艾美捷Bio-Helix IRIS11预染蛋白Markers简单介绍

艾美捷Bio-Helix IRIS11预染蛋白Markers简单介绍

预染蛋白Marker是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦联，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了实验，可以帮助我们在电泳时、电泳后以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率。由于预染蛋白Marker是与染料共价耦联，所以在不同的缓冲条件下电泳时迁移特性可能会发生某些变化，可能导致一些偏差，所以不太适合精确定位蛋白。

不过多数情况下Marker的条带未必能和我们的目标蛋白完全一样，我们得到的也不过是一种相对Marker指示的参考大小，最后都需要Western来定性，所以如果不是要区分大小相近的条带，预染Marker还是很好用的，而且也可以和未染色的蛋白标准一起使用。

艾美捷Bio-Helix IRIS11预染蛋白质Markers(11条预染条带，3-260 kDa)是11种预染色蛋白的组合，分子量为3至260kDa。11种重组蛋白与蓝色发色团共价偶联，而2条70kDa的红色带15kDa的绿色带和60kDa的新设计的孔雀绿色带用作参考带。

IRIS11预拉伸蛋白质阶梯跟踪SDS聚丙烯酰胺过程中蛋白质的大小和分离凝胶电泳、近似靶蛋白大小并验证PVDF上的蛋白质转移效率，尼龙或硝化纤维膜。

艾美捷Bio-Helix IRIS11预染蛋白Markers组分：

IRIS11 Prestained Protein Ladder  500μl x 1 vial

艾美捷Bio-Helix IRIS11预染蛋白Markers存储缓冲区：

0.2～0.4 mg/ml的每一条蛋白质储存在含有：20 mM三磷酸盐的溶液混合物中pH 7.5时，2%十二烷基硫酸钠、0.2mM二硫苏糖醇、3.6M尿素和15%（v/v）甘油。

参考各种电泳条件下的IRIS11预拉伸蛋白质梯形图：

重要注意事项：

每种蛋白质的分子量（kDa）在每种电泳条件，应考虑其他数据以进行更准确的调整。

来源：https://www.amyjet.com/products/BHL-PMI11-0500.shtml

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Bio-Helix 艾美捷IRIS11预染蛋白Markers基参及相关研究

IRIS11预染色蛋白梯是11种分子量为3至60kDa的预染色蛋白的组合。11种重组蛋白与蓝色发色团共价偶联，而2条70kDa和260kDa的红色带、一条15kDa的绿色带和一条新设计的60kDa的孔雀绿色带作为参考带。IRIS11预拉伸蛋白质阶梯在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中跟踪蛋白质的大小和分离，接近目标蛋白质大小，并验证PVDF、尼龙或硝化纤维膜上的蛋白质转移效率。

艾美捷Bio-Helix IRIS11预染蛋白质Markers(11条预染条带，3-260 kDa)是11种预染色蛋白的组合，分子量为3至260kDa。11种重组蛋白与蓝色发色团共价偶联，而2条70kDa的红色带15kDa的绿色带和60kDa的新设计的孔雀绿色带用作参考带。

艾美捷Bio-Helix IRIS11预染蛋白Markers基本参数：

中文名称：IRIS11 预染蛋白质ladder(11条预染条带，3-260 kDa)

英文名字：IRIS11 Prestained Protein Ladder (11 pre-stained bands, 3-260 kDa)

编号：BHL-PMI11-0500

规格：500ul

保存建议：在25°C下可稳定达2周。在4°C下可稳定达3个月。在-20°C下可稳定运行24个月。

艾美捷Bio-Helix IRIS11预染蛋白Markers相关研究：

UNveil Unstained Protein Ladder（10 to 200 kDa） PMU12-0500

IRIS9 Prestained Protein Ladder（15 to 180 kDa） PM009-0500

IRIS9 Plus Prestained Protein Ladder  PMI09-0500

来源：https://www.amyjet.com/products/BHL-PMI11-0500.shtml

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艾美捷 DetergentOUT GB-S10去垢剂的特点和多种应用

