艾美捷人实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒解决方案

艾美捷人实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒解决方案

DNA损伤分析试剂盒，用于通过在QPCR分析后用真实的PCR定量复制的DNA来在体内和体外测量损伤的人8.8kb线粒体DNA。 

艾美捷人实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒#DD2H|Human Real-time PCR DNA Quantitation after QPCR DNA Damage Analysis Kit该DNA损伤分析试剂盒用于通过在QPCR分析后使用实时PCR定量复制的DNA来测定人体内和体外损伤的8.8 kb线粒体DNA。该试剂盒允许对多达20个样品（40个反应）进行重复分析。

人实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒内容：

▪ 含聚合酶的2X浓缩QPCR缓冲液（450µL）

▪ QPCR引物混合物【正向引物和反向引物各2μM】（225μL）

▪ QPCR检测DNA[50纳克/μL]（10μL）

▪ 5X增强剂（180μL）

▪ 8.2 kb实时标准[1ng/uL]（25μL）

▪ 实时引物混合物【正向引物和反向引物各5μM】（100μL）

计算：

使用阈值循环值（CT）和DNA创建标准曲线8.8 kb标准品中每一个的浓度（对数标度）。使用线性回归分析，根据您的CT值确定样本的DNA浓度通过PCR获得。高水平的8.8 kb产物代表较少的mtDNA损伤

Detroit R&D整套DNA损伤分析试剂盒可用于人、大鼠或小鼠的血液、细胞或组织。由于缺失和链断裂造成的DNA损伤可以用此试剂盒检测，使用微板格式的DNA分离技术，该试剂盒可以很容易地用于高通量格式。在这方面，Detroit R&D研发分析是一个很有前途的工具，因为快速，操作简单，只需要少量的测试物质。  

人实时定量PCR DNA损伤分析试剂盒相关研究：

【Cat# DD2M】: Real-Time PCR DNA Quantitation following QPCR for mouse

【Cat# DD2R】: Real-Time PCR DNA Quantitation following QPCR for rat   

来源：https://www.amyjet.com/featured/mtdna-target.shtml

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中英文介绍丨艾美捷人LR3胰岛素样生长因子-I

Human LR3 insulin-like Growth Factor-I (LR3IGF-I) is an 83 amino acid analogue of IGF-I comprising the complete human IGF-I sequence with the substitution of an Arginine for the Glutamine at position 3,plus a 13 amino acid extension peptide at the N-terminus.

Human LR3IGF-I is more potent than IGF-I in vitro and in vivo. This increased potency is due to reduced binding of LR3IGF-I to most of the IGF binding proteins which modify the biological actions of IGF-I.

Human LR3IGF-I binds to the type 1 IGF receptor with similar affinity to wild type IGF-I.LR3

IGF-I was developed by GroPep specifically for supplementation of mammalian cell culture to support the survival and proliferation of cells. It is engineered to have a higher biological potency than native IGF-I or IGF-II and has several advantages over recombinant insulin. Supplementation of cell cultures with LR3IGF-I at a much lower concentration results in equivalent or better productivity than supplementation with standard concentrations of insulin. LR3IGF-I is better able to stimulate the type I IGF receptor and thus induce a higher level of activation of intracellular signalling molecules which are responsible for promoting cell survival by inhibition of apoptosis.

Media grade LR3IGF-I is a high quality product for use in commercial cell culture.It can also be used as a research reagent at an economical cost to enable studies where higher quantities of peptide are required.

References Francis GL et al (1992) Journal of Molecular Endocrinology 8, 213-223

Yandell C et al (2004) Bioprocess International 2, 56-64

Source: Produced in E.coli.

Molecular Weight: 9110.6 ± 2 Daltons

Purity: ≥ 95 % (by SDS gel electrophoresis)

HPLC analysis: Three peaks with main peak being > 50% of total area

(Other species are micro heterogeneous forms which have biological activity)

N-terminal sequence: Analysis of 18 residues

Biological Activity: Proliferation of Chinese Hamster Ovary (CHO) cells

(EC50 ≤ 10 ng/ml)

Endotoxin: ≤ 0.1 EU/µg

Appearance: White powder freeze-dried from 0.1M acetic acid and stored under

nitrogen at a slight vacuum.

