PMA（单叠氮丙啶）—高亲和力光反应性DNA结合染料

PMA（单叠氮丙啶）—高亲和力光反应性DNA结合染料

PMA（单氮丙啶）是一种光反应性 DNA 结合染料，用于细菌、病毒和真菌等微生物的活力 PCR （v-PCR）。PMA有1毫克冻干固体或20 mM水溶液。还可以尝试PMAxx（™ 40069），这是PMA的优越替代品。

使用 qPCR 选择性检测活细胞：

在数百种出版物中得到验证

死细胞特异性染料，与DNA结合

光活化后共价附着在DNA上

可提供 1 mg 冻干固体溶液或 20 mM 水溶液

λ_Abs= 464 nm（光解前）;λ_Abs/λ_Em= ~510/~610 nm（光解后带有 DNA/RNA）

艾美捷PMA（单叠氮丙啶）染料属性：

#40019、#40013

活性染料 PMA

分子量 511

激发/发射 Abs = 464 nm（光解前），~510/~610 nm（含DNA/RNA，光解后）

检测类型/选项 活/死区分，活力PCR检测

储存条件 1毫克固体，储存在2至8°C，100uL在水中，储存在-10至-35°C

检测方法/读数 聚合酶链反应/链核酸链反应

关于PMA（单氮丙啶）

PMA染料是Biotium科学家发明的DNA修饰剂。它是一种光反应性染料，以高亲和力与DNA结合。在用可见光光解时，PMA染料与DNA共价连接。这种修饰的DNA不能通过PCR扩增。染料被设计为细胞膜不透水。因此，在活细胞和死细胞群体中，只有死细胞由于细胞膜受损而容易受到DNA修饰的影响。PMA染料的这一独特特性使其在qPCR选择性检测活细菌方面非常有用。

自Biotium开发PMA染料以来，已有数百篇关于该染料在许多样品类型中的使用，包括数十种细菌菌株，生物膜，酵母，真菌，病毒和真核细胞。它已被用于食品和水安全以及环境测试等应用，并已与qPCR，下一代测序（NGS），桑格测序和环介导的等温扩增（LAMP）结合使用。

https://www.amyjet.com/products/BTM-40019.shtml

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PMA-qPCR/Viability PCR工作原理&相关推荐

PMA是比较中肯的v-PCR 染料，并已在数百份同行评审的论文和大量细菌、真菌和病毒菌株中得到验证。早期研究侧重于细菌中的v-PCR，验证了在数十种不同细菌菌株中的程序，例如大肠杆菌、李斯特菌、军团菌、乳酸杆菌、结核分枝杆菌、衣原体、幽门螺杆菌以及许多其他与人类健康相关的菌株. v-PCR 在细菌中的应用非常广泛，但也有许多引文在酵母和真菌、病毒以及各种其他细胞类型（如古生菌、变形虫和寄生虫）中使用 v-PCR。

已验证的Viability PCR应用实例：

微生物组研究

环境测试

益生菌研究

临床测试

食品和水卫生

葡萄酒发酵

微生物测序

V-PCR的工作原理

PMAxx 和PMA是对DNA具有高亲和力的光活性染料。染料插入dsDNA并在暴露于强烈可见光时形成共价键。该反应通过在纯化过程中去除修饰的DNA和通过DNA聚合酶抑制模板扩增的组合来抑制修饰的DNA模板的PCR扩增。由于染料是细胞膜不可渗透的，当用染料处理含有活细菌和死细菌的样品时，只有细胞膜受损的死细菌才容易受到DNA修饰。在qPCR反应中，死细胞DNA将显示出延迟扩增和比活细胞更高的Ct。

活性PCR染料，如PMAxx 或PMA是膜不渗透的，这使它们具有死细胞特异性。一旦进入死细胞，它们就会与DNA结合。暴露在强烈的可见光下会使染料具有活性，并使它们共价附着在DNA上，这种DNA修饰防止了随后的PCR反应中的扩增。

v-PCR工作流程：

v-PCR的基本工作流程如下图所示（详细协议可在产品页面上找到）。它适用于许多不同的样本类型和实验设置。对于少量培养物，样品可以在微型离心管中制备，并在PMA-Lite 2.0 LED光解装置中暴露在光下。

艾美捷 Viability PCR入门套件

可定制的 Viability PCR 入门套件包含使用 PMA 或 PMAxx 活力染料和 qPCR 选择性检测活细胞所需的材料。这些试剂盒可用于您选择的任何细胞类型（有关已发布的经过验证的细胞类型，请参阅PMA/PMAxx 参考列表和经过验证的细菌菌株列表）。所有试剂盒均包含 Forget-Me-Not EvaGreenqPCR Master Mix，以及您选择的 PMA 或 PMAxx 染料。您还可以选择带有或不带有革兰氏阴性细菌增强剂（不适用于其他细胞类型）的试剂盒。用户将需要提供自己的引物来扩增他们感兴趣的物种（请参阅此 博客文章 用于引物设计考虑）。每个试剂盒包含的试剂足以处理 80 种细菌培养物并进行200次PCR反应。