去垢剂，亦有称为清洁剂，主要成分是表面活性剂(部分场合即特指表面活性剂，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取中应用的较多)，根据实际需求有时也会包括研磨剂，pH调节剂，酸，硬水软化剂，氧化剂，酶，发泡剂，增白剂、稀释剂等多种成分。

在蛋白质提取和样品制备过程中，去垢剂对于蛋白质的溶解性是必不可少的，特别是在处理疏水蛋白质时。但是，高浓度的去垢剂会影响蛋白样本的酶联免疫吸附分析（ELISA）、等电聚焦电泳分析(IEF), 以及蛋白酶对蛋白的消化，甚至在质谱分析时抑制肽电离。如果你也从事蛋白质组学研究，是否也受到去垢剂的困扰，有时候需要它，却又常常对它无可奈何！  

艾美捷 DetergentOUT GB-S10去垢剂去除柱子和树脂专门设计用来去除蛋白或多肽样本中所含有的去垢剂。GB-S10树脂能够从蛋白水溶液和多肽样本中去除未结合的阴离子，非离子或两性离子的去垢剂 (例如 SDS, Triton X-100或CHAPS等)，同时对于蛋白样本的损失也非常小。

艾美捷 DetergentOUT GB-S10去垢剂特点：

1、离心式柱简单易用

2、快速去除游离的去垢剂

3、适用于阴离子、非离子和两性离子去垢剂的去除

4、最小的样品损失

5、样品体积范围从10ul到1250ul  

艾美捷DetergentOUT GB-S10去垢剂应用：

1、从蛋白质和肽溶液中去除去垢剂

2、质谱法检测肽片段

3、增强质谱光谱

4、质谱样品制备的理想方式&蛋白下游分析和应用前处理

图1：去垢剂增强质谱光谱。5ug/ul蛋白混合物(BSA，细胞色素C和磷酸化酶B)溶于水中(图A)，添加去垢剂0.5% CHAPS(图B和C)。含有去垢剂CHAPS的样品用去垢剂GBS10处理，与未经去垢剂GBS10处理的样品(图C)的质谱光谱进行比较。

图2：经去垢剂GBS10处理后，样本去垢剂去除率和蛋白质回收率的比较

来源：https://www.amyjet.com/featured/DetergentOUT.shtml

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高亲和力丨艾美捷DetergentOUT GB-S10去垢剂研究

在蛋白质提取和样品制备过程中，尤其是在处理疏水性蛋白质时，洗涤剂对蛋白质的溶解度至关重要。蛋白质样品中高浓度洗涤剂的存在会损害ELISA、IEF、蛋白质的蛋白酶消化，并在质谱分析时抑制肽电离。

艾美捷DetergentOUT GB-S10去垢剂的特点是研究级洗涤剂结合树脂，对大多数洗涤剂具有高亲和力，对蛋白质和肽具有低亲和力。洗涤剂DetergentOUT GBS10是在ELISA、IEF、蛋白酶消化蛋白质和肽电离（通过质谱分析）之前去除洗涤剂的理想选择。

DetergentOUT GBS10去垢剂有四种旋转格式柱尺寸或单独作为树脂提供。柱规格为：

艾美捷DetergentOUT GBS10去垢剂以最小的样品损失从水性蛋白质和肽样品中去除游离的、未结合的阴离子、非离子或两性离子洗涤剂（如SDS、Triton®X-100或CHAPS），以便通过质谱法（图1和2）和其他技术进行下游分析。也可提供96孔旋转板格式，用于处理多达96个样品。

DetergentOUT 研究表明，GBS10柱与DI-QTOF和LC-MS/MS完全兼容（见参考文献）。DetergentOUT的使用™ GBS10柱显著增加了检测到的肽谱的数量。此外，洗涤剂DetergentOUT GBS10柱对洗涤剂具有很高的结合能力，每毫升沉降树脂含有6毫克SDS和14毫克Triton®X-100。