Storage/Stability: At least 2 years at 2-8°C (as a freeze dried product).

Reconstitution: Handling of GroPep IGF-I, IGF-II and IGF analogues

艾美捷LR3胰岛素样生长因子-I#GRO-AM001是IGF-I的83个氨基酸的类似物，其包含在位置3用精氨酸取代谷氨酰胺的完整人IGF-I序列，加上在N-末端的13个氨基酸的延伸肽。

人类LR3 IGF-I在体外和体内都比IGF-I更有效。这种效力的提高是由于LR3的结合IGF-I与大多数改变IGF-I生物作用的IGF结合蛋白结合。

人类LR3 IGF-I以与野生型IGF-I相似的亲和力与1型IGF受体结合。LR3型IGF-I由GroPep开发，专门用于补充哺乳动物细胞培养物支持细胞的存活和增殖。它被设计成具有比天然IGF-I或IGF-II，并且与重组胰岛素相比具有几个优点。细胞的补充含有LR3的培养物IGF-I在低得多的浓度下产生与补充标准浓度的胰岛素。LR3型IGF-I能够更好地刺激I IGF受体，从而诱导更高水平的细胞内信号分子激活负责通过抑制细胞凋亡来促进细胞存活。

LR3胰岛素样生长因子-I详细信息：

来源：产自大肠杆菌。

分子量：9110.6±2道尔顿

纯度：≥95%（SDS凝胶电泳）

HPLC分析：三个峰，主峰面积大于总面积的50%

（其他物种是具有生物活性的微异质形式）

N端序列：18个残基的分析

生物活性：中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的增殖

（EC50≤10 ng/ml）

内毒素：≤0.1 EU/µg

外观：从0.1M乙酸中冷冻干燥的白色粉末，在

在轻微真空下的氮气。

储存/稳定性：在2-8°C下至少保存2年（作为冷冻干燥产品）。

重组：GroPep IGF-I、IGF-II和IGF类似物的处理

LR3胰岛素样生长因子-I相关研究：

人LR3IGF-I（受体级）

人[Arg3]IGF-I（介质级）

人LR3IGF-I ELISA

人IGF-I（介质级）

文献参考：

Francis GL et al (1992) Journal of Molecular Endocrinology 8, 213-223 Yandell C et al (2004) Bioprocess International 2, 56-64  

来源：https://www.amyjet.com/featured/mtdna-target.shtml

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艾美捷GMP IL-2（白细胞介素-2）数据示例方案

GMP IL-2（白细胞介素-2）背景：

白细胞介素-2（IL-2）是一种白细胞介素，是免疫系统中的一种细胞因子信号分子。它是一种15.5-16 kDa的蛋白质，可调节负责免疫的白细胞（白细胞，通常是淋巴细胞）的活性。

IL-2是人体对微生物感染的自然反应的一部分，也是区分外来（“非自我”）和“自我”的一部分。IL-2通过与淋巴细胞表达的IL-2受体结合来介导其作用。

艾美捷GMP IL-2（白细胞介素-2）#C01004-GMP详细信息：

活性

通过其诱导CTLL-2细胞增殖的能力来衡量。教育署50这种效果是<0.2纳克/毫升。

重组人IL-2的比活性约为>2.5×107IU / mg.