试剂盒包括：

PMA 染料或 PMAxx 染料

Forget-Me-Not EvaGreen qPCR预混液

ROX 参考染料

PMA 增强剂（仅限革兰氏阴性菌株）

相关推荐：

名称 货号 活性染料

Viability PCR Starter Kit with PMA 31075

Viability PCR Starter Kit with PMAxx 31075-X

Viability PCR Starter Kit with PMA and Enhancer 31076

Viability PCR Starter Kit with PMAxx and Enhancer 31076-X

https://www.amyjet.com/featured/PMA-qPCR.shtml

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Biotium新型染料：PMAxx Dye, 20 mM in H₂O

PMAxx™是一种光反应性DNA结合染料，用于活性PCR。它由Biotium科学家设计，是流行的活性染料单叠氮丙啶（PMA）的替代品。

关于PMAxx™

PMAxx™染料是一种用于活性PCR的DNA修饰剂，由Biotium的科学家发明。PMAxx是流行的活性染料PMA（单氮丙啶）的新版本和改进版本。与PMA一样，PMAxx™是一种光反应性染料，以高亲和力与DNA结合。在用可见光光解时，PMAxx染料™与DNA共价连接。这种修饰的DNA不能通过PCR扩增。PMAxx染料™被设计为细胞膜不透水。因此，在活细胞和死细胞群体中，只有死细胞由于细胞膜受损而容易受到DNA修饰的影响。这种独特的功能使PMAxx在™通过qPCR选择性检测活细菌方面非常有用。

PMAxx由™ Biotium科学家设计，是PMA的替代品，与所有现有的PMA协议兼容，但具有非常好的活性。虽然PMA通常可以通过qPCR区分活细菌和死细菌，但它并不能完全消除死细胞DNA中的PCR产物。这可能会产生误报结果。Biotium的新型染料PMAxx™在消除死细胞DNA的PCR扩增方面更有效，因此提供了活细菌和死细菌之间的极佳区分。

艾美捷PMAxx™ Dye, 20 mM in H₂O 属性：

#40069

活性染料 PMAxx™

储存条件 储存在 -10 至 -35 °C

激发/发射 Abs = 464 nm（光解前），~510/~610 nm（含DNA/RNA，光解后）

检测类型/选项 活/死区分，活力PCR检测

检测方法/读数   聚合酶链反应/链核酸链反应

PMAxx™ Dye, 20 mM in H₂O 文献参考：

1. Front Microbiol (2016) Dec 22; 7: 2066 doi: 10.3389/fmicb.2016.02066

2. Int J Food Microbiol (2016) Jul 16; 229: 1-6 doi:10.1016/j.ijfoodmicro.2016.04.010

3. J Appl Microbiol (2017) Apr;124(4):958-964 doi:10.1111/jam.13519

4. Microbiome (2017) 5, 86 doi:10.1186/s40168-017-0285-3

5. Int J Food Microbiol (2018) 269, 64-74 doi:10.1016/j.ijfoodmicro.2018.01.015

6. PLoS One (2018) 13, e0196525 doi:10.1371/journal.pone.0196525

7. J Environ Qual (2018) 47, 1139-1145 doi:10.2134/jeq2017.12.0485

8. Front Microbiol (2018) 9, 1973 doi:10.3389/fmicb.2018.01973

9. Int J Food Microbiol (2018) 266, 1-7 doi:10.1016/j.ijfoodmicro.2017.11.011

10. Food Environ Virol (2019) 11, pp350–363 doi:10.1007/s12560-019-09392-2

11. Parasitol Res (2019) 118, 999-1010 doi:10.3389/fmicb.2018.01973

https://www.amyjet.com/products/BTM-40069.shtml

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常规型T7 RNA聚合酶：37℃高效体外转录

噬菌体T7 RNA聚合酶是一种DNA依赖性RNA聚合酶，对T7噬菌体具有高度特异性。T7 RNA聚合酶利用含有T7启动子序列的双链DNA作为模板，NTPs作为底物来合成与启动子下游DNA互补的RNA。常规型T7 RNA聚合酶可在37℃对模板进行高效体外转录。