艾美捷DetergentOUT GBS10去垢剂参考文献：

Ito-Kureha, T et al (2020) Nat. Comm. doi.org/10.1038/s41467-020-19975-4

Haddock, E. and Feldmann, F. (2017) Validating the Inactivation Effectiveness of Chemicals on Ebola Virus. Methods Mol Biol. 1628:251

Srivastasva, O.P. et al (2017) Post-Translationally Modified Human Lens Crystallin Fragments Show Aggregation in vitro. Biochemistry and Biophysics Report. http://dx.doi.org/10.1016/j.bbrep.2017.01.011

Chiu, J. et al (2016) Knockout of a difficult-to-remove CHO host cell protein, lipoprotein lipase, for improved polysorbate stability in monoclonal antibody formulations.Biotechnol Bioeng. DOI: 10.1002/bit.26237

Haddock, E. et al (2016) Effective Chemical Inactivation of Ebola Virus. Emerg Infect Dis. Vol 22:7.

Min, L. et al (2015) Electrophoresis. DOI: 10.1002/elps.201400579

Valente, K. N. et al (2014) Biotechnol Bioeng. DOI: 10.1002/bit.25515

Hou, S. et al (2013) Methods. 61:269

Hashii, N. et al (2005) Proteomics. 5:4665

Higgins, D. et al (2005) Anitmicrob. Agents Chemother. 49:1127

来源：https://www.amyjet.com/featured/DetergentOUT.shtml

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艾美捷EndoGrade卵清蛋白注意事项说明

卵清蛋白是动物模型中研究最广泛的蛋白质之一气道高反应性（AHR）模型过敏原。卵清蛋白是一种糖蛋白鸡蛋清的成分。市售卵清蛋白通常被内毒素（脂多糖/LPS）污染并且可以在炎症的第一步的体外测定中充分激活内皮细胞。LPS是一种强效和多效性炎症剂。因此，LPS污染伪造了过敏研究和免疫实验。静脉注射LPS阈值水平药物给药设定为5EU/kg体重。满足体内（如注射、雾化）和体外（如增殖）的确切要求LIONEX提供的EndoGrade®卵清蛋白。

艾美捷EndoGrade卵清蛋白化学性质：

来源鸡蛋清

同义词Plakalbumin、过敏原Gal d 2、Gal d II

制备通过离子交换、结晶从蛋清制备

纯度>98%

内毒素水平<0.1 EU/mg*

微生物污染<10 cfu/mg

分子量~45 kDa

消光系数0.7 ml mg-1 cm-1

水中最大溶解度20 mg/ml

CAS编号9006-59-1

形式冻干，无盐

储存/保质期冻干EndoGrade®卵清蛋白在2-8°C条件下储存，直至规定的有效期。

如果在-20°C下储存，重组EndoGrade®卵清蛋白可稳定6个月。

艾美捷EndoGrade卵清蛋白注意事项：

仅供实验室和研究使用。不用于药物、家庭或其他用途。

1、用无内毒素的水和无内毒素的材料制备溶剂（如H2O、PBS）。不含内毒素的EndoGrade®水和EndoGrad®玻璃试管。

2、使用的所有材料，如容器、移液管尖端和溶剂，必须不含内毒素。玻璃器皿因为热处理（200°C，4小时或250°C，1小时）可破坏内毒素。塑料材料应在至少1 M NaOH中脱气过夜（6-12小时），然后清洗用不含内毒素的水和空气干燥。