通过其在NK细胞中诱导增殖的能力来衡量。教育署50这种效果为 <46 ng/mL。

纯度

>98%，由SDS-PAGE分析确定。通过Ni-NTA色谱法纯化。

配方

将蛋白质从含有1X PBS，pH 8.0的溶液冻干。

复溶建议在无菌H中复溶

冻干蛋白2O至浓度不低于100μg/ mL，并将储备溶液孵育至少20分钟以确保充分重新溶解。

储存冻干蛋白应储存

在-20°C。 本产品在收到后可稳定保存一年，并按照说明进行处理和储存。复溶后，蛋白质等分试样应储存在-20°C或-80°C。 避免反复冻融循环。

注意

请在蛋白质复溶后一个月内使用完毕。

GMP IL-2（白细胞介素-2）数据：

图1：通过其诱导CTLL-2细胞增殖的能力来衡量。用于此效果的 ED50 为 <0.2 ng/mL。重组人IL-2的比活性约为>2.5×107IU/mg。

图2：为了证明GMP IL-2的批次间一致性，检查了三个不同批次的活性并绘制在同一张图上。

来源：https://www.amyjet.com/products/CYZ-C01004-GMP.shtml

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艾美捷Fluo-3, 5NH4+（50010）解决方案

Fluo-3, 5NH4+是不透膜的，但可以通过显微注射或刮涂加载到细胞中。

Kd ： 450纳米

λ Ex /λ Em（低或高 [Ca 2+ ]）= 506/526 nm

ε (506 nm) = 86,000 M -1 cm -1

可溶于 DMSO 和水的橙红色固体（pH >6）

储存于 4°C 并避光，尤其是在溶液中时

C 36 H 25 Cl 2 N 7 O 13

分子量：854.7

[134907-84-9]

基于 BAPTA 的离子指示剂（如 Fluo-3）已被EDC/EDAC（目录号 59002）原位固定。指示染料的固定可用于下游免疫荧光和 IHC 研究 ( Cell Calcium 1997, 21(3), 175 )。

由于指示剂不与细胞成分共价结合，因此它可以通过有机阴离子转运蛋白主动从细胞中流出。流出速率随温度增加，并且可能因细胞类型而异，导致保留时间从几分钟到几小时不等。在细胞中使用指示剂的实验通常在加载后一到两个小时内进行，但如果需要，可以重新加载具有指示剂的细胞。有机阴离子转运蛋白抑制剂丙磺舒 (#50027)可用于减缓指示剂从细胞中流出的速度。

艾美捷Fluo-3, 5NH4+#50010属性：

CAS号：134907-84-9

细胞渗透性：膜不透水

激发/发射：506/526 纳米

指标类型：非比例

Fluo-3, 5NH4+相关研究：

dUTP CF® Dye Conjugates

TUNEL Assay Apoptosis Detection Kit

Biotin-11-dUTP, 1 mM Solution

Cyanine Dye dUTP

5-Aminoallyl-UTP, Sodium Salt, 10 mM Solution

BAPTA, AM Ester

4-Bromo A-23187, Free Acid

Fluo-4 AM Ester

来源：https://www.amyjet.com/products/BTM-50010.shtml

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艾美捷Fluo-4, AM ester（50018）解决方案

Fluo-4 的膜渗透 AM 酯形式，可通过孵育进入细胞。由于 AM 酯的水溶性相对较低，温和的去污剂Pluronic® F-127（目录号 59004）通常用作分散剂以促进细胞负载。Fluo-4, AM ester本身不与 Ca 2+结合，但一旦进入细胞内，它很容易被内源性酯酶水解成 Fluo-4。Fluo-4, AM ester通常用于在高通量药物筛选中测量细胞内钙。

Fluo-4 是 Fluo-3 的类似物，其中两个氯取代基被氟取代，这导致 488 nm 处的荧光激发增加，从而产生更高的荧光信号。Fluo-4 在 494 nm 处具有最大吸收，因此可被氩离子激光激发。Fluo-4 在没有 Ca 2+存在的情况下基本上是非荧光的，但在 Ca 2+结合时荧光增加至少 100 倍。此外，由于 Fluo-4 比 fura-2 和 indo-1 更弱地结合 Ca 2+（更高的 Kd），因此它对于测量Ca 2+尖峰期间的高瞬时 Ca 2+浓度更有用。

艾美捷Fluo-4, AM ester#50018可用于通过荧光显微镜、流式细胞术或荧光酶标仪检测细胞内游离钙。

基于 BAPTA 的离子指示剂（如 Fluo-4）已被EDC/EDAC（目录号 59002）原位固定。指示染料的固定可用于下游免疫荧光和 IHC 研究 ( Cell Calcium 1997, 21(3), 175 )。

由于指示剂不与细胞成分共价结合，因此它可以通过有机阴离子转运蛋白主动从细胞中流出。流出速率随温度增加，并且可能因细胞类型而异，导致保留时间从几分钟到几小时不等。在细胞中使用指示剂的实验通常在加载后一到两个小时内进行，但如果需要，可以重新加载具有指示剂的细胞。有机阴离子转运蛋白抑制剂丙磺舒 (#50027)可用于减缓指示剂从细胞中流出的速度。

