酶。无色合成肽底物通过凝集酶水解以产生黄色，该黄色可通过分光光度计在405nm下测量。反应产生的颜色程度与测试样品中内毒素的量成比例，并且可以使用标准曲线计算。

来源：https://www.amyjet.com/products/KMA-0100.shtml

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艾美捷内毒素纯化树脂基本参数和原理说明

内毒素纯化树脂用于去除生物源蛋白类产品(包括多肽、抗体、多糖等)中内毒素的树脂。其原理是将修饰过的多粘菌素B连接至4%琼脂糖微球上，进行特异性去除内毒素，经纯化可将样品中内毒素降低至0.1EU/ml，且样品回收率高。

艾美捷内毒素纯化树脂基本参数：

中文名称：EndoTrap® HD 内毒素纯化树脂

英文名字：EndoTrap® HD 5

编号：LET0023

规格：5ml

温度稳定性在4°C至室温（最高35°C）范围内定期使用，缓冲液套件中包含的缓冲液（EndoTrap HD 1/1、5/1、EndoTrap-红色），提供缓冲液制备方案（EndoTrap HD）

包括套件

EndoTrap HD 1/1，5/1，EndoTrap-红色：即用柱或树脂，

再生和平衡缓冲液

EndoTrap HD：无缓冲液的树脂，准备说明

提供个人使用，可根据要求提供缓冲区

艾美捷内毒素纯化树脂是一种高效去除细菌内毒素的亲和层析树脂（脂多糖/LPS）来自含有低分子量或高分子量物质的水溶液例如蛋白质和核酸。EndoTrap可在重力作用下以柱或分批模式使用流动或在全自动液相色谱系统上。

艾美捷内毒素纯化树脂特点：

1、具有广泛的pH值和耐盐性，与钙或镁兼容的缓冲剂如TRIS、HEPES、MOPS以及PBS，如果用1mM Ca/Mg2+和1mM柠檬酸盐新鲜富集。

2、它特别适用于具有挑战性的样品和大规模内毒素例如生物制药生产过程中的去除。

3、对于EndoTrap HD，监管支持文件（RSF）和EndoTrap泄漏ELISA也可用。

来源：https://www.amyjet.com/products/LET0023.shtml

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艾美捷内毒素纯化树脂，快速无孵育步骤！

艾美捷内毒素纯化树脂背景：

在细胞转染或动物进样前，消除来自蛋白或抗体样品的内毒素为研究、疫苗或治疗用途制备的生物衍生产物中存在内毒素是一大问题，因为其对这些分子的生物响应多种多样且可能有害。从细菌培养物中纯化的蛋白中内毒素污染是由革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）外细胞膜中衍生的残留脂多糖 (LPS) 引起的。将被内毒素污染的蛋白样品转染进细胞或注入到动物宿主中，可启动强免疫反应，产生全身性炎症反应综合征 (SIRS) 和/或脓毒症。使用多粘菌素 B 和脱氧胆酸钠清除样品中内毒素的传统内毒素去除树脂还具有神经毒性和急性肾小管坏死的负面影响。

艾美捷内毒素纯化树脂是一种高效去除细菌内毒素的亲和层析树脂（脂多糖/LPS）来自含有低分子量或高分子量物质的水溶液例如蛋白质和核酸。EndoTrap可在重力作用下以柱或分批模式使用流动或在全自动液相色谱系统上。

艾美捷内毒素纯化树脂特点：

1、该内毒素纯化树脂满足工业应用的所有要求，并且可以轻松集成到/在早期或后期纯化过程中。

2、High-DefinitionMatrix还可作为预填充柱用于小规模纯化。

3、在4-9的pH值范围和50-600mM的NaCl浓度范围内，使用EndoTrap®HD去除内毒素有效。

4、快速无孵育步骤–真正的流通系统，极佳蛋白质回收率将样品损失降至最低，样品回收率高达99%，LPS变异性广泛菌株的内毒素去除，可重复使用/再生可重复使用至少三次，EndoTrap HD至少10次，内毒素去除效率损失；-包括再生缓冲液，再生物质无毒，无脱氧胆酸盐（DOC）!

*建议使用HEPES、TRIS、MOPS、MES和PIPES等缓冲液。必须避免使用柠檬酸盐缓冲液和二价阳离子螯合剂（如EDTA）

来源：https://www.amyjet.com/products/LET0023.shtml

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艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒原理&用途介绍

BrdU 作为一种胸腺嘧啶核苷的类似物（其化学结构特点是胸腺嘧啶的碱基嘧啶环上与5位C 原子连接的甲基被溴代替），像胸腺嘧啶核苷一样可掺入到细胞合成的DNA 中。当细胞处于DNA 合成期（S 期）而同时又有BrdU 存在时, 就会有BrdU 掺入新合成的DNA 中，只要细胞不消亡，这种BrdU 就在胞核的DNA 中长期存留。