3、EndoGrade®小瓶在真空下密封；慢慢打开插头，避免分散。

4、重构过程中避免接触塞子。将重组卵清蛋白转移到新的无内毒素容器；打开容器时要小心，避免交叉污染。

5、轻轻混合以溶解卵清蛋白，避免起泡。应使用重组卵清蛋白立即建议将重组卵清蛋白快速冷冻保存（-20°C）并使用6个月内完成。

6、储存期间，卵清蛋白溶液中可能会出现纤维聚集。这些不会影响产品质量。它们可以通过离心或过滤（0.2µm无菌过滤器）去除。

来源：https://www.amyjet.com/products/LET0027.shtml

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艾美捷EndoGrade卵清蛋白重组示例说明

卵清蛋白是一种优质蛋白质，占蛋清蛋白总量的 54%-69%，卵清蛋白是典型的球蛋白，分子量为 44.5k Da，属含磷糖蛋白，含有四个自由巯基、385 个氨基酸残基。这些氨基酸残基相互缠绕折叠形成具有高度二级结构的球型结构，大部分为α-螺旋和β-折叠。卵清蛋白中心有 1 个二硫键和 4 个巯基，当加热时暴露出来，通过分子间相互作用使卵清蛋白胶体结构变得更稳定。

艾美捷EndoGrade卵清蛋白25mg 编号：LET0027 冻干，不含盐 内毒素水平：< 0.1 EU/mg；储存在2-8°C（冻干）或-20°C（在溶剂中复原）。

艾美捷EndoGrade卵清蛋白重组示例：

根据所需的应用（例如注射、雾化或增殖测定）在相应的溶剂体积中冻干卵清蛋白。

Ovalbumin    Solvent volume    Concentration

25 mg    2.5 ml    1.0% (w/v)

25 mg    5.0 ml    0.5% (w/v)

25 mg    10.0 ml    0.25% (w/v)

1 g    100 ml    1.0% (w/v)

艾美捷EndoGrade卵清蛋白：（目录号：LET0027、LET0028、LEP0029）所需材料：

•不含内毒素的溶剂，如EndoGrade®水

•不含内毒素的容器，如EndoGrade®玻璃试管LIONEX相关 EndoGrade®无内毒素附件

•EndoGrade®水-用于无内毒素重组和试剂稀释的超纯水

•EndoGrade®玻璃试管-带螺旋帽的无内毒素硼硅酸盐玻璃试管 EndoTrap®内毒素清除系统

•EndoTrap®HD-用于研究和生物制造的内毒素特异性亲和色谱

•EndoTrap®红-磷酸盐和螯合剂缓冲液的内毒素特异性亲和色谱

来源：https://www.amyjet.com/products/LET0027.shtml

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艾美捷Cas9核酸酶的化学性质和应用说明

CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御系统。CRISPR/Cas9系统通过将入侵噬菌体和质粒DNA的片段整合到CRISPR序列中，并利用相应的CRISPR RNAs （crRNAs）来指导Cas9蛋白对同源序列的降解，从而提供免疫性。人工改造过的Cas9/sgRNA系统通过sgRNA（short guide RNA）引导Cas9蛋白识别并剪切带有sgRNA靶点的双链DNA，可用于基因敲除和精确编辑DNA等操作。

艾美捷Cas9核酸酶——在大肠杆菌中表达的重组化脓性链球菌Cas9（wt）蛋白。

艾美捷Cas9核酸酶化学性质：

形式：液体

制备方法：E。大肠杆菌表达系统

纯度：≥ SDS-PAGE显示95%

活性：20 nM CRISPR/Cas9-C-NLS核酸酶在37℃下孵育1小时，通过琼脂糖凝胶电泳测定，底物DNA的消化率为90%。

推荐用途：CRISPR基因组编辑

最佳工作稀释度应由最终用户确定。

储存缓冲液：在10mM Tris、300mM NaCl、0.1mM EDTA、1mM DTT、50%甘油PH 7.4中

储存说明：在-20°C下储存。等分以避免反复冷冻和解冻。

艾美捷Cas9核酸酶应用：

CRISPR基因组编辑

Electrophoresis

图：用Cas9核酸酶进行电泳DNA切割分析。输入DNA是EcoRV线性化的pUC57质粒DNA。（1） DNA+gRNA（2）DNA+gRNA+10 ng Cas9（3）DNA+g RNA+25 ng Cas9