Fluo-4, AM ester相关参数：

可溶于DMSO的橙红色固体

-20°C 储存并避光，尤其是在溶液中时

λ Ex /λ Em（含 Ca 2+）：494/506 nm（水解后）

缓冲液中 Ca 2+的K d：~335 nM（水解后）

C 51 H 50 F 2 N 2 O 23

分子量：1096.95

[273221-67-3]

Fluo-4, AM ester属性：

细胞渗透性：透膜剂

激发/发射：494/516 nm（水解后）

指标类型 ：非比例

CAS号：273221-67-3

来源：https://www.amyjet.com/products/BTM-50018.shtml

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NET的测量方案——艾美捷NETosis检测试剂盒

中性粒细胞是人们抵御微生物病原体的第一道防线，但也能介导组织损伤和无菌性炎症。在中性粒细胞携带的各种抗菌武器中，释放中性粒细胞细胞外陷阱(NETs)以限制病原体传播和杀死微生物。

在宿主防御反应的前线，中性粒细胞抗菌功能已适应对抗不同来源和程度的感染和损伤。中性粒细胞胞外陷阱(NETs)的网状DNA结构的释放是中性粒细胞阻止病原体传播或处理更大体积微生物的重要机制。

中性粒细胞杀菌主要通过两种方式：一种是通过直接吞噬病原体的方式，这也是认识最早，较为经典的方式；另一种是中性粒细胞坏死或者凋亡后会形成一种特殊的结构，称为NETs（neutrophil extracellular traps），它是中性粒细胞重要的杀菌利器，存在于脓液中，中性粒细胞虽然死了，但是它却能通过这种方式继续杀灭细菌.

NETosis检测试剂盒，可对于NET的测量-衍生中性粒细胞弹性蛋白酶。

艾美捷Cayman NETosis检测试剂盒#601010为体外研究NETosis过程提供了一种简单快速的方法。值得注意的是，Cayman的NETosis检测试剂盒不依赖于NETs的DNA成分，因为DNA释放可以独立于NETosis发生。在该试剂盒中，用PMA或钙离子载体（均包括在内）刺激原代中性粒细胞释放NETs。如图1所示，未结合的中性粒细胞弹性蛋白酶在NET生成后被冲走。在通过S7核酸酶消化NET DNA之后，将含有中性粒细胞弹性蛋白酶的上清液添加到底物中，该底物被中性粒细胞弹性蛋白酶选择性切割以产生吸收405nm光的4-硝基苯胺产物。提供足够量的每种试剂来测试和分析多达80个单独的样品或24个一式两份的样品。

NETosis检测试剂盒特点：

1、诱导和检测NET形成 体外

2、基于弹性蛋白酶的读出

3、非dsDNA读出消除了DNA的假阳性

4、适应多种物种

NETosis检测试剂盒文献：

Millrud, C.R., K?gedal, ?., Georén, S.K., et al. NET-producing CD16high CD62Ldim neutrophils migrate to tumor sites and predict improved survival in patients with HNSCC. Int. J. Cancer 140(11), 2557-2567 (2017).

Yizengaw, E., Getahun, M., Tajebe, F., et al. Visceral leishmaniasis patients display altered composition and maturity of neutrophils as well as impaired neutrophil effector functions. Front. Immunol. 7, 517 (2016).

Tibrewal, S., Ivanir, Y., Sarkar, J., et al. Hyperosmolar stress induces neutrophil extracellular trap formation: implications for dry eye disease. Invest. Opthalmol. Vis. Sci. 55(12), 7961-7969 (2014).