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒基本参数：

中文名称：

CytoSelect BrdU细胞增殖分析ELISA试剂盒

英文名字：

CytoSelect BrdU Cell Proliferation ELISA Kit

编号：

CBA-251

规格：

96assays

保存条件：

将1000X BrdU溶液和抗BrdU单克隆抗体储存在-20ºC。将所有其他部件储存在4ºC。

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒检测原理：

当将细胞在含有BrdU的培养基中孵育时，嘧啶类似物代替胸苷掺入新合成的增殖细胞DNA中。除去标记介质后，将细胞固定，并用固定/变性溶液一步一步将DNA变性（DNA变性对于改善掺入的BrdU的可及性是必需的，以进行检测）。然后加入抗BrdU小鼠单克隆抗体，然后加入HRP偶联的二抗以检测掺入的BrdU。显色颜色的吸光度与掺入细胞中的BrdU数量成正比，并且可以与细胞增殖直接相关。

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒试剂盒优点：

1、灵敏度高、没有放射性污染，

2、可以检测的最低检测限度为50-100 个细胞，并且只检测新增殖细胞。

主要用途：

1、细胞因子、生长因子、分裂素和营养因子刺激后，监测和定量细胞增殖；

2、分析药物的细胞毒性个，如抗癌药物等；

3、分析不同成分对细胞增殖的抑制或者刺激作用

来源：https://www.amyjet.com/products/CBA-251.shtml

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中英文说明书丨艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒英文说明：

The investigation of cell cycle and DNA synthesis has been essential to many fields of science.

Traditionally a radiolabled thymidine has been used to track new DNA synthesis and cellular

proliferation. Although quite sensitive, use of radiolabled thymidine has the limitation of having to

regulate, handle and dispose of radioisotopes and often requires expensive detection equipment.

More recently, the thymidine analog 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) has been used in place of

radiolabled thymidine and is incorporated into newly synthesized DNA strands of actively proliferating cells. Following fixation and partial denaturation of cellular DNA, BrdU can be detected

immunochemically which allows for the analysis of live cell new DNA synthesis.

Assay Principle

The CytoSelect™ BrdU Cell Proliferation ELISA Kit detects BrdU incorporated into cellular DNA

during cell proliferation using an anti-BrdU antibody. When cells are incubated in media containing

BrdU, the pyrimidine analog is incorporated in place of thymidine into the newly synthesized DNA of

proliferating cells (Figure 1). Once the labeling media is removed, the cells are fixed and the DNA is

denatured in one step with a fix/denature solution (denaturation of the DNA is necessary to improve

the accessibility of the incorporated BrdU for detection). Then an anti-BrdU mouse monoclonal

antibody is added followed by an HRP conjugated secondary antibody to detect the incorporated BrdU.

The magnitude of the absorbance for the developed color is proportional to the quantity of BrdU

incorporated into cells and can be directly correlated to cell proliferation.

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒中文说明（内容）：

1.1000X BrdU溶液：一个30µL小瓶10 mM BrdU。

2.抗BrdU单克隆抗体：一瓶10µL小鼠抗BrdU抗体。

3.固定/变性溶液：一瓶20 mL。

4.抗体稀释剂：一瓶50 mL。

5.二级抗体，HRP缀合物：一个20µL小瓶。

6.10X洗涤缓冲液：一瓶100 mL。

7.基质溶液：一个12 mL琥珀瓶。

8.停止溶液：一瓶12 mL。

艾美捷BrdU细胞增殖检测试剂盒检测原理：

该试剂盒检测掺入细胞DNA的BrdU在使用抗BrdU抗体的细胞增殖期间。当细胞在含有BrdU，嘧啶类似物取代胸苷被并入新合成的DNA中增殖细胞（下图）。一旦去除标记介质，细胞就被固定，DNA就被用固定/变性溶液一步变性（需要变性DNA以改善并入的BrdU用于检测的可接近性）。然后是抗BrdU小鼠单克隆抗体加入抗体，然后加入HRP缀合的二级抗体以检测掺入的BrdU。显影颜色的吸光度大小与BrdU的量成正比并可与细胞增殖直接相关。

图：细胞选择示意图™ BrdU增殖ELISA

BrdU细胞增殖检测试剂盒中的小鼠抗BrdU 单克隆抗体可以与掺入进DNA 的结合，再加入HRP 标记的羊抗小鼠，最后通过TMB 底物液显色，其显色值高低与BrdU 掺入细胞量成正比。

相关文献：

1. Shoghi KI, Xu J, Su Y, He J, Rowland D, Yan Y, Garbow JR, Tu Z, Jones LA, Higashikubo R,

Wheeler KT, Lubet RA, Mach RH, You M.. (2013) PLoS One. 8:e74188

2. Gong F, Wang G, Ye J, Li T, Bai H, Wang W (2013) Oncol Rep. 30:2976-2982

3. Piastowska-Ciesielska AW, Kozłowski M, Wagner W, Domińska K, Ochędalski T. (2013) Arch

Med Sci. 30:739-744.

来源：https://www.amyjet.com/products/CBA-251.shtml