来源：https://www.amyjet.com/products/P7051.shtml

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艾美捷nickases-Cas9内切酶裂解试验展示

核酸内切酶（endonuclease）在核酸水解酶中，为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸的酶，与核酸外切酶相对应。从对底物的特异性来看，可分为DNaseⅠ、DNaseⅡ等分解DNA的酶；RNase、RNaseT1等分解RNA的酶。

艾美捷nickases-Cas9内切酶——在大肠杆菌中表达的高度纯化的突变蛋白，具有来自化脓链球菌的突变Cas9基因。

艾美捷nickases-Cas9内切酶化学性质：

宿主：大肠杆菌

形式：液体

制备方法：大肠杆菌表达系统

质量控制测试：裂解试验

图：裂解产物在1%琼脂糖凝胶上溶解。输入DNA是pUC57质粒DNA（OC，开环；LIN，线性化；SC，超螺旋）。

推荐用途：CRISPR基因组编辑

最佳工作稀释度应由最终用户确定。

储存缓冲液：在10mM Tris、300mM NaCl、1mM DTT、pH7.4（50%甘油）中。

储存说明：在-20°C下储存。等分以避免反复冷冻和解冻。

艾美捷nickases-Cas9内切酶应用：

CRISPR基因组编辑

来源：https://www.amyjet.com/products/P7057.shtml

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艾美捷CpG-A DNA，人/小鼠的功能和应用

ODN 2216是一类CpG-a寡脱氧核苷酸（ODN）的原型，也称为“D”型ODN，包含一个磷酸二酯（PO）骨架。它对激活NK细胞和诱导浆细胞样树突状细胞（PDC）前体中IFN-α的产生特别有效。

脊椎动物的免疫系统已经进化出先天免疫防御模式识别受体（PRRs），它检测细菌DNA中的非甲基化胞嘧啶磷酸鸟嘌呤（CpG）基序。CpG基序的细胞激活通过Toll信号通路发生。Toll样受体-9（TLR9，CD289）似乎是CpG DNA受体的主要成分，通过与CpG DNA直接结合而起作用，这触发细胞信号通路的诱导，包括丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和NFκB，从而刺激免疫系统的各种细胞。人TLR9在B细胞和PDC中表达。小鼠也在髓系隔室中表达TLR9。激活TLR9的最佳序列因物种而异。合成ODN含有模仿细菌DNA免疫刺激作用的CpG DNA基序，因此可以用作免疫保护剂、疫苗佐剂和抗过敏剂。CpG ODN还影响免疫耐受和自身免疫。不同类型的CpG ODN的特征在于，每种都对免疫反应有不同的影响：CpG-A（“D”型）、CpG-B（“K”型）和CpG-C。

CpG-A ODN的特征在于在5'和3'端具有磷酸（PS）键的多-G基序（促进细胞摄取）和ODN中心含有PO回文CpG的序列。CpG-A ODN在PDC中诱导大量IFN-α（与CpG-B不同），导致NK细胞和γ-δT细胞中的强激活和IFN-γ产生，但不能激活B细胞。暴露于CpG-A引发的细胞因子环境的人单核细胞可以分化为树突状细胞。

CpG-a的原型序列是20-mer ODN 2216，其模拟PDC的病毒感染，并能够调节人和小鼠的免疫应答。其序列如下：5'-gggGGGACGATCGTCgggggG-3'。小写字母表示PS连接，大写字母表示碱基的PO连接3'，粗体字母表示CpG二核苷酸。