来源：https://www.amyjet.com/featured/Cayman-NETosis.shtml

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艾美捷中性粒细胞胞外捕获物（NET）检测的制备方法

中性粒细胞胞外陷阱 (Neutrophil Extracellular Traps, NETs) 可由肿瘤诱导形成，并能通过多种方式促进肿瘤转移。前不久，Prof. Wei ZhuoMs. Qian Chen，Ms. Lu Zhang 和 Ms. Xiang Li 就 NETs 在肿瘤转移中的作用进行了综述，并发表在 Cancers 期刊上。文章系统地介绍了 NET 在肿瘤微环境中形成、在肿瘤转移中的新作用，以及潜在的临床应用价值。

肿瘤诱导中性粒细胞胞外陷阱（NETs）形成

起初研究者们认为，在多种刺激 (如病原微生物及其产物、手术压力、缺氧等) 下，会引发 NETs，而现在对多种肿瘤 (包括乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、食管胃腺癌和肺癌等) 的研究都证明了肿瘤能创造促进 NETs 释放的系统性微环境。

事实上，在没有其他任何刺激的情况下，肿瘤自身便能诱发 NETs 形成，从而促进转移进展。该作用可能部分归因于原发瘤精心制作的细胞因子。如肿瘤产生的粒细胞集落刺激因子 (G-CSF) 和白介素8 (IL-8)，能与 GROα 或 GROβ 相互配合，从而促使 NETs 形成。此外，肿瘤来源的外泌体能诱导 NETs 释放，而 NETs 也可以招募肿瘤来源的外泌体。

艾美捷中性粒细胞胞外捕获物（NET）检测#601010提供了一种不依赖于DNA的检测NET形成的方法，通过一种弹性酶的底物，来检测中性粒细胞弹性酶的酶活，从而反映NET的形成.

Cayman NETosis检测试剂盒为体外研究NETosis过程提供了一种简单快速的方法。值得注意的是，Cayman的NETosis检测试剂盒不依赖于NETs的DNA成分，因为DNA释放可以独立于NETosis发生。在该试剂盒中，用PMA或钙离子载体（均包括在内）刺激原代中性粒细胞释放NETs。如图1所示，未结合的中性粒细胞弹性蛋白酶在NET生成后被冲走。在通过S7核酸酶消化NET DNA之后，将含有中性粒细胞弹性蛋白酶的上清液添加到底物中，该底物被中性粒细胞弹性蛋白酶选择性切割以产生吸收405nm光的4-硝基苯胺产物。提供足够量的每种试剂来测试和分析多达80个单独的样品或24个一式两份的样品。

中性粒细胞胞外捕获物（NET）检测试剂制备：

1.NET测定缓冲液（试剂盒中未包含的基础培养基）将500 ml RPMI 1640基础细胞培养基（未提供）与5 g牛血清白蛋白测定试剂（试剂盒编号400086）和500 ul氯化钙（1M）测定试剂（溶剂盒编号400087）混合制备NET测定缓冲溶液。NET测定缓冲液不是用来杀菌的，也不需要在组织培养罩中制备或使用。在细胞刺激和添加核酸酶之前，将NET测定缓冲溶液预热至37℃，以确保快速激活和随后的核酸酶活性。储存未使用的NET分析缓冲液、无菌过滤器、等分试样，并储存在-20℃。注意：血清中含有能消化NETS的DNASE，应避免使用。

2.PMA（1 mm）检测试剂-（项目编号400145）使用前，将1 ul PMA（1MM）检测试剂添加到5 ml预热的NET检测缓冲液中，制成10X工作储备溶液注：PMA是一种潜在致癌物。处理此解决方案时，请穿戴适当的防护措施并谨慎使用。

3.A23187（25 MM）含量测定试剂-（项目编号400085）使用前，将10 ul A23187【25 MM】含量测定试剂加入1 ml预热的净含量测定缓冲液中，制成10X工作储备溶液。

4.S7核酸酶测定试剂（项目编号601011对于一个24孔板，在使用前立即在12 ml预热的NET测定缓冲液中稀释12 ul S7核酸酶检测试剂（供应量为15000 U/ml），制成15 U/ml工作溶液

5.NET含量测定中性粒细胞弹性蛋白酶底物（项目编号601013）小瓶中含有15 MM N-甲氧基琥珀酰-ala-la-pro-val对硝基苯胺，这是中性粒细胞弹性蛋白酶的底物。为了测定24个样品，一式两份，并使用标准曲线，将225 UI NET测定中性粒细胞弹性蛋白酶底物稀释到6.5 ml PBS中（1:30稀释）。

来源：https://www.amyjet.com/products/601010-1.shtml