艾美捷 T7 RNA聚合酶：

Cat #: C-BSM0124

Size: 5000 U / 25000 U

Storage: -20°C

T7 RNA聚合酶组分：

活动单元的定义

在37°C下，一个单位的酶在60分钟内将1nmol的ATP结合到多核苷酸部分中。

T7 RNA聚合酶应用：

1.单链RNA的合成，包括mRNA、siRNA、gRNA和其他类型RNA的前体。

2.标记或未标记的高度特异性RNA探针的合成。

3.使用帽类似物合成帽状信使核糖核酸。

质量控制

净化

SDS-PAGE检测结果大于95%。

核酸内切酶残基

将20U的T7 RNA聚合酶与超螺旋质粒DNA在37°C下孵育4h，DNA电泳未检测到质粒的变化。

DNA酶残基

T7 RNA聚合酶与双链DNA在37°C下孵育16h，DNA电泳未检测到DNA的变化。

RNase残基

将T7 RNA聚合酶与RNA在37°C下孵育1小时，电泳中未检测到RNA降解。

https://www.amyjet.com/products/C-BSM0124-5000U.shtml

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耐热型T7 RNA聚合酶，高度特异性RNA探针合成

耐热T7 RNA聚合酶是一种基因工程热稳定的T7 RNA多聚酶，对噬菌体T7启动子具有高度特异性，并且可以在比野生型噬菌体T7 RNA多聚酶更高的温度下反应。热稳定T7 RNA聚合酶在37～52°C的温度下可在体外有效转录。

艾美捷耐热型T7 RNA聚合酶：

Cat #: C-BSM0125

Size: 5000 U / 25000 U

Storage: -20°C

耐热型T7 RNA聚合酶组分：

组件     C-BSM0125-5000U       C-BSM01250-25000U

耐热T7 RNA聚合酶（50 U/μl）  5000 U       25000 U

10xT7 RNA聚合酶缓冲液           1.25 ml       1.25 ml

下图为耐热型T7 RNA聚合酶在高温下（52℃）的体外转录活性:

Lane 1: Thermostable T7 RNA Polymerase

Lane 2:T7 RNA Polymerase

Lane 3. 竞品对照

Lane 4：阴性对照

Lane 5：1 Kb DNA matrker

活动单元的定义：一个单位的酶在50°C下60分钟内将1 nmol的ATP结合到多核苷酸部分中。

耐热型T7 RNA聚合酶应用：

1.单链RNA的合成，包括mRNA、siRNA、gRNA和其他类型RNA的前体。

2.标记或未标记的高度特异性RNA探针的合成。

3.使用帽类似物合成帽状信使核糖核酸。

https://www.amyjet.com/products/C-BSM0125-5000U.shtml

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PerCP荧光蛋白，灵敏度高，荧光时间长

PerCP（Peridinin叶绿素蛋白复合物）是从藻科植物中分离得到的。它具有极高的灭绝系数、高的量子效率和大的斯托克斯位移。氩激光在488nm处激发良好，最大发射峰在677nm处。PerCP蛋白通常用于荧光免疫标记，特别是涉及荧光活化细胞分选（FACS）的应用。它的花青串联缀合物（如BD开发的PerCP-Cy5.5）可以用标准488nm激光激发，并以更长的波长发出远红色，用于细胞的多色流式细胞术分析。

艾美捷PerCP [多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物]：

Cat #: B-CHM304

Size: 10mg / 100mg / 1g

Storage: Store at 4°C protected from light, do not freeze.

PerCP [多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物]特性：

形式：硫酸铵沉淀

分子量：35500道尔顿

光谱特性：Ex/Em=488/675±5 nm

纯度：Amax/A280>4.2

定量方法：为了获得PerCP的精确重量，我们建议使用PerCP的消光系数作为参考（即[PerCP]=0.086×A482，其中[PerCP]是浓度，单位为mg/ml，A482是在482nm波长下的吸收值，A482应在0.3至0.8的范围内。

运输和储存

储存条件：4℃避光保存，不结冰。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少12个月。

PerCP [多甲藻黄素-叶绿素-蛋白质复合物]优势：

1.在宽pH范围内具有宽吸收光谱，更容易选择合适的激发波长，导致在激发期间具有特定荧光发射峰值的有效荧光发射；

2.与其他小分子染料（Cy、Alexa、FITC）相比，其吸光度和荧光量子产率较高；荧光稳健稳定，灵敏度高；

3.荧光背景很低，很难猝灭，荧光可以持续很长时间；

4.多个结合位点可与各种生物和合成材料偶联，非特异性吸附较少；易于与小分子染料、抗体、生物素、抗生物素、免疫蛋白和其他物质结合，产生荧光探针。通过常规的蛋白质交联技术，藻胆蛋白可以在不改变其光谱特性的情况下容易地与抗体和其他蛋白质偶联。

5.结构均匀，分子量确定，源生物的连续培养和高纯度确保了批次之间的性能一致，具有非常高的水溶性。无毒副作用，具有去甲肾上腺素活性，操作使用非常安全。

https://www.amyjet.com/products/B-CHM304-1mg.shtml