艾美捷CpG-A DNA，人/小鼠可用于体外生物测定以激活细胞。此外，CpG-A DNA可以用作免疫调节剂。

艾美捷CpG-A DNA，人/小鼠化学性质：

类型：LPS和配体

规格：200 nmol

制剂约200 nmol冻干、纯化的20-mer CpG ODN。确切数量在标签上标明。内毒素水平无法检测。通过吸取蒸馏水或去离子水（体积取决于使用的浓度）重新配制小瓶。

使用对于体外刺激，可使用0.05至3μM。建议用户测试试剂并确定自己的最佳浓度。

储存和稳定性：冻干产品应在4°C下储存。将储备溶液储存在-20°C的等分试样中。反复的冷冻和解冻循环将导致活性丧失。在推荐的储存条件下，产品可稳定一年。

用途：对于体外刺激，可使用0.05至3μM。建议用户测试试剂并确定自己的最佳浓度。

艾美捷CpG-A DNA，人/小鼠相关文献：

1. Krieg, A; CpG motifs in bacterial DNA and their immune effects. Annu Rev Immunol 2002, 20: 709

2. Krug, A et al; CpG-A oligonucleotides induce a monocyte-derived dendritic cell-like phenotype that preferentially activates CD8 T cells. J Immunol 2003, 170: 3468

3. Huijbregts, R et al; Hormonal Contraception and HIV-1 Infection: Medroxyprogesterone Acetate Suppresses Innate and Adaptive Immune Mechanisms. Endocrinology 2012, 154:1282

4. Chen, J et al; CpG oligodeoxynucleotide induces bone marrow precursor cells into myeloid-derived suppressor cells. Mol Med Rep 2013, 8:1149

5. Li, H et al; Interferon-induced mechanosensing defects impede apoptotic cell clearance in lupus. J Clin Inv 2015, 125:2877

6. Michel, K et al; Effect of hormonal contraception on the function of plasmacytoid dendritic cells and distribution of immune cell populations in the female reproductive tract. J Acquir Immune Defic Syndr 2015, 68:511

来源：https://www.amyjet.com/products/HC4037.shtml

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艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒使用说明

肿瘤坏死因子-α

肿瘤坏死因子-α（TNF-α，也称为TNF-α、TNF-a、TNF-a和肿瘤坏死因子α）由许多不同的细胞类型产生，例如单核细胞、巨噬细胞、T细胞和B细胞。TNF-α的许多作用包括保护细菌感染、细胞生长调节、免疫系统调节和感染性休克。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒非常适合需要方便、灵敏测定的用户。该试验旨在计数分泌小鼠TNF-α的细胞。该试剂盒包括预涂有单克隆抗体、生物素化检测抗体、链亲和素ALP和即用BCIP/NBT加底物的ELISpot板。预涂板可缩短化验时间，并将可变性降至最低。该小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒也可与Streptavidin HRP和TMB底物一起使用。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒基本信息：

应用程序：ELISpot

反应性：老鼠

组分：

生物素化检测mAb（MT11B10）

链亲和素ALP

基板（BCIP/NBT plus）

2个预涂MSIP白板（mAbs MT1C8/23C9）

尺寸：2块板

图：将小鼠脾细胞（50000个细胞/孔）与LPS或仅培养基孵育过夜，并通过ELISpot分析分泌TNF-α（TNF-α）的细胞数量。

艾美捷小鼠肿瘤坏死因子α-ELISpot试剂盒相关文献：

Chen, G., et al. (2019). Aberrant DNA methylation of mTOR pathway genes promotes inflammatory activation of immune cells in diabetic kidney disease. Kidney Int.

Chida, J., et al. (2018). Prion protein protects mice from lethal infection with influenza A viruses. PLoS Pathog.

相关研究：

3511-1H-6 ELISA Flex: Mouse TNF-α (HRP) for 6 plates

3511-4HPW-2 ELISpot Plus: Mouse TNF-α (HRP) 2 plates

来源：https://www.amyjet.com/products/3511-4APW-2.